上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的:探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Sm ad7对TGF-β1作用下大鼠腹膜间皮细胞Sm ad2表达的影响。方法:通过脂质体介导的方法,将表达Sm ad7的重组质粒(PCDNA3-Sm ad7)转染培养的大鼠腹膜间皮细胞,分别培养于不同浓度TGF-β1培养液(0、1.25、2.5和10μg/L),用RT-PCR及W estern b lotting的方法检测不同时间(0、5、15、30、60和120 m in)Sm ad2、Sm ad7表达的水平。结果:正常间皮细胞Sm ad2 mRNA和蛋白在TGF-β1刺激后5 m in开始表达,呈时间依赖性,在30 m in达到高峰,而后逐渐减弱;Sm ad7 mRNA和蛋白也在TGF-β1刺激后5 m in可见表达,但此后逐渐减弱,30 m in达到最低,60 m in又开始逐渐增强。Sm ad2和Sm ad7mRNA和蛋白,随TGF-β1浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Sm ad7 mRNA和蛋白表达显著上调,并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β1刺激下,Sm ad2 mRNA及蛋白的表达均低下,刺激0、5、15、30、60和120 m in后Sm ad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%(P<0.05)。Sm ad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%(P<0.05)。结论:上调表达抑制性信号蛋白Sm ad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Sm ad2的表达和活性,提示Sm ad7可能对TGF-β1起反向调控作用。

转化生长因子-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及Smad3、Smad7表达的影响

目的:观察转化生长因子(TGF)-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖能力及其Smad3、Smad7蛋白表达的影响。方法:体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,四甲基氮唑比色法检测细胞增殖能力变化,蛋白印迹法检测Smad3、Smad7蛋白的表达变化。结果:JEG-3细胞对TGF-β1的诱导作用表现为良好的浓度效应和时间效应。100、200μg/LTGF-β1作用后,细胞增殖率显著增加(P<0.01),Smad3蛋白的相对表达量增加(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白无明显改变(P>0.05);同时100μg/LTGF-β1作用12h后,细胞增殖率显著增加,Smad3蛋白相对表达量增加(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白表达无改变(P>0.05)。结论:外源性TGF-β1能够促进绒毛膜癌JEG-3细胞的增殖,具有良好的浓度效应和时间效应;绒毛膜癌JEG-3细胞逃逸TGF-β1介导的生长抑制作用,可能是由于TGF-β1/Smads信号通路中的Smad3、Smad7蛋白发生异常而致。

黄芪注射液对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤中Smad3、Smad7表达的影响

目的探讨黄芪注射液对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中Smad3、Smad7表达的影响和机制。方法采用结扎左冠状动脉的方法制备心肌缺血再灌注损伤动物模型。32只健康成年SD大鼠,体质量(230±20)g,平均分为假手术组、缺血再灌注组、辛伐他汀组和黄芪预处理组。通过免疫组织化学和RT-PCR,分别测定Smad3蛋白、Smad7蛋白及Smad3mRNA、Smad7mRNA的表达。计算各组中心肌细胞的凋亡率。结果与假手术组相比,缺血再灌注组心肌细胞的凋亡率明显增加(P=0.000),并且Smad3蛋白和Smad3mRNA表达增加(P=0.000),Smad7蛋白和Smad7mRNA表达减少(P=0.000);与缺血再灌注组相比,黄芪注射液组(P=0.000)和辛伐他汀组(P=0.000)可明显降低心肌细胞的凋亡率;Smad3蛋白和Smad3mRNA表达减少(P=0.000);而Smad7蛋白和Smad7mRNA表达增加(P=0.000)。结论黄芪注射液可以上调SD大鼠缺血再灌注损伤时心肌细胞Smad7蛋白和Smad7mRNA表达,下调Smad3蛋白和Smad3mRNA表达。

糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子和Smad7蛋白的表达

目的探讨糖尿病肾病(DN)时肾小管上皮细胞转化以及肝细胞生长因子(HGF)、Smad7蛋白在其中可能发挥的作用。方法60只Wistar大鼠均行右肾切除术,伤口愈合后随机分为右肾切除对照组和糖尿病组。腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型。采用免疫组化法检测角蛋白18(CK18)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、HGF和Smad7蛋白的表达;流式细胞术检测αSMA和HGF的表达;蛋白质免疫印迹法检测Smad7蛋白的表达。结果糖尿病组较对照组CK18的表达降低,αSMA的表达上升,HGF和Smad7蛋白的表达表现为先上升后下降。结论糖尿病时,肾小管上皮细胞可发生表型转化,转化为肌成纤维细胞。HGF和Smad7蛋白表达下降可能与该模型中肾小管上皮细胞转化有关。

