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Expression,Purification and Activity Detection of Structural Protein VP1 of Foot-and-Mouth Disease Virus Serotype A
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作者 LU Qing-xia LIU Chang +9 位作者 XING Guang-xu HAO Hui-fang JIN Qian-yue GUO Guan-peng WANG Fang-yu YANG Su-zhen YANG Ji-fei LIU Yun-chao DENG Rui-guang ZHANG Gai-ping 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2013年第5期205-209,226,共6页
The paper was to obtain the VP1 protein of FMDV serotype A with high activity. With recombinant plasmid pMD19A-T-vp1 as the tem- plate, vpl gene fragment amplified by PCR was connected into prokaryotic expression vect... The paper was to obtain the VP1 protein of FMDV serotype A with high activity. With recombinant plasmid pMD19A-T-vp1 as the tem- plate, vpl gene fragment amplified by PCR was connected into prokaryotic expression vector pET28a to construct recombinant plasmid pET-A-vpl. The E. coli BL21 (DE3) strain containing recombinant plasmid pET-A-vpl were induced by IPTG. SDS-PAGE showed that VP1 protein was ex- pressed in the form of inclusion body, and its molecular weight was about 29 ku. Based on the optimizing IPTG concentration and expression time, the largest expression of VP1 protein was induced by 0.3 mmol/L IPTG for 6 h at 37 ℃. Western-Blot analysis indicated that the expression of VP1 protein could be specifically recognized by positive serum of FMDV serotype A. ELISA test showed that VP1 inclusion body protein had high activity after purification by washing and renaturation by urea concentration gradient dialysis. 展开更多
关键词 Foot-and-mouth disease virus serotype A vp1 protein Prokaryotic expression Purification of protein Activity analysis
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Biological Effects of Chlamydiaphage phi CPG1 Capsid Protein Vp1 on Chlamydia Trachomatis In Vitro and In Vivo
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作者 王生 郭睿 +5 位作者 郭媛丽 邵丽丽 刘洋 魏世娟 刘原君 刘全忠 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2017年第1期115-121,共7页
The researches on chlamydia in recent years show that chlamydia bacteriophage may be a potential and effective means to solve the clinical infection of chlamydia trachomatis(Ct). We investigated the biological effec... The researches on chlamydia in recent years show that chlamydia bacteriophage may be a potential and effective means to solve the clinical infection of chlamydia trachomatis(Ct). We investigated the biological effect of chlamydiaphage phi CPG1 capsid protein Vp1 on Ct both in Mc Coy cells and genital tract of mice. Different concentrations of Vp1 were co-incubated with Ct E serotype strain in Mc Coy cells. Female BALB/c mice were used to establish Ct E strain-induced urogenital infection model. They were randomly divided into five groups and given different treatments on the fifth day after Ct inoculation. Animals in groups 1 and 2 were given 30 μL different concentrations of Vp1 in the genital tract respectively, those in group 3 were intramuscularly injected with 30 μL Vp1, those in the infected group did not receive any intervention, and those in the control group received 30 μL PBS in the genital tract. The vaginal discharge was collected to identify the live chlamydia by cell culture and gene fragment by real time PCR different days after infection. Inhibition rate of 100 μg/m L and 50 μg/m L Vp1 proteins against Ct E strain in the Mc Coy cell cultures was 91% and 79% respectively. The number of intracellular Ct inclusion in the Mc Coy cells co-cultured with vaginal discharge of group 1 and group 2 was less than in the infected group, and that in group 1 was less than in group 2, on the 7th day after Ct inoculation. Real-time PCR showed that chlamydia concentration of the vaginal discharge in group 2 was lower than in the infected group, and that in group 1 was lower than in group 2 on the 10 th day. It was suggested that Vp1 capsid proteins had inhibitory effect on the proliferation of Ct serovar E strain in cell culture and mouse genital tract. 展开更多
