P27kipl和CyclinA在胃癌中的表达及意义

目的 研究P27kipl和CyclinA蛋白在胃癌中的表达,探讨其在胃癌发生、发展中的可能作用及意义。方法 应用免疫组化S-P法检测P27kipl和CyclinA蛋白表达情况。结果 P27kipl和CyclinA蛋白在62例胃癌中表达阳性率分别为27.4％和41.9％;58例癌前病变中分别为44.8％和22.4％;25例正常对照组中分别为84.0％和0.0％,胃癌与癌前病变、正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。在胃癌中P27kipl蛋白表达与CyclinA蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论 P27kipl在胃癌中的表达降低,CyclinA在胃癌中高表达,两者与胃癌发生机制有关,且具有相关性。

P27KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的 探讨P2 7KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与生物学行为和预后的关系。方法 采用免疫组化SP法检测 88例卵巢浆液性肿瘤中P2 7KIPL蛋白的表达水平。结果 6 1例卵巢浆液性囊腺癌中P2 7KIPL阳性表达率为 4 6 % (2 8/ 6 1例 ) ,明显低于浆液性囊腺瘤 80 % (12 / 15例 )和浆液性交界性肿瘤 75 % (9/ 12例 ) (P <0 0 5 )。P2 7KIPL阳性表达在Ⅰ级癌中表达率最高 73 3% ,Ⅱ级癌 4 6 7% ,Ⅲ级癌表达最低 12 5 %。三组之间差异显著 (P <0 0 5 ) ,P2 7KIPL阳性表达与组织分级呈负相关。早期 (Ⅰ Ⅱ期 )P2 7KIPL表达率 76 % ,明显高于晚期 (Ⅲ Ⅳ期 ) 2 7% (P <0 0 5 )。结论 P2 7KIPL蛋白表达水平可能与卵巢浆液性囊性癌组织分化、临床分期有关。

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用及其机制

目的:研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因pAkt、Skp2及P27kip1表达的变化.方法:将不同浓度的渥曼青霉素(0、10、50、100、200 nmol/L)分别作用于对数生长期的人肝癌HepG2细胞3、10、24 h,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测pAkt、Skp2及P27kip1蛋白表达变化,RT-PCR检测Skp2及P27kip1mRNA表达变化.结果:渥曼青霉素可明显抑制HepG2细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.渥曼青霉素可导致G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05).随着渥曼青霉素浓度的增加及作用时间的延长,HepG2细胞凋亡率逐渐升高(8.46%±1.17%至28.03%±2.67%)(P<0.05).Western blot结果显示渥曼青霉素可下调pAkt和Skp2蛋白的表达,上调P27kip1蛋白表达(P<0.05).RT-PCR结果显示渥曼青霉素可明显下调Skp2 mRNA的表达,而P27kip1mRNA表达无明显变化.结论:PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,引发G0/G1期阻滞并诱导其凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路参与Skp2及P27kip1调控有关.

腺病毒介导的人p27kip1基因转染对球囊损伤后兔颈动脉新生内膜增生的抑制作用

目的 研究腺病毒介导的p27kip1基因及其蛋白产物高表达对球囊损伤后兔颈动脉新生内膜增生的抑制作用。方法 建立兔颈动脉球囊损伤模型,将LacZ重组腺病毒（AdLacZ）和人p27kipl重组腺病毒（Adhp27kipl）在体内分别转染损伤动脉节段,以Western blot、x-gal染色、HE染色、兔疫组化及计算机图像处理方法观察转染动脉节段中外源性p27kipl蛋白表达及其对新生内膜增生的影响。结果 与AdLacZ转染组及未转染组比较,Adhp27kip1转染的动脉节段内p27kip1蛋白呈高表达,表达高峰在7～14 d,持续4周以上;转染4周后未转染组、AdLacZ转染组及Adhp27kip1转染组的新生内膜面积分别为1.106mm2、0.988mm2及0.278mm2;管腔狭窄率分别为87.07％、65.40％及32.14％。结论 外源性p27kip1基因及其蛋白产物在损伤动脉节段内高表达可显著抑制新生内膜增生及管腔狭窄。