丹参酮ⅡA对肝癌细胞MHCC97-HSmad3/Smad7蛋白及上皮间质转化的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞MHCC97-H Smad3、Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白Ecadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响。方法:10μM丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞,实时定量PCR检测细检测Smad3、Smad7和snail的m RNA表达;用不同浓度丹参酮ⅡA及10%小牛血清对照组培养肝癌细胞MHCC97-H,48 h后,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力。结果:10μM丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞,不同时间点检测Smad3、Smad7和snail的m RNA表达:结果显示,与0 h相比,48 h及72 h Smad7的表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Smad3及snail的差异无统计学意义。不同浓度丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞48 h,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、snail、E-cadherin、Ep CAm、N-cadherin和Vimentin蛋白表达:结果显示,与对照组相比,高浓度丹参酮ⅡA组(20μM)48 h的p-Smad3、Snail和N-cadherin、Vimentin明显降低,Smad7、E-cadherin和Ep CAM明显升高(P<0.05)。中浓度丹参酮ⅡA组(10μM)48 h的Smad7、E-cadherin和Ep CAM升高;p-Smad3、snail、Ncadherin和Vimentin降低(P<0.05)。低浓度丹参酮ⅡA组(5μM)48 h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P<0.05);而Smad3、p-Smad3及snail的结果与对照组无明显差异(P>0.05)。不同浓度的丹参酮ⅡA组和对照组(DMSO)Smad3的蛋白表达无影响。不同浓度的丹参酮ⅡA组均可以减少p-Smad3和增加E-cadherin的表达,且随着丹参酮ⅡA浓度增高p-Smad3的表达逐渐减少,E-cadherin的表达逐渐增加。划痕法结果显示,与对照组比较,24 h后中浓度和高浓度丹参酮ⅡA组肝癌细胞的划痕愈合较慢,差异均有统计学意义(P<0.05);48 h后中浓度和高浓度丹参酮ⅡA组与对照组相比,肝癌细胞的划痕愈合明显减慢,差异有统计学意义(P<0.01);且同等浓度丹参酮ⅡA组肝癌细胞的划痕愈合与24 h相比较,48 h肝癌细胞的划痕愈合减慢。transwell显示,与对照组相比,中浓度和高浓度丹参酮ⅡA处理细胞48 h可明显减少细胞的侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。而低浓度丹参酮ⅡA无明显影响,差异无统计学意义。结论:丹参酮ⅡA能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与与抑制Smad3蛋白磷酸化、上调Smad7蛋白,并抑制上皮间质转化有关。

Smad7在Sox9增强BMP2成软骨效应中的作用

目的探讨Smad7在Sox9增强BMP2成软骨效应中的作用和机制。方法将小鼠骨髓间充质干细胞(C3H10T1/2)作为种子细胞,重组腺病毒Ad-BMP2和/或Ad-Sox9感染细胞,Ad-GFP感染细胞为对照。采用Real-time PCR、免疫细胞化学和Western blot分别检测感染后各组Smad7 mRNA表达水平和蛋白表达水平。采用Real-time PCR检测与Smad7相关因子MMP13与OPN mRNA的表达。结果 BMP2+Sox9组感染细胞7、11 d时,Smad7 mRNA和蛋白表达水平均明显低于BMP2组(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示,BMP2+Sox9组Smad7染色明显弱于BMP2组;同时BMP2+Sox9组中与软骨最终成熟因子OPN与MMP13的表达均低于BMP2组(P<0.05)。结论在BMP2诱导间充质干细胞成软骨分化中,高表达的Smad7可被Sox9抑制,并抑制Smad7相关因子MMP13与OPN表达,从而解除了Smad7对BMP2成软骨的抑制作用,阻止了软骨细胞最终成熟骨化,有利于保持软骨发育与正常状态。