关键词 chlamydia trachomatis trachoma mice phage vp1 protein
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表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建 被引量:1
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作者 徐贞琦 蒋蕙如 +8 位作者 郭艺文 谢泉 殷楠 李拓凡 万志敏 邵红霞 秦爱建 张俊 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期47-53,共7页
为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病毒 vp1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒 表达
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猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 边金妮 黄诗婷 +7 位作者 许佳乐 米雪 王奕斐 杜琛 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期178-182,共5页
本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆... 本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。 展开更多
关键词 猪肠病毒G型 部分vp1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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柯萨奇病毒A组10型VP1蛋白线性中和表位的筛选和鉴定
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作者 甘燕媚 何韵怡 +3 位作者 瞿颖 吴岳 刘启亮 刘洪波 《激光生物学报》 CAS 2024年第2期160-166,共7页
柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)是引起手足口病(HFMD)的常见病原体之一。应用重叠肽法筛选出覆盖CV-A10全长VP1区氨基酸序列的39条候选表位肽段,以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及微量中和抑制试验验证。结果发现,候选表位P6(CV-A10 VP1区第3... 柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)是引起手足口病(HFMD)的常见病原体之一。应用重叠肽法筛选出覆盖CV-A10全长VP1区氨基酸序列的39条候选表位肽段,以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)及微量中和抑制试验验证。结果发现,候选表位P6(CV-A10 VP1区第39~53位氨基酸)与CV-A10全病毒抗血清具有高反应性,且在3.91μg/mL的稀释质量浓度时仍具有中和抑制作用,为潜在中和表位。用P6肽免疫小鼠制备相应的抗血清,并以微量中和试验验证其保护能力,结果显示,P6抗血清的几何平均中和效价为1:8.97,可确定P6为CV-A10的中和表位。为了解P6序列在CV-A10型内的保守性,将P6的氨基酸序列与CV-A10各基因型代表株进行比对分析,结果显示,P6在CV-A10型内高度保守,表明P6为CV-A10的广谱性中和表位,可应用于CV-A10表位疫苗的研发。本研究旨在筛选鉴定CV-A10 VP1蛋白上的线性中和表位,为CV-A10表位疫苗的研发和HFMD的防控奠定基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组10型 vp1蛋白 线性中和表位 疫苗 手足口病
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肠道病毒C组96型VP1蛋白线性B细胞表位筛选与鉴定
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作者 何韵怡 刘阳阳 +1 位作者 胡嘉华 刘洪波 《华夏医学》 CAS 2024年第2期1-9,共9页
目的鉴定肠道病毒C组96型(enterovirus C96,EV-C96)VP1蛋白的线性B细胞表位。方法采用IEDB网站提供的在线分析工具分析、预测EV-C96 VP1蛋白的线性B细胞表位,结合其二级结构、β-转角、抗原性、亲水性等多项参数,筛选出优势候选表位;应... 目的鉴定肠道病毒C组96型(enterovirus C96,EV-C96)VP1蛋白的线性B细胞表位。方法采用IEDB网站提供的在线分析工具分析、预测EV-C96 VP1蛋白的线性B细胞表位,结合其二级结构、β-转角、抗原性、亲水性等多项参数,筛选出优势候选表位;应用间接ELISA法检测候选表位与EV-C96免疫血清的反应性以及与21种其他常见手足口病病原血清的交叉反应性;应用微量中和试验测定表位抗体的中和效价;采用序列比对分析表位的序列保守性;应用结构对齐分析表位的结构特异性。结果通过生物信息学筛选出EVC96 VP1蛋白7个候选表位(P1~P7);ELISA法检测发现P7(氨基酸序列位置为282~304)与EV-C96多克隆抗体有强反应性,与其他常见EV多克隆抗体不发生明显反应;微量中和试验显示,P7抗体的中和效价低于1∶2;序列及结构分析结果显示,P7的氨基酸序列在EV-C96型内具有较高保守性,与其他EV相应位点氨基酸序列的结构有明显差异。结论P7表位为EV-C96特异的非中和性B细胞表位,可作为开发EV-C96检测试剂盒的候选抗原表位。 展开更多
关键词 肠道病毒C组96型 vp1蛋白 线性B细胞表位 手足口病
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Application of VP1 Protein to Develop Monoclonal Antibody against Foot-and-mouth Disease Virus Asia1 Type 被引量:5
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作者 Tong LIN Jun-zheng DU Jun-jun SHAO Guo-zheng CONG Shuai SONG Shan-dian GAO Hui-yun CHANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期215-220,共6页
