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ProteinA亲合膜色谱柱的性能及从人血浆中纯化免疫球蛋白的研究 被引量:10
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作者 贾凌云 杨利 +1 位作者 邹汉法 张玉奎 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期476-480,共5页
以木纤维为基质,与甲基丙烯酸环氧丙酯共聚接枝合成了复合膜介质,用复合膜介质制备了proteinA亲合膜色谱柱,考察了proteinA亲合膜色谱柱液相流动特性和吸附性能。实验证明:流速与亲合膜色谱柱柱压呈线性关系,当流... 以木纤维为基质,与甲基丙烯酸环氧丙酯共聚接枝合成了复合膜介质,用复合膜介质制备了proteinA亲合膜色谱柱,考察了proteinA亲合膜色谱柱液相流动特性和吸附性能。实验证明:流速与亲合膜色谱柱柱压呈线性关系,当流速为3mL/min时,柱压为160kPa。免疫球蛋白(IgG)浓度和上样速度是影响proteinA键合容量的重要因素,对其进行了优化研究。用动态吸附法确定了对人IgG动态最大吸附能力可达21.7mg/g(干介质)。通过对人血浆中IgG的分离纯化考察了proteinA亲合膜色谱柱的分离能力,用毛细管电泳对纯化人IgG的纯度进行了分析,证明一步纯化IgG纯度可达98%以上。亲合膜色谱柱分离速度快,操作简单,吸附容量满足要求,有望在免疫球蛋白的大规模分离纯化中得到应用。 展开更多
关键词 亲合色谱 ProteinA 人血浆 免疫球蛋白 纯化
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用Protein A亲和层析法快速分离纯化鲫血清IgM方法的建立和应用 被引量:4
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作者 吴光辉 王庆 +3 位作者 巩华 石存斌 李华 吴淑勤 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期233-237,共5页
采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)进行分析检测。结果表明:采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM... 采用Protein A亲和层析法对鲫Carassius auratus血清中的IgM进行快速分离纯化,所得产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)进行分析检测。结果表明:采用Protein A亲和层析法可以很好地分离到高纯度的鲫血清IgM,电泳条带中重链和轻链清晰可辨,重链、轻链的相对分子质量分别为85 000、25 000左右,无明显杂带;利用纯化的鲫血清IgM免疫小鼠,获得了高效价抗IgM抗血清,可以特异性识别鲫血清和黏液中IgM重链。应用间接ELISA方法对浸泡免疫后的鲫血清和皮肤黏液中抗体的动态进行检测,结果显示:鲫皮肤黏液中的抗体滴度在免疫后第6天达到峰值,血清中抗体滴度在免疫后第15天达到峰值,前者高峰期出现较早,但持续时间短,后者高峰期出现较晚,但持续时间较长。本试验中所建立的Protien A亲和层析法为鱼类抗体制备、病原检测及免疫学相关研究提供了一种便捷的方法。 展开更多
关键词 ProteinA IGM 纯化 抗体检测
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混合抗体的亲和色谱分离策略 被引量:1
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作者 周月芳 张焱 +5 位作者 罗坚 康丽梅 陈毅 石红 孟庆雄 苏志国 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期974-979,共6页
乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体,但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似,分离难度很大。本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析,并在此基础上制定了新型分离策略,采取Protein A亲和色谱和免疫亲和... 乳腺生物反应器可以高效表达重组人单克隆抗体,但是目标产品与乳液原料中的牛抗体性质、结构非常类似,分离难度很大。本文对牛抗体和重组人抗体的种属差异进行了分析,并在此基础上制定了新型分离策略,采取Protein A亲和色谱和免疫亲和色谱来解决混合抗体的分离问题,并讨论了色谱洗脱模式对分离效果的影响。结果表明,Protein A亲和色谱结合梯度洗脱可以有效地纯化得到混合抗体,但是难以彻底分离重组人抗体和牛抗体;相比之下,使用Protein A亲和色谱结合置换色谱模式可以更加高效地分离混合抗体,最终可以得到纯度高达95%以上的重组人抗体,回收率可达95%以上。免疫亲和色谱同样可以有效地分离纯化重组单克隆抗体,且其通用性更强,可以应用于任何动物乳腺表达重组人抗体的分离纯化中。 展开更多
关键词 ProteinA亲和色谱 免疫亲和色谱 重组人抗体 牛抗体 乳腺生物反应器
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免疫吸附治疗用ProteinA切流膜色谱柱的研究
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作者 贾凌云 杨利 +4 位作者 邹汉法 张玉奎 赵久阳 范成明 沙丽艳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期107-111,共5页
切流膜色谱柱是免疫吸附治疗中实现全血灌流的一种新的模式。实验研究表明,切流膜色谱柱的结构和血液流动形式对血细胞的损害很小。分别考察了水、血浆、血液等不同流体流速与切流膜色谱柱柱压降之间的关系,柱压降随着流体流速和粘度... 切流膜色谱柱是免疫吸附治疗中实现全血灌流的一种新的模式。实验研究表明,切流膜色谱柱的结构和血液流动形式对血细胞的损害很小。分别考察了水、血浆、血液等不同流体流速与切流膜色谱柱柱压降之间的关系,柱压降随着流体流速和粘度的升高而增高,血液流速为120mL/min时,柱压降达到93kPa;考察了ProteinA切流膜色谱柱对人血浆中免疫球蛋白IgG的吸附能力,切流膜色谱柱ProteinA健合量为139mg(6mgProteinA/g干介质),血浆在柱中循环1h可吸附IgG553mg(23.8mgIgG/g平介质),而血液在柱中循环1h,可吸附IgG499.4mm(21.5msIgG/g卡介质),循环时间对IgG吸附量影响较大,循环速度对IgG吸附量影响不大。对狗的体外临床血液灌流实验表明,切流膜色谱柱的血液相容性良好。 展开更多