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5 mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水(0.25 mL/只),从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃(13410 mg/kg);对照组、模型组给予生理盐水灌胃(2 mL/只);激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25 mg/kg),于给药后的第14、28天分别处死,称取肺重计算肺系数;取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化情况;免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果进入结果分析的大鼠44只:①大鼠纤维化程度比较:模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重,且胶原纤维沉积较多;中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻;激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较:中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。

SMAD7调控内皮间质转化可预防跟腱损伤后的异位骨化

背景:现有的研究结果证明,内皮细胞向间质细胞转化(End MT)在异位骨化病程中起主要作用。目的:基于SMAD7基因在阻止肌成纤维细胞转化等内皮-间质转化进展中的潜能,验证其是否是异位骨化潜在的治疗靶点。方法:构建了过表达SMAD7的慢病毒颗粒,并在大鼠主动脉内皮细胞中测定了其最佳滴度和转染效率。随后,将该病毒颗粒注入构建的大鼠跟腱损伤模型中,对照组注射生理盐水。使用qPCR和蛋白印迹实验分析了损伤处内皮和间质标志物的表达,采用X射线和组织染色观察异位骨化病程转化。结果与结论:(1)局部注射转染SMAD7基因的病毒载体可引起内皮细胞标志物(CD31,VE-cadherin)发生上调,同时间质细胞标志物(N-cadherin,vimentin)发生下调,提示SMAD7的局部高表达阻断了内皮-间质转化改变。这种表达差异在造模后10周时比在造模后6周时更明显;(2)X射线片和组织染色显示,相比对照组,注入表达SMAD7的慢病毒后,肌腱组织中骨化结构缺失;(3)因此认为,促进局部SMAD7的高表达可用来预防术后异位骨化形成,而不影响正常的伤口愈合过程。

Smad7,Smad3和Smad2在DEHP诱导的尿道下裂大鼠阴茎中的表达

目的研究Smads(7,3和2)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠随机分为2组:实验组(将DEHP溶于1.5 mL大豆油中灌胃大鼠)和对照组(以1.5 mL大豆油灌胃大鼠),每组20只,自孕12 d(gestation day,GD12)至19 d(GD19)连续每天定时给药1次。至GD20行剖宫产取出雄性胎鼠,切取阴茎组织,采用实时定量PCR和免疫组化法分别检测胎鼠阴茎中Smad7,Smad3和Smad2三者mRNA和蛋白质表达水平。结果经qP CR检测分析后发现,Samd7,Smad3和Smad2三者mRNA在正常对照组相对于内参GAPDH的表达分别是1.00,0.84和1.14,在DEHP暴露组其相对表达分别是1.87,1.36和1.49,且三者在实验组的表达与正常对照组比较,均升高(P值分别为<0.001,0.041和0.021);观察实验组Smad7和p-Smad2/3蛋白表达水平亦有增加趋势。结论DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中Smads(7,3和2)的过度表达有关。

HNSCC患者肿瘤组织Smad7蛋白、CXCR4蛋白的表达变化及其意义

目的探讨头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)组织中的Smad7蛋白、趋化因子4(CXCR4)蛋白的表达变化及其意义。方法选取我院2016年1月-2017年1月病理科收集的80例HNSCC组织(HNSCC组)、对应部位的正常头颈部组织80例(对照组),采用免疫组化染色检测两组标本中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率,并分析二者与HNSCC组织中的病理学分化程度、TNM分期、淋巴结转移、病灶直径之间的关系。结果HNSCC组标本中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率分别为72.50%、68.75%,对照组的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率分别为7.50%、10.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);低分化、TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的HNSCC组织中的Smad7蛋白、阳性率显著的高于高中分化、TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的HNSCC组织(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的HNSCC组织中的Smad7蛋白、阳性率显著的高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的HNSCC组织(P<0.05)。结论HNSCC组织中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白的表达水平升高,并且与肿瘤的病理学特征具有一定的相关性。