In order to develop an anti-FMDV Asial type monoclonal antibody (mAb), BABL/c mice were immunized with recombinant FMDV VP1 protein. Three mAbs, 1B8, 5El and 5E2, were then further optimized. The result indicated th... In order to develop an anti-FMDV Asial type monoclonal antibody (mAb), BABL/c mice were immunized with recombinant FMDV VP1 protein. Three mAbs, 1B8, 5El and 5E2, were then further optimized. The result indicated that prepared anti-FMDV Asial mAbs had no cross-reactivity with Swine vesicular disease (SVD) and FMDV O, A and C type antigen. Their titers in abdomen liquor were 1:5×10^6, 1:2×10^6 and 1:5×10^6, respectively. 1B8 was found to be of IgG1 subtype, 5El and 5E2 belonged to IgG2b subtype. In this study, the prepared mAbs are specific for detecting FMDV type Asia1, and is potentially useful for pen-side diagnosis. 展开更多
关键词 Asial type FMDV vp1 protein Monoclonal antibody
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Genetic Analysis of the P1 Region of Human Enterovirus 71 Strains and Expression of the 55 F StrainVP1 Protein 被引量:2
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作者 Jian-qiang Li Jun-jie Yang +5 位作者 Xiu-juan Fan Zhen-peng Sun Yan Sun Huan Li Zi-xin Meng Wei Li 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第1期10-18,共9页
Enterovirus 71 (EV71) is a member of the Entero-virus genus of the Picomaviridae family and is the major cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) in children. Different strains from Gansu were cloned and the ... Enterovirus 71 (EV71) is a member of the Entero-virus genus of the Picomaviridae family and is the major cause of Hand, foot, and mouth disease (HFMD) in children. Different strains from Gansu were cloned and the P1 protein was sequenced and analysed. Results indicate that there are three kinds of EV71 infections prevalent in Gansu. The VP 1 protein from one of these strains, 55F, was expressed. The recombinant protein was expressed with high level and reacted specifically with the EV71 patient antibody, the recombinant protein was also applied to raise antiserum in rabbits and after the fourth injection a high titer of antiserum was detected by ELISA assay. These data are useful for further clarification of prevalent EV71 strains in the north of China at the molecular level and provide a basis for EV71 diagnosis. 展开更多
关键词 EV71 Genetic analysis P1 region EXPRESSION vp1 protein
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Establishment of Indirect ELISA Diagnosis Technique based on the VP1 Protein of Foot and Mouth Disease Virus Serotype A 被引量:1
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作者 Lu Qingxia Liu Chang +5 位作者 Jin Qianyue Guo Guanpeng Xing Guangxu Liu Yunchao Deng Ruiguang Zhang Gaiping 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2014年第6期300-303,311,共5页
The VP1 protein of foot-and-mouth disease virus serotype A was prokaryotically expressed and purified to replace the traditional virus antigen for estab- lishing a fast, safe, effective indirect ELISA method, so as to... The VP1 protein of foot-and-mouth disease virus serotype A was prokaryotically expressed and purified to replace the traditional virus antigen for estab- lishing a fast, safe, effective indirect ELISA method, so as to detecting antibody of foot-and-mouth disease virus serotype A. Western-Blot test showed that the VP1 recombinant protein could be used as detective antigen as it can be specifically recognized by bovine positive serum of FMDV serotype A. By employing matrix titra- tion method, the optimal parameters were obtained as follows: 1 mg/L VP1 protein as coating antigen, Vserum:Vblocking solution = 1:50 dilution for serum and Vsecondary enzyme-linked antibedies:Vblocking solution ---1:2 000 for enzyme combined antibodies. The results showod that the sensitivity and specificity of this method were 94.32% and 99.09% respectively, the coefficients of variations in intra-assay and inter-assay reproducibility tests was lower than 8%. Compared with liquid phase blocking ELISA kits, the agreement of 201 serum samples reached 92.54%. The VP1-ELISA method established here is specific, sensitive, stable and simple, which can be used to monitor the antibody level of FMD serotype A. 展开更多