关键词 切流 膜色谱柱 免疫吸附 proteinA IGG 全血灌流
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妊娠相关血浆蛋白A与冠状动脉粥样硬化性心脏病
5
作者 江文艳 李海涛 《中国循证心血管医学杂志》 2009年第4期239-241,共3页
冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病),是常见的致死性疾病。早期检测、识别冠心病,对于降低其发病率、死亡率具有重要的意义。近年来,一种新的血清标志物一妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy associated plasma proteinA,PAPP—A)的出... 冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病),是常见的致死性疾病。早期检测、识别冠心病,对于降低其发病率、死亡率具有重要的意义。近年来,一种新的血清标志物一妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy associated plasma proteinA,PAPP—A)的出现,为临床冠心病风险评估提供了有力的工具。PAPP-A是一种锌离子依赖性金属蛋白酶,最初在妊娠妇女血浆中发现,主要用于评价胎盘功能及筛查胎儿唐氏综合征。国内外学者对PAPP—A进行广泛的研究, 展开更多
关键词 冠状动脉粥样硬化性心脏病 妊娠相关血浆蛋白A PAPP-A proteinA 致死性疾病 血清标志物 金属蛋白酶 唐氏综合征
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妊娠相关蛋白A与急性冠状动脉综合征
6
作者 穆红 《实用检验医师杂志》 2013年第3期184-186,共3页
急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是指由于冠状动脉急性病变致严重狭窄或闭塞所产生的一组临床综合征,包括急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)和不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP),通常... 急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是指由于冠状动脉急性病变致严重狭窄或闭塞所产生的一组临床综合征,包括急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)和不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP),通常发病突然、易反复且转归难以预测.故对其长短期预后的评估成为心血管领域研究的焦点.近年来对ACS病理生理的研究揭示了所有ACS均是由于不稳定的冠状动脉粥样斑块发生破裂或表面糜烂,继发完全或不完全闭塞性血栓形成、血管痉挛而引起.故检测冠状动脉粥样斑块的稳定性成为ACS诊断和危险分层的一个新亮点.2001年Bayes-Gents等发现妊娠相关蛋白A (pregnancy associated plasma proteinA,PAPP-A)在易损斑块内表达丰富,在ACS患者血液中浓度增高.斑块的易损性被认为与粥样硬化部位增多的炎性细胞活动有关,激活的巨噬细胞参与了冠状动脉局部的炎症过程,其分泌的PAPP-A通过对胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP-4)的蛋白水解作用引起游离胰岛素样生长因子1 (insulin-like growth factor 1,IGF-1)释放增加及其生物活性增强,从而导致纤维帽变薄,斑块脆性增加和破裂.近来国内外学者对其生物学特性及其在临床上的应用价值等进行了许多研究,发现PAPP-A作为重要介导因素在动脉粥样硬化炎性过程中起着至关重要的作用,有可能成为预测、诊断冠心病以及评价预后的生物学标志物,现综述如下. 展开更多
关键词 急性冠状动脉综合征 妊娠相关蛋白A 冠状动脉粥样斑块 胰岛素样生长因子结合蛋白 proteinA 胰岛素样生长因子1 PAPP-A 不稳定型心绞痛
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白介素24融合蛋白的表达、纯化和促伤口愈合功能的鉴定 被引量:1
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作者 于偌萱 周虹 梁朋 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期436-440,共5页
本研究通过优化小鼠白介素24(mIL-24)基因序列,构建以Fc-tag为标签的mIL-24-Fc融合蛋白.对CHO进行MTX分级加压筛选,获得了稳定、高表达mIL-24-Fc蛋白的阳性克隆,同时优化了CHO细胞无血清驯化与稳定表达蛋白体系.经protein A亲和层析纯化... 本研究通过优化小鼠白介素24(mIL-24)基因序列,构建以Fc-tag为标签的mIL-24-Fc融合蛋白.对CHO进行MTX分级加压筛选,获得了稳定、高表达mIL-24-Fc蛋白的阳性克隆,同时优化了CHO细胞无血清驯化与稳定表达蛋白体系.经protein A亲和层析纯化mIL-24-Fc蛋白并利用AP binding实验检测生物学活性后,小鼠皮内注射mIL-24-Fc蛋白和伤口愈合实验证明:注射mIL-24-Fc蛋白后,小鼠表皮产生2~3层细胞增生,伤口愈合速度加快. 展开更多
关键词 白介素24 proteinA 银屑病 伤口愈合
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CLINICAL AND PATHOLOGICAL MANIFESTATI-ONS OF PATIENTS WITH ANTINEUTROPHIL CYTO-PLASMIC AUTOANTIBODIES DIRECTED AGA INST PROTEINASE 3 OR MYELOPEROXIDASE 被引量:1
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作者 张? 董怡 +2 位作者 曾小峰 李永哲 唐福林 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第1期32-35,共4页