miR-21及其靶基因RECK、Smad7在心脏性猝死心肌组织中的表达及其意义

目的 观察微小RNA-21(miR-21)与伴有Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)、Smad7在心脏性猝死(SCD)心肌组织中的表达水平,并探讨其意义。方法 选择因SCD的20例心脏标本作为SCD组;选取20例死因为非心脏疾患的心脏标本作为对照组。应用免疫组织化学染色方法分别检测两组心肌组织中RECK和Smad7表达,采用荧光定量PCR方法检测两组心肌组织中miR-21、RECK和Smad7的表达。结果 免疫组化染色结果显示,两组心肌组织中RECK、Smad7的表达比较,差异均有统计学意义(Z=-4.008、-2.939,P<0.05);两组心肌组织中RECK与Smad7的表达水平呈正相关(r=0.706,P<0.05)。荧光定量PCR方法检测结果显示,SCD组心肌组织中miR-21与RECK、Smad7相对表达量均呈负相关(r=-0.608、-0.681,P<0.05)。结论 SCD心肌组织中miR-21高表达,RECK、Smad7低表达,miR-21与RECK、Smad7联合应用有望作为诊断SCD较为客观的指标。

大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义

目的研究大鼠慢性同种移植肾病肾组织中Smad7的表达及意义。方法制作原位肾移植大鼠模型，分别于4周、8周、12周、16周及24周处死大鼠，检测24h尿蛋白定量、肾功能；移植肾组织标本切片行光镜检测；免疫组织化学与免疫印迹、逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织中Smad7蛋白、Smad7mRNA的表达；免疫印迹方法检测肾组织p-smad2／3蛋白的表达水平，逆转录-多聚酶链反应方法检测肾组织转化生长因子-81mRNA的表达。结果移植组大鼠尿蛋白定量、血清肌酐水平于移植后16周时显著增高，24周时更为显著。Smad7蛋白在移植组逐渐降低，24周时降至最低，为对照组的15％。Smad7mRNA在移植后4周即升高，随着移植时间逐渐延长，24周时为对照组的2．73倍（P〈0．01）；p-smad2／3在移植后随疾病进展逐渐升高，24周时达高峰。免疫组织化学结果显示Smad7主要表达在小管间质。相关分析显示，肾移植大鼠Smad7蛋白表达水平与24h尿蛋白定量、血清肌酐水平、肾间质纤维化程度呈负相关（P〈0．05，P〈O．01）。结论Smad7蛋白表达下调在慢性同种移植肾病发病机制中起重要作用。

BEP2D细胞恶性转化过程中Smad7基因对MAPK信号通路的调控

背景与目的:Smad7基因是转化生长因子(transforminggrouthfactor-茁,TGF-β)信号通路的抑制分子,有研究表明TGF-β通过活化SMAD通路和ras/MEK/ERK通路来诱导某些基因的表达。本研究旨在探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D经辐射诱发恶性转化过程中,作为SMAD蛋白家族的抑制分子Smad7是否参与TGF-β对MAPK信号通路的调控。方法:将人工合成的Smad7siRNA及Smad7真核表达载体与pTet-Elk,pTet-Jun反式激活载体、报告基因荧光素酶共转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过报告基因荧光素酶的表达丰度来检测Smad7对MAPK信号通路的调控。结果:永生化BEP2D细胞中,TGF-β刺激之后,Elk和Jun磷酸化活性升高(PElk=0.033,PJun=0.016);Elk或Jun同Smad7真核表达载体共转染之后,Elk磷酸化活性升高,Jun磷酸化活性降低(PElk=0.017,PJun=0.028);Elk或Jun同Smad7-siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低,Jun磷酸化活性升高(PElk=0.018,PJun=0.005)。恶性化BERP35T2细胞中,TGF-β刺激之后,Elk磷酸化活性增强(P=0.006),Elk同Smad7siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低(P=0.000);恶性化细胞中几乎检测不到Jun的活性。结论:在BEP2D细胞发生恶性转化过程中,Smad7基因干预MAPK信号通路,使ERK和JNK磷酸化活性的平衡失调,导致促增殖作用强于生长抑制作用,从而有助于细胞向恶性方向发展。