关键词 Foot and mouth disease virus serotype A vp1 protein Indirect ELISA
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表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
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作者 施鹏 林晓晨 +7 位作者 周艳 李娇春 宋泽鑫 鲁辰星 谭银珍 胡晓青 陈蓉 李鸿钧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期7-11,共5页
人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定... 人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 主要结构蛋白vp1 腺病毒载体 同源重组 病毒包装
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Preparation and Characterization of Monoclonal Antibodies against VP1 Protein of Foot-and-mouth Disease Virus O/China99
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作者 Shuai SONG Tong LIN +4 位作者 Jun-jun SHAO Shan-dian GAO Guo-zheng CONG Jun-zheng DU Hui-yun CHANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2009年第6期566-572,共7页
Monoclonal antibodies (McAbs) 1A9 and 9F12 against Foot-and-mouth disease virus (FMDV) serotype O were produced by fusing SP2/0 myeloma cells with splenocyte from the mouse immunized with O/China99. Both McAbs reacted... Monoclonal antibodies (McAbs) 1A9 and 9F12 against Foot-and-mouth disease virus (FMDV) serotype O were produced by fusing SP2/0 myeloma cells with splenocyte from the mouse immunized with O/China99. Both McAbs reacted with O/China99 but not with Asia 1, as determined by immunohistochemistry assay. The microneutralization titer of the McAbs 1A9 and 9F12 were 640 and 1 280, respectively. Both McAbs contain kappa light chains, but the McAbs 1A9 and 9F12 were IgG1 and IgM, respectively. In order to define the McAbs binding epitopes, the reactivity of these McAbs against VP1, P20 and P14 were examined using indirect ELISA, the result showed that both McAbs reacted with VP1 and P20. McAbs may be used for further studies of vaccine, diagnostic methods, prophylaxis, etiological and immunological researches on FMDV. 展开更多
关键词 Foot-and-mouth disease virus (FMDV) Monoclonal antibody Neutralizing activity vp1 protein
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猪塞内卡谷病毒VP1蛋白原核表达及多克隆抗体制备
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作者 莫红芳 石宗承 +6 位作者 陆晶山 何东贤 杨延辉 梁淑芳 俸祥仁 钱平 韦巧燕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2175-2183,共9页
【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化... 【目的】原核表达猪塞内卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)VP1蛋白,制备SVV-CH-HB2016 VP1蛋白多克隆抗体并分析其抗原性,为进一步研发SVV病毒诊断试剂盒和亚单位疫苗提供参考依据。【方法】对SVV-CHHB2016 VP1基因序列进行密码子优化,构建质粒pUCK/VP1-opt,双酶切后连接至pET-28a(+)载体,构建原核表达质粒pET-28a-VP1。将重组质粒pET-28a-VP1转化大肠杆菌BL21(DE3)分子伴侣感受态细胞,经IPTG诱导表达获得重组VP1蛋白。采用Western blotting方法分析VP1蛋白的反应原性,并以包涵体变性和复性方式纯化。随后将VP1蛋白免疫新西兰白兔,分离血清获得重组VP1蛋白的多克隆抗体。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体的效价水平,以Protein A+G Agarose抗体纯化试剂盒纯化多克隆抗体。通过Western blotting和间接免疫荧光抗体试验(IFA)法验证多克隆抗体与SVV-CH-HB2016毒株反应的特异性。【结果】成功构建原核表达质粒pET-28a-VP1,在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导4 h条件下,重组VP1蛋白成功表达并主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果显示,重组VP1蛋白可与His-Tag Mouse mAb发生特异性结合,具有良好的反应原性;经变性和复性纯化的重组包涵体蛋白纯度和浓度均较高;采用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1∶32000;纯化后的抗体无明显杂带,纯度大于90.0%;Western blotting和IFA鉴定结果表明,多克隆抗体可特异性识别SVV-CH-HB2016毒株,重组VP1蛋白具有较好的免疫原性。【结论】通过原核表达SVV VP1蛋白获得的重组VP1蛋白具有较好的抗原性,制备的多克隆抗体特异性良好,可作为诊断试剂盒及亚单位疫苗研制的候选抗原。 展开更多