外源性TGF-β_1对原代急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对原代急性早幼粒细胞白血病细胞(APL)凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法将APL细胞分为4组,对照组不加任何药物,实验组用终浓度为1、5、10 ng/mL TGF-β1处理(实验1、2、3组),分别处理24、48、72 h,采用瑞氏—吉姆萨染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组化法检测TGF-β1、P27Kip1、Cyclin E、bcl-2蛋白,RT-PCR技术检测TGF-β1、P27Kip1、Cyclin E、bcl-2 mRNA。结果与对照组比较,实验1、2、3组24、48 h细胞凋亡率升高(P均<0.05);与同组24 h比较,实验1、2、3组48 h细胞凋亡率升高(P均<0.05)。对照组细胞培养48 h未见明显细胞周期阻滞;与对照组比较,实验1组48 h细胞周期阻滞于G1期,实验2、3组APL细胞周期明显阻滞于G1期。与对照组比较,实验2组TGF-β1、P27Kip1蛋白水平升高,Cyclin E、bcl-2蛋白降低(P均<0.05)。1'、2'β-actin条带亮度相同,实验2组(2道)P27Kip1mRNA条带亮度与对照组(1道)相同,P27Kip1mRNA水平较对照组变化不明显;1'、2'β-actin条带亮度相同,实验2组(2道)条带亮度明显高于对照组(1道);实验2组Cyclin E条带与对照组比较亮度减低,Cyclin E表达下调。结论外源性TGF-β1通过上调TGF-β1、P27Kip1及下调Cyclin E、bcl-2作用,诱导细胞发生凋亡,使细胞阻滞于G1期。

p27kip1、p16、PCNA及AR受体在前列腺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:研究p27kip1、p16、增殖细胞核抗原(PCNA)和雄激素(AR)受体在前列腺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:采用免疫组织化学Envision法检测65例前列腺癌组织和25例前列腺上皮内瘤样增生(PIN)中p27kip1、p16、PCNA和AR的表达。结果:①前列腺癌组织中p27kip1、p16、PCNA和AR的表达阳性率分别为49.2%、55.4%、67.7%和83.1%。②PCNA和AR在前列腺癌中的表达与临床病理分期密切相关(P<0.05,P<0.05),与其他病理参数间无相关关系。③<5年生存期的病例,p16的表达率低于>5年生存期的病例(P<0.01)。④p27kip1、p16、PCNA及AR蛋白的阳性表达具有相关性(P<0.01)。结论:p27kip1、p16、PCNA和AR检测有助于综合评估前列腺癌的预后。

人p27kip1重组腺病毒载体的构建及其介导的p27kip1表达

目的 研究外源性p2 7kip1基因对细胞周期及细胞增殖的影响。方法 构建CMV启动子转录调控的含人p2 7kip1cDNA的E1区替代的腺病毒载体pAxlcw .CIhp2 7kip1,与经EcoT2 2 1酶切的Ad5腺病毒DNA -末端肽复合物共转染 2 93细胞 ,制备p2 7kip1重组腺病毒 ,在体外转染HeLa细胞 ,Westernblot、FACS及MTT检测分析外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞周期及细胞增殖的影响。结果 获得含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 ,滴度为 1.7× 10 9pfu/ml。体外转染HeLa细胞2 4h后 ,p2 7kip1蛋白在p2 7kip1转染后的HeLa细胞中高表达 ;FACS检测表明 ,p2 7kip1和LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 ,经 10 %血清刺激后处于G1期的细胞分别为 89.93%和 5 9.84% ;MTT法检测表明 ,人p2 7kip1重组腺病毒转染后的HeLa细胞经 2 0 %血清刺激后 ,48及 72h的A值均低于LacZ重组腺病毒转染后的HeLa细胞 (P <0 .0 1)。结论 本研究中所制备的p2 7kip1重组腺病毒能有效介导外源性p2 7kip1基因在体外转染HeLa细胞并高表达p2 7kip1,抑制细胞由G1期向S期过渡 ,从而抑制细胞增殖 ,为进一步研究p2 7kip1基因治疗奠定了基础。

p27^(kipl)和Rb蛋白在原发性肝癌中的表达及其临床意义

应用SABC免疫方法分别检测了p27kipl和Rb蛋白在40例原发性肝癌组织中和20例肝硬化组织中的表达,分析了解p27kipl和Rb蛋白在原发性肝癌组织中的表达及其与原发性肝癌临床病理因素及预后的关系。