To compare the clinical and pathological manifestations of patients with antineutrophil cytoplasmic autoantibodies (ANCA) directed against proteinas e 3 (anti PR3) or myeloperoxidase (anti MPO). Methods. One hundred a... To compare the clinical and pathological manifestations of patients with antineutrophil cytoplasmic autoantibodies (ANCA) directed against proteinas e 3 (anti PR3) or myeloperoxidase (anti MPO). Methods. One hundred and forty patients with ANCA were detected for anti PR3 a nd anti MPO by ELISA. The clinical features at presentation, histopathological characteristics and outcome of all patients who were tested positive for anti P R3 or anti MPO were analysed.Results. In anti PR3 group (n=21), 16 cases (76.2%) had systemic vasculitis , in which Wegener’s granulomatosis prevailed (13 cases, 61.9%). In anti MPO g roup (n=31), 19 cases (61.3%) were diagnosed as systemic vasculitis and 12 case s (38.7%) as microscopic angiitis. For vasculitic patients with anti PR3 and a nti MPO, the disease duration at diagnosis was 9.6±2.0m and 4.4±0.9m respecti vely, P< 0.05;vasculitis activity index (BVAS) and mean number of affected organ were 22.5±2.1, 5.0±0.4 and 25.1±1.7, 4.8±0.4 respectively, P >0.05;upper r espiratory tract, eye and joint involvements were 11(68.8%), 7(43.8%), 11(68.8 %) and 7(36.8%), 2(10.5%), 5(26.3%) respectively, P< 0.05.Although there was no statistical difference in renal involvement between these two groups, patien ts with serum creatine >500 μmol/L were more commonly seen in anti MPO group t han in anti PR3 group, which were 8(42.1%) and 2(12.5%) respectively, P< 0.05 . Ten relapses were seen in anti PR3 group and only 2 in anti MPO group, but t he acute mortality rate in anti MPO group (5/19, 27.4%) was much higher than t hat in anti PR3 group (1/16, 6.3%). Conclusions. Anti PR3 and anti MPO occurred mainly in systemic vasculitis. A large divergence was seen in the disease spectrum between patients with anti PR 3 and those with anti MPO. In particular, upper respiratory tract, eye and join t involvements, granuloma formation and relapse were more prominent in anti PR3 patients. By contrast, the anti MPO patients had a more acute disease onset, m ore rapid progressive renal involvement and a higher acute mortality rate. 展开更多
关键词 antineutrophil cytoplasmic autoantibodies MYELOPEROXIDASE proteina se 3
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脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白的研究
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作者 潘莉 《河南医学研究》 CAS 2009年第4期364-367,共4页
关键词 脂肪酸结合蛋白 细胞型 proteinA 病理分化程度 P15蛋白 FABP 脂肪细胞 ALBP
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Clematichinenoside protects blood brain barrier against ischemic stroke superimposed on systemic inflammatory challenges through up-regulating A20
10
《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期48-48,共1页
