基于液相色谱-串联质谱技术鉴定药物靶标的研究进展

药物靶标是指细胞、组织或器官的特殊结构,它能与药物相互作用,促使药物发挥疗效。全面识别药物靶标对了解药物的作用机制及其潜在的副作用至关重要。目前,应用广泛的药物靶标识别和鉴定技术,如基于活性的蛋白质分析(activity-based protein profiling,ABPP)、以化合物为中心的化学蛋白质组学(compound-centric chemical proteomics,CCCP),需要对化合物小分子进行修饰,这可能会降低甚至改变药物分子的活性。因此,无需对药物分子进行化学修饰的技术,如药物亲和反应的靶标稳定(drug affinity responsive target stability,DARTS)、细胞热位移分析(cellular thermal shift assay,CETSA)和热蛋白质组分析(thermal proteome profiling,TPP),逐渐成为药物靶标研究的重要手段。液相色谱-串联质谱技术是鉴定药物靶标蛋白的重要工具。本文综述了基于液相色谱-串联质谱技术的药物靶标研究方法的应用,并对药物靶标鉴定技术的未来发展进行了展望。

中国食醋中苯乳酸的检测、鉴定及其与醋酸的联合抑菌作用

从我国食醋中分离纯化并采用核磁共振(1H和13C)技术鉴定苯乳酸,建立苯乳酸的超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱快速测定方法,分析我国72种食醋中的苯乳酸含量。结果表明,72种食醋中均可检出苯乳酸,谷物酿造食醋中苯乳酸含量显著高于果醋,平均质量浓度为227.89 mg/L,最高质量浓度为618.69 mg/L。工艺分析显示食醋中苯乳酸质量浓度与原料和发酵方式密切相关,以糯米为原料的食醋经固态发酵后,苯乳酸含量最高。采用时间杀菌曲线和扫描电镜法考察联合抑菌效应,结果表明食醋中苯乳酸与醋酸对食品中多种腐败菌和致病菌具有协同抑菌作用,苯乳酸和醋酸联用可以破坏金黄色葡萄球菌和鼠伤寒沙门氏菌的菌体形态,导致金黄色葡萄球菌内容物泄漏,鼠伤寒沙门氏菌菌体皱缩。本研究为解析食醋的健康功能提供了新的科学依据,为苯乳酸在食品生物防腐中的应用提供理论依据。

蓝莓叶多酚组成及其抗食源性致病菌活性分析

利用高效液相色谱-二级质谱对蓝莓叶多酚组成进行研究,发现蓝莓叶多酚含有槲皮素-3-O-戊糖苷、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、对香豆酰奎尼酸及B型原花青素二聚体等多种酚类物质;通过对6种常见食源性致病菌的抗菌效果研究,发现蓝莓叶多酚具有广谱抗菌性,对鲍氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌和枯草芽孢杆菌具有较好的抑制效果,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,革兰氏阳性(G+))和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,革兰氏阴性(G-))最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)<9.30 mg/m L,对其他菌株的MIC<4.65 mg/m L,抑菌活性由强到弱为:金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>单增李斯特菌>鲍氏志贺氏菌>肠炎沙门氏菌>枯草芽孢杆菌。结果表明:蓝莓叶多酚含有较多生物活性组分,抑菌性强且抑菌谱广泛,可以开发为新型天然防腐剂。

应用液相色谱-串联质谱测定慈竹笋壳提取物成分及其抑菌活性

通过索式抽提的方法从慈竹笋壳中提取活性物质,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定其组成成分。采用K-B抑菌圈法测定慈竹笋壳提取物对4种细菌及2种真菌的抑菌效果,同时测试了笋壳提取物的最小抑菌质量浓度及试验温度、处理时间对其抑菌作用的影响。结果表明:慈竹笋壳提取物包含388种代谢产物,且有20种代谢物的质量超过了整个代谢物总质量的1%。慈竹笋壳提取物能够有效抑制大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌这4类细菌,对桔青霉菌、海绵胶煤炱菌2种真菌无明显抑制作用。其中,肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌的最小抑菌质量浓度为4.375 g·L^(-1),金黄色葡萄球菌、粪肠球菌最小抑菌质量浓度为8.750 g·L^(-1)。抑菌活性具有热稳定性,且随浸泡时间的增加,抑菌活性也会提升。

母乳中活性多肽测定及对坏死性小肠结肠炎的预防作用

目的对母乳中活性多肽进行生物学分析，寻找具有抑菌活性的多肽，探讨母乳中活性多肽对坏死性小肠结肠炎的防治作用。方法采集6例早产儿的身体健康母亲产后2～5d的母乳5mL／次，共6次，混匀，运用超滤截留法分离早产儿产妇乳汁中的活性多肽，串联质谱法对分离的活性多肽进行分析，生物信息学软件筛选出具有生物学功能的多肽，再应用蛋白功能聚类在线分析软件，根据其前体蛋白的生物学功能预测出与感染有关的多肽。选用坏死性小肠结肠炎常见致病菌大肠杆菌菌株一大肠杆菌标准菌株（ATCC25922）悬液，用头孢哌酮舒巴坦钠溶液，进行纸片法药敏试验和杀菌动力学试验，对乳汁中的活性多肽的抑菌效果进行验证。结果母乳中含有的4311条多肽被成功鉴定，其中1370条肽为非差异多肽，具有生物学活性的多肽188条，其中有11条肽与感染相关。母乳中内含肽复合物药敏纸片、杀菌动力学试验对大肠杆菌均有抑菌活性。结论母乳中活性肽复合物具有抑菌活性，是母乳预防坏死性小肠结肠炎的重要环节。期待11条与感染相关的肽中蕴含具有体内外生物活性，对坏死性小肠结肠炎有预防作用的抑菌肽。

鸡β-防御素2在大肠杆菌中的串联表达及抗菌活性分析

利用基因串联技术表达鸡β-防御素2(AvBD2)重组蛋白,分析其生物结构活性以及蛋白表达量变化。构建了重组串联表达载体p ET-28a-AvBD2op-AvBD2,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达融合蛋白,经镍柱纯化后进行Western-blot检测、Tricine-SDS-PAGE分析和MALDI-TOF-MS质谱分析。结果显示,单表达工程菌和串联表达工程菌均在9500 u处有特异性条带;采用BCA法测得的单、串联表达工程菌纯化后的蛋白质量浓度分别为0.258和0.769 mg/m L;通过凝胶成像系统分析,单表达工程菌中目标蛋白的表达量约占上清总蛋白的10.3%,而串联表达的约占上清总蛋白的18.3%;MALDI-TOF-MS质谱分析结果表明,单、串联表达蛋白产物的分子质量分别为4 300、7 811 u;琼脂孔穴扩散抑菌法检测证明纯化蛋白对多种微生物具有不同的抗菌活性。