关键词 猪塞内卡谷病毒 vp1蛋白 原核表达 多克隆抗体
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外周血中抗EV71 VP1特异性抗体分泌细胞检测方法的建立
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作者 赵培培 陈建国 《中国血液流变学杂志》 CAS 2023年第1期115-119,共5页
目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分... 目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分泌细胞的参数:包括抗原最佳包被浓度、反应体系中细胞浓度以及HRP标记抗体工作浓度的确定,与ELISA比较,检测方法的敏感性和特异性。结果当抗原包被浓度为20μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定;细胞浓度为5×10^(6)/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数;HRP标记抗体释稀度为1:10000时,背景最浅容易识别。ELISPOT敏感性为90.0%,特异性96.7%。与ELISA检测抗EV71抗体方法比较,ELISPOT优于ELISA。结论该方法有较高的特异性和灵敏度,有望成为诊断EV71感染的一种理想方法。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 vp1蛋白 外周血 酶联免疫斑点
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Expression,Purification and Activity Detection of VP1 of A-type FMDV 被引量:4
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作者 李菁 林彤 +4 位作者 高闪电 丛国正 独军政 邵军军 常惠芸 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第2期23-26,共4页
[Objective] The research aimed to induce the expression of FMDV structural protein VP1 in E.coli and purify the protein,then detect the activity.[Method] The fragment coding VP1 was amplified by PCR and doubly digeste... [Objective] The research aimed to induce the expression of FMDV structural protein VP1 in E.coli and purify the protein,then detect the activity.[Method] The fragment coding VP1 was amplified by PCR and doubly digested with BamH Ⅰ and XhoⅠ,then cloned into expression vector pGEX-4T-1 and pPROExHTb respectively to get recombinant plasmid pGEX-4T-1-VP1 and pPROExHTb-VP1.The recombinant plasmid pGEX-4T-1-VP1 and pPROExHTb-VP1 was transformed into E.coli BL21(DE3)and induced by IPTG,fusion protein was identifie... 展开更多
关键词 A-type FMDV Structural protein vp1 Expression and purification
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EV71 VP1黏膜疫苗制备及其诱导黏膜免疫的实验研究 被引量:4
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作者 李志会 岳盈盈 +2 位作者 李鹏 宋楠楠 孟红 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第43期4-5,共2页
目的研究表面展示肠道病毒71型(EV71)结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃+滴鼻途径免疫BALB/c小鼠(观察组... 目的研究表面展示肠道病毒71型(EV71)结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢制备疫苗的可行性及应用价值。方法以表面展示EV71 VP1蛋白的重组枯草芽孢杆菌及野生型同基因株枯草芽孢杆菌制备疫苗,并分别通过灌胃+滴鼻途径免疫BALB/c小鼠(观察组和对照组各16只),4周后摘眼球取血,脱臼处死小鼠收集肺泡及小肠冲洗液,采用ELISA方法检测血清、肺黏膜、肠黏膜中VP1特异性IgA抗体水平。结果枯草芽孢杆菌经培养及溶菌酶处理后均以芽孢形式存在;观察组血清及肺黏膜中VP1特异性IgA抗体水平均显著高于对照组(P均<0.01),但两组肠黏膜中抗体水平无显著差异。结论展示EV71结构蛋白VP1的枯草芽孢杆菌芽孢可成功制备疫苗,且能有效刺激机体产生特异性黏膜免疫反应;此为EV71疫苗的研制提供了新思路。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 衣壳蛋白vp1 疫苗 枯草芽孢杆菌芽孢
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免疫途径和佐剂对CVB3VP1蛋白免疫效果的影响 被引量:4
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作者 温婵 高志云 +5 位作者 蓝佳明 闫立景 揣侠 李嘉 李伟 王永祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1086-1089,共4页
目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响。方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21(DE3)pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP... 目的:观察不同免疫途径和佐剂类型对柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)衣壳蛋白VP1免疫效果的影响。方法:将原核表达质粒pET-his/VP1转入E.coli BL21(DE3)pLysS中,用异丙基-1-硫代-β呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导CVB3VP1蛋白的表达并进行纯化。首先采用不同的免疫途径(皮下,腹腔,肌肉)用VP1蛋白免疫小鼠,每组12只。然后另取小鼠分为PBS组和不同佐剂组(氢氧化铝、弗氏佐剂、Montanide ISA720),每组18只,采用肌肉注射途径免疫。每次每只小鼠注射50μg,共免疫3次,间隔3周。用ELISA和微量中和试验检测血清特异性IgG抗体和中和抗体。用CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性。用致死量的CVB3攻击后,检测血中病毒的滴度并观察小鼠的存活状况。结果:在大肠杆菌中成功表达CVB3VP1蛋白。三种免疫途径比较,肌肉注射组血清中和抗体和特异性IgG抗体的水平明显高于其他组(P<0.01)。采用肌肉注射免疫时,弗氏佐剂组Montanide ISA 720佐剂组的体液免疫和细胞免疫应答的水平明显高于氢氧化铝组(P<0.05);但血中病毒的滴度低于氢氧化铝组(P<0.05)。弗氏佐剂组小鼠的生存率好于氢氧化铝组(P<0.05)。结论:采用肌肉注射途径,并联合弗氏佐剂或Montanide ISA 720佐剂可以使CVB3VP1免疫获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组3型 衣壳蛋白vp1 佐剂 免疫途径 小鼠