Suppression of excessive inflammation can ameliorate blood brain barrier (BBB) injury, which shows therapeutic potential for clinical treatment of brain injury induced by stroke superimposed on systemic inflammatory... Suppression of excessive inflammation can ameliorate blood brain barrier (BBB) injury, which shows therapeutic potential for clinical treatment of brain injury induced by stroke superimposed on systemic inflammatory diseases. In this study, we investigated whether and how clematichinenoside (AR), an anti-inflammatory triter- pene saponin, protects brain injury from stroke superimposed on systemic inflammation. Lipopolysaccharide (LPS) was intraperitoneally injected immediately after middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats. Rat microvessel endothelial cells (rBMECs) were exposed to hypoxia/reoxygenation (H/R) coexisting with LPS. The results re- vealed that AR suppressed the excessive inflammation, restored BBB dysfunction, alleviated brain edema, de- lessened neurological dysfunction, and decreased infarct rate. Further study demon- creased neutrophil infiltration, inducible nitric oxide synthase (iNOS) , strated that the expression of nucleus nuclear factor kappa B (NF-KB), intercellular adhesion molecule-1 ( ICAM-1 ), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interlukin-1β ( IL-1β) were suppressed by AR via zinc finger protein A20. Besides, AR increased in vitro BBB integrity through A20. In con- clusion, AR alleviated cerebral inflammatory injury through A20-NF-KB signal pathway, offering an alternative medication for stroke associated with systemic inflammatory diseases. 展开更多
关键词 clematichinenoside blood brain barrier SYSTEMIC inflammation ISCHEMIC stroke zinc FINGER proteinA20 NF-KB
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几种Protein A亲和层析填料纯化重组单克隆抗体效果的比较 被引量:5
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作者 何凌冰 李乐 +2 位作者 邓义熹 蒙国基 于玉根 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期72-77,共6页
随着表达技术的进步以及发酵技术的优化,细胞发酵上清液中抗体的滴度大幅度提高,必然对下游纯化工艺的处理能力有更高的要求。Protein A亲和层析是分离单克隆抗体的一种标准纯化方法。目前已经有很多种protein A亲和填料,其配体基本上... 随着表达技术的进步以及发酵技术的优化,细胞发酵上清液中抗体的滴度大幅度提高,必然对下游纯化工艺的处理能力有更高的要求。Protein A亲和层析是分离单克隆抗体的一种标准纯化方法。目前已经有很多种protein A亲和填料,其配体基本上都是大肠杆菌发酵的重组protein A。不同厂家生产的protein A填料有各自不同的基质或键合技术,从而造成填料对抗体亲和力以及对碱耐受性的差异。针对正在研发的WLB303单克隆抗体,比较了6种不同的protein A填料的动态载量,并从洗脱溶液种类和p H两个方面进行单克隆抗体纯化条件的筛选,分析纯化后样品SEC纯度和回收率。综合考虑载量、除杂效果、回收率三个因素,Mab Select填料是最适合本抗体纯化的,SEC纯度可以达到98%,回收率可以达到100%左右。基于这些数据,对Mab Select填料进行了使用寿命试验,200次循环之后载量仅衰减了5%。 展开更多
关键词 ProteinA 动态载量 SEC纯度 回收率
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变速上样在MabSelect填料上分离WLB303单克隆抗体的研究
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作者 蒙国基 邓义熹 +2 位作者 李乐 罗豪晖 于玉根 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期65-75,共11页
随着抗体表达量的提升和生产规模的扩大,Protein A亲和层析不仅需要高载量填料,也需要提高工艺效率。变速上样的方法可以在满足载量要求的同时大大缩短工艺耗时。通过测定WLB303单克隆抗体在GE Mab Select填料多个保留时间的动态载量,... 随着抗体表达量的提升和生产规模的扩大,Protein A亲和层析不仅需要高载量填料,也需要提高工艺效率。变速上样的方法可以在满足载量要求的同时大大缩短工艺耗时。通过测定WLB303单克隆抗体在GE Mab Select填料多个保留时间的动态载量,建立一元三次方程拟合载量和保留时间的关系。以该方程计算获得填料在快、中、慢速下不同保留时间的动态载量表,并以此作为变速上样组合的参考依据。在2.7ml层析柱上使用精纯样品测试最快的变速上样组合的可行性;然后用常规纯化工艺在7ml层析柱上使用细胞培养澄清液,对最快的变速上样组合和恒速上样的两种工艺周期进行了比较,证实变速上样的方式能明显提升整体工艺效率。 展开更多
关键词 ProteinA亲和层析 变速上样 动态载量 工艺效率 单克隆抗体
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