积雪草酸对HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达的影响

目的检测积雪草酸对HSC-T6细胞Smad-7和PPARγ的mRNA表达的影响,探讨积雪草酸抗肝纤维化的分子生物学机制。方法用MTT实验检测积雪草酸对HSC-T6细胞的增殖抑制作用,计算抑制率,确定积雪草酸作用浓度;设置空白对照组与积雪草酸干预组,用半定量RT-RCR检测两组HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA表达差异。结果积雪草酸抑制HSC-T6细胞的增殖,药物浓度为10、20、30、40、50、70、90μmol/L时,抑制率分别为7.47%、12.42%、13.97%、21.32%、47.31%、51.18%、60.36%。空白对照组和积雪草酸干预组的半定量RT-PCR的结果分别为:Smad7/GAPDH mRNA空白对照组为0.267±0.037,积雪草酸干预组为0.358±0.035;PPARγ/GAPDH mRNA空白对照组为0.157±0.054,积雪草酸干预组为0.570±0.066。两组结果间比较差异具有统计学意义,P<0.05。结论积雪草酸可以上调HSC-T6细胞Smad7和PPARγ的mRNA的表达,从而抑制HSC-T6细胞合成和分泌胶原,改善肝纤维化的病理表现。

Smad7蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的:检测Smad7蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及临床意义,探讨其在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用。方法:利用免疫组织化学染色,检测31例原发性口腔鳞癌患者肿瘤组织及癌旁标本中Smad7的表达,并分析其与淋巴结转移之间的关系;利用CCK-8及细胞划痕实验检测Smad7基因沉默对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响;通过Smad7 si RNA干扰HN4细胞,影响Smad7蛋白的表达,利用免疫印迹及q RT-PCR检测其对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关指标蛋白及RNA表达的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在口腔鳞癌肿瘤组织中,Smad7蛋白在细胞核和细胞质的表达均显著高于对应的癌旁组织。Smad7的表达与患者颈淋巴结转移显著相关。Smad7 si RNA干扰HN4细胞后,细胞的增殖能力减弱,迁移能力增强。Smad7 si RNA干扰使得HN4细胞神经钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达量升高,而上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量下降,N-cadherin蛋白及波形蛋白(Vimentin)RNA表达量显著升高,与对照组相比有显著差异。结论:Smad7的表达与口腔鳞癌患者颈淋巴结转移相关,且Smad7在口腔鳞癌肿瘤细胞的增殖及侵袭转移中发挥重要作用。

SMAD7在多发性骨髓瘤中的表达及对细胞增殖和耐药的影响

目的·分析Sma和Mad相关蛋白7 (Sma-and Mad-related protein 7,SMAD7)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达,以及其对MM细胞的增殖和耐药的影响。方法·获取基因表达综合(gene expression omnibus,GEO)数据库中的3个数据集,分析SMAD7在健康捐献者和MM患者中的差异表达。通过收集8例健康捐献者和20例MM患者的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)检测骨髓CD138+细胞中SMAD7 mRNA的相对表达,并分析其与患者临床资料的关系。在MM细胞KMS11中过表达SMAD7后,通过CCK8实验、细胞周期实验观察SMAD7对MM细胞增殖的影响。采用不同浓度的硼替佐米处理过表达SMAD7的KMS11细胞后,观察SMAD7对MM细胞的耐药影响及细胞的凋亡情况。结果·数据集中SMAD7表达数据的分析显示,与健康捐献者相比,SMAD7在MM患者中表达较高(均P<0.05)。qPCR检测结果显示,SMAD7 mRNA相对表达水平在MM患者中有上调(P=0.002),但未显示出与临床资料间存在关联。与对照细胞相比,过表达SMAD7后,KMS11的细胞活力均较高(均P<0.05);且细胞周期分布亦发生了变化,S期细胞的比例有所下降(P=0.016)、G2/M期细胞的比例有所上升(P=0.005);而经硼替佐米处理后,过表达SMAD7细胞的药物敏感性及凋亡水平均较低。结论·SMAD7在MM中表达上调,过表达SMAD7可促进MM细胞的增殖和耐药能力。

