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肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析 被引量:1
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作者 王雪莲 栾和芝 +2 位作者 刘彤 赵雨杰 安春丽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期774-777,786,共5页
目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则... 目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。 展开更多
关键词 肺孢子菌 p55蛋白 嵌合基因 重组融合蛋白
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卡氏肺孢子虫P55抗原表位与蛋白特性的分析
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作者 段义农 王建新 陈金铃 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1022-1025,1069,共5页
目的预测p55抗原表位及蛋白性质。方法运用生物信息学方法推测p55抗原表位及蛋白性质,分析预测结果。结果p55蛋白存在多个潜在的抗原表位,T细胞表位按预测积分高低排列位于141-158,54-68,123-137,349-364,397-414位氨基酸残基;B细胞表位... 目的预测p55抗原表位及蛋白性质。方法运用生物信息学方法推测p55抗原表位及蛋白性质,分析预测结果。结果p55蛋白存在多个潜在的抗原表位,T细胞表位按预测积分高低排列位于141-158,54-68,123-137,349-364,397-414位氨基酸残基;B细胞表位在37-41,74-79,111-119,148-161,199-210,240-250,256-266,295-314,322-360位氨基酸残基等部位。P55重组融合蛋白为可溶性蛋白的概率是92%。结论p55抗原表位可能主要存在于148-161、295-320、337-356氨基酸序列区域内或其附近。该预测p55抗原表位可以有目的地克隆重组基因片段,为研究高效的表位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 p55蛋白 表位 卡氏肺孢子虫 生物信息学分析
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HIV P55-gag蛋白促进骨髓间充质干细胞的老化
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作者 袁雅红 赵珊珊 +3 位作者 王小莉 腾智平 李东升 曾毅 《生物医学工程研究》 北大核心 2017年第1期52-56,61,共6页
探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),... 探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),另一组为添加HIV P55-gag蛋白培养组(BMSC_(gag));通过计算培养5、10、15及20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)的群体倍增水平,比较增殖能力;将培养20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)分别标记Brdu,免疫荧光法检测Brdu掺入率,比较两组细胞的增殖水平;通过检测细胞衰老生物标记β-半乳糖苷酶,比较两组细胞的衰老程度;Western检测两组细胞衰老相关蛋白P21的表达强度;将两组细胞诱导成骨分化,比较其成骨分化能力。在培养15天和20天时,BMSC_(gag)群体倍增水平明显低于BMSC_(con);BMSC_(gag)的Brdu掺入率明显低于BMSC_(con),分别为(26±4.1)%和(45±3.7)%;β-半乳糖苷酶染色检测显示,BMSC_(gag)的衰老细胞数明显多于BMSC_(con),分别为(21±4.7)%和(8±2.1)%;BMSC_(gag)的P21的表达强度明显强于BMSC_(con);成骨诱导后,茜素红染色和ALP染色均显示,BMSC_(gag)的成骨分化能力明显弱于BMSC_(con)。HIV P55-gag蛋白促进BMSC老化,进而抑制其成骨分化能力。 展开更多
关键词 HIV p55-gag蛋白 骨髓间充质干细胞 老化 成骨分化 骨代谢
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Intracellular Transport of HIV-1 Matrix Protein Associated with Viral RNA
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作者 Anatoliy I. Gozhenko Valentina A. Divocha +2 位作者 Galina K. Vorkunova Alissa G. Bukrinskaya Sergey I. Lupandin 《World Journal of AIDS》 2013年第1期33-35,共3页