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雏番鸭胰腺型鸭1型甲肝病毒分离鉴定及VP1基因分析 被引量:21
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作者 傅光华 陈红梅 +8 位作者 黄瑜 施少华 彭春香 江斌 程龙飞 万春和 傅秋玲 林建生 林芳 《福建农业学报》 CAS 2012年第9期945-950,共6页
采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高... 采集自胰腺发黄或出血的雏番鸭病料经RT-PCR检测为鸭1型甲肝病毒阳性后,接种11日龄非免疫番鸭胚获得一株病毒(命名为MPZJ1206)。该株病毒在不同温度下均不凝集鸡、鸭和绵羊红细胞;鸭胚中和试验表明蚀斑纯化毒可被经典的鸭1型甲肝病毒高免血清特异性所中和。该株病毒对7日龄雏番鸭的致死率为38.5%,病死鸭剖检病变与临床发病鸭相同,且从病死鸭脏器中回收分离到的病毒经鉴定仍为鸭1型甲肝病毒。应用鸭1型甲肝病毒VP1基因特异性引物从该株病毒克隆获得的714bp的基因片段,与经典鸭1型甲肝病毒分离株Du/CH/LGD/111239VP1基因的同源性最高,为99.1%,经遗传进化分析表明该株病毒属鸭1型甲肝病毒谱系。以上结果表明,雏番鸭胰腺炎是由鸭1型甲肝病毒感染所致,这一新病型明显不同于经典的鸭1型甲肝病毒感染引起的肝脏出血,鉴于此,建议将本试验分离株命名为胰腺型鸭1型甲肝病毒。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒 胰腺型 雏番鸭 vp1衣壳蛋白
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SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析 被引量:3
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作者 高闪电 常惠芸 +5 位作者 独军政 邵军军 丛国正 林彤 韩雪清 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期631-634,共4页
目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VPl基因及其C端编码区,然后将该其分别克... 目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VPl基因及其C端编码区,然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化,经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价。结果:实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot结果显示,纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应,而与阴性对照血清无交叉反应。结论:用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12800以上,具有较高的特异性。 展开更多
关键词 SAT2型口蹄疫病毒 结构蛋白vp1 原核表达 反应原性分析
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猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立 被引量:28
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作者 王光华 独军政 +5 位作者 丛国正 邵军军 林彤 薛慧文 常惠芸 谢庆阁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期961-966,共6页
将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法... 将口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因,通过pPROex-HT表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为31ku的融合蛋白,Westernblot检测证实表达的该蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原建立了猪FMDVVP1蛋白间接ELISA检测方法。通过对80份田间血清样品的检测表明,该方法与FMDV液相阻断ELISA(国标试剂盒)的总符合率为96.25%,表明建立的VP1蛋白间接ELISA检测方法具有很好的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒抗体 vp1蛋白 间接ELISA
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口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达 被引量:4
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作者 杨彬 刘在新 +1 位作者 胡永浩 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第3期3-8,共6页
利用RT PCR技术 ,用包容口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从口蹄疫分离株 (China/99 2 )中扩增得到一约 75 0bp的DNA片段 ,克隆后 ,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较 ,显示其与国外同源参考序列 (O1K/66)的同源性为 80 .44% ,与... 利用RT PCR技术 ,用包容口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从口蹄疫分离株 (China/99 2 )中扩增得到一约 75 0bp的DNA片段 ,克隆后 ,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较 ,显示其与国外同源参考序列 (O1K/66)的同源性为 80 .44% ,与国内同型参考株 (HB/WH/99)的核苷酸序列的同源性达 99.0 6%。随后以重组质粒pGEM VP1为模板 ,用特异性表达引物扩增得到目的基因VP1 (65 0bp) ,对目的基因和表达载体 pGEX 4T 1分别以相同的限制性内切酶酶切后构建成重组表达载体 ,转化宿主菌BL2 1 (DE3 )后得到重组质粒pGEX VP1 ,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序证明目的基因正确插入到表达载体。用IPTG诱导VP1基因的表达 ,收集不同时间的菌液进行SDS PAGE电泳、Western blotting分析检测。结果表明 ,结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中表达 ,表达产物的分子量约为 5 3ku ,并能被口蹄疫阳性血清所识别。经薄层扫描分析 ,表达蛋白约占菌体蛋白总量的 2 0 .0 0 %。证明口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中高效表达 。 展开更多
关键词 口蹄疫 病毒结构 蛋白vp1基因 克隆 大肠埃希氏菌 基因表达 动物
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