头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白的表达变化及意义

目的观察Smad7及Smad4蛋白在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法分别对头颈部鳞状细胞癌组织、癌旁组织、活检留取的正常头颈部组织中的Smad7蛋白、Smad4蛋白、TGF-β1表达进行检测,分析三者间表达及其与肿瘤临床病理参数的关系。结果 1 TGF-β1和Smad7蛋白在肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常组织(F分别为5.71、7.31),而Smad4蛋白在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织和正常组织(F为14.92),P均<0.05。2随肿瘤分化程度增高,TGF-β1及Smad7蛋白表达呈降低趋势(F分别为11.2、12.8)、Smad4蛋白呈升高趋势(F为7.91),P均<0.05;Smad4蛋白表达与肿瘤直径呈负相关、Smad7蛋白表达与肿瘤直径呈正相关(P均<0.05),TGF-β1表达与肿瘤直径无明显相关(P>0.05);Smad4蛋白表达在淋巴结转移者明显低于无转移者(P<0.05),有无淋巴结转移者Smad7蛋白及TGF-β1表达无显著差异(P>0.05)。3 Smad4蛋白表达与TGF-β1呈负相关(r=-0.32),与Smad7蛋白呈正相关(r=0.39),P均<0.05。结论头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白表达异常,且可能通过调控上皮—间质转化参与肿瘤的侵袭、分化;检测两者(尤其是Smad4蛋白)可为临床分期、预后评估提供依据。

下调miR-25对高糖诱导视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞Smad7和VEGF表达的影响

目的研究miR-25在高糖条件下人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞中表达情况,及下调miR-25对ARPE-19细胞中Smad7和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,采用葡萄糖(30 mmol/L)处理细胞模拟高糖状态,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-25表达水平;采用Lipofectamine TM3000试剂盒进行转染,将ARPE-19细胞分为miR-25低表达(antagomir)组、阴性对照(NC)组、高糖(HG)组及正常葡萄糖(NG)组。转染后48 h,光学显微镜观察细胞形态,CKK-8法检测细胞增殖情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ARPE-19细胞E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mRNA表达;蛋白免疫印记(WB)检测E-cad、α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF、Smad7蛋白表达情况。结果与NG组比较,HG组ARPE-1细胞miR-25表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-25 antagomir后,与HG组和NC组比较,ARPE-19细胞miR-25表达显著下调(P<0.05)。与NG组比较,HG组、NC组ARPE-19细胞变长呈纺锤形细胞,细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达上调(P<0.05),E-cad、Smad7表达下调(P<0.05);与HG组、NC组比较,antagomir组纺锤形ARPE-19细胞数量减少,细胞中α-SMA、COL-Ⅰ、VEGF表达下调(P<0.05),E-cad、Smad7表达上调(P<0.05)。结论高糖条件下,下调miR-25可抑制VEGF表达,促进Smad7表达,抑制人视网膜色素上皮细胞纤维化。

B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及临床意义。方法收集82例ESCC组织标本及其癌旁正常组织石蜡标本,运用免疫组织化学方法检测B7-H3及Smad7蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中B7-H3 mRNA的表达水平。结果 B7-H3在ESCC组织中的表达阳性率高于癌旁正常组织,Smad7蛋白表达阳性率低于癌旁正常组织(P<0.05)。ESCC组织中B7-H3和Smad7蛋白的表达呈负相关(rs=-0.294,P=0.005)。ESCC组织中B7-H3蛋白表达与临床分期、分化程度有关(P<0.05),Smad7蛋白表达与分化程度有关(P<0.05)。结论 ESCC组织中B7-H3蛋白表达上调,Smad7蛋白表达下调。B7-H3和Smad7蛋白的异常表达可能参与了ESCC的发生发展过程。

OGG1与Smad7蛋白相互作用的具体区域鉴定

目的体外探究8-氧鸟嘌呤DNA糖化酶1(OGG1)蛋白和Smad家族成员7(Smad7)蛋白相互作用的具体区域。方法利用原核表达系统表达OGG1和Smad7的蛋白截段体,通过GST蛋白纯化和pull-down实验验证两个蛋白不同截段体间的相互作用。结果将OGG1与Smad7进行pull-down实验,发现两者存在相互作用。将含有1-346个氨基酸(1-346 aa)全长片段的OGG1及其截段体1-242 aa、1-138 aa、1-63 aa和34-346 aa,与Smad7全长(1-428 aa)进行pull-down实验,发现OGG1全长(1-346 aa)及其截段域(34-346 aa)与Smad7具有相互作用。将OGG1截段域(34-346 aa)与Smad7全长(1-428 aa)及其截段体1-308 aa、1-240 aa和1-128 aa进行pull-down实验,发现只有Smad7截段体1-128 aa与OGG1截段体34-346 aa不存在相互作用。结论初步判断OGG1(34-346 aa)和Smad7(128-240 aa)可能为OGG1与Smad7发生相互作用的区域。