HIV-1 matrix protein (MA) is a multifunctional structural protein localized on N terminus of Gag precursor p55. MA participates in HIV-1 assembly as membranotropic part of Gag precursor as well as an individual protei... HIV-1 matrix protein (MA) is a multifunctional structural protein localized on N terminus of Gag precursor p55. MA participates in HIV-1 assembly as membranotropic part of Gag precursor as well as an individual protein spliced from Gag early in infection. MA is found in the nuclei of infected cells and in plasma membrane, the site of virus assembly, in association with viral genome RNA. MA mutated variant M4 which contains two changed amino acids in N-terminal regions is also associated with viral RNA, but it is localized in the nuclear and cytoskeleton fractions but not in the plasma membrane suggesting that the mutant is deprived of membranotropic signal and “sticks” in the nuclei an d cytoskeleton, its previous location sites. These data allow suggesting that MA involved into transmission of viral RNA is transported to plasma membrane by cytoskeleton. 展开更多
关键词 HIV-1 Matrix protein GAG PRECURSOR p55 CYTOSKELETON VIRAL RNA Transport of VIRAL Complex Plasma Membranes Cell Fractionatiomn
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p33^(ING1)和p53基因蛋白在乳腺癌中的表达及其意义 被引量:2
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作者 赵增虎 张建宇 +2 位作者 刘俊堂 王炳胜 刘秀芳 《中国肿瘤临床与康复》 2007年第2期108-110,共3页
目的探讨p33ING1、p53基因蛋白在乳腺增生及乳腺癌中表达的意义及相互关系。方法应用Envision免疫组化法对正常乳腺组织、单纯增生、非典型增生、乳腺癌各50例标本进行p33ING1、p53基因蛋白表达检测。结果p33ING1蛋白在乳腺正常组织、... 目的探讨p33ING1、p53基因蛋白在乳腺增生及乳腺癌中表达的意义及相互关系。方法应用Envision免疫组化法对正常乳腺组织、单纯增生、非典型增生、乳腺癌各50例标本进行p33ING1、p53基因蛋白表达检测。结果p33ING1蛋白在乳腺正常组织、单纯增生、非典型增生、乳腺癌中阳性表达率分别为100.0%(50/50)、100.0%(50/50)、96.0%(48/50)和62.0%(31/50),阳性表达逐渐下降;p53蛋白阳性表达率分别为0(0/50)、0(0/50)、24.0%(12/50)和54.0%(27/50),阳性表达率逐渐上升。非典型增生与正常组织相比,差异有显著性(P<0.05);乳腺癌与正常组织相比,差异有非常显著性(P<0.01)。结论p33ING1阳性者p53阳性表达率远低于p33ING1阴性者,p33ING1与p53呈负相关。p33ING1和野生型p53基因都是抑癌基因,p33ING1是p53的分子伴侣。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 乳腺增生 p33^ING1蛋白 P53蛋白 抑癌基因
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HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在毕赤酵母中的表达纯化和鉴定
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作者 郝彦玲 马民强 +6 位作者 傅晶晶 李海山 王贻杰 刘颖 吴岚 刘勇 邵一鸣 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期128-131,共4页
目的 利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺。方法 PCR扩增CN5 4Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1 0 ,电转化毕赤酵母菌株GS115 ,G4 18筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SPS... 目的 利用毕赤酵母表达系统高效表达HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,初步确立发酵和纯化工艺。方法 PCR扩增CN5 4Gag基因,插入毕赤酵母表达载体pPS1 0 ,电转化毕赤酵母菌株GS115 ,G4 18筛选高表达工程菌,利用5L发酵罐进行高密发酵,通过SPSepharoseFF和DEAESeparoseFF柱层析,用HIV 1阳性血清和p2 4抗原检测试剂盒对纯化后的Gag蛋白进行免疫学性质的鉴定。结果 构建了高效表达CN5 4Gag蛋白的毕赤酵母工程菌株,发酵罐培养的菌体密度吸光度(A6 0 0 值)超过30 0 ,Gag蛋白表达量达到12 0mg L。纯化后的Gag蛋白纯度高于90 % ,p2 4检测强阳性并能够与HIV 1阳性血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论 本研究在毕赤酵母中高效表达了HIV 1中国株CN5 4的Gag蛋白,并进行了纯化和鉴定,为针对我国新一代HIV蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 GAG蛋白 HIV-1 中国株 鉴定 HIV蛋白亚单位疫苗 SEPHAROSE 毕赤酵母表达系统 抗原抗体结合反应 抗原检测试剂盒 高效表达 酵母表达载体 阳性血清 GAG基因 PCR扩增 GS115 免疫学性质 纯化工艺 DEAE 工程菌株 菌体密度 蛋白纯度
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