蝴蝶兰叶片PLB诱导因子的优化

以蝴蝶兰‘0404’嫩叶为试材,研究无机盐浓度、生长调节剂、椰子汁剂量、培养基物理状态及光照条件对类原球茎的诱导。结果表明:采用细胞分裂素TDZ和6-BA复配比单独使用TDZ诱导率提高13.3%,液体培养明显优于固体培养,散射光优于黑暗和光照处理,最优培养基为1/2MS+TDZ 1.0 mg/L+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+CM 15.0%+蔗糖30 g/L,pH5.4。

碳源和有机添加物对文心兰原球茎增殖的影响

以薄叶系文心兰Oncidiumaloha'Iwanaga'茎尖诱导形成的原球茎(PLB)为外植体,采用树脂膜培养容器(CP)的液体静置培养方式,比较不同碳源(蔗糖、麦芽糖、山梨醇)和不同有机添加物(蛋白胨、胰蛋白胨、苹果汁、番茄汁、椰子汁)对文心兰PLB增殖的影响.结果表明,以蔗糖为碳源时,PLB在鲜重和干物重方面显著高于麦芽糖和山梨醇处理,同时PLB分化幼苗数较少;不同有机添加物处理,蛋白胨对PLB增殖效果显著,其次分别为蕃茄汁>椰子汁>苹果汁>蛋白胨.在幼苗分化方面,胰蛋白胨、苹果汁和椰子汁处理中,幼苗分化数显著高于蛋白胨和番茄汁处理,并在处理间存在显著性差异.蛋白胨和番茄汁两处理间在鲜重、干物重和幼苗分化数方面无显著性差异.

蝴蝶兰快速繁殖研究进展

本文综述了我国有关蝴蝶兰组织培养及快繁技术的研究进展,着重阐述了不同外植体、培养基等因素对类原球茎诱导、增殖和分化的影响;扼要介绍了种子的无菌播种快繁;并对我国未来蝴蝶兰的研究与开发进行了初步的探讨。

铁皮石斛拟原球茎的发生过程

以铁皮石斛Dendrobium officinale的茎尖为外植体,在特定条件下诱导产生拟原球茎,进一步培养形成幼苗。结果表明:原球茎最优诱导培养基为1/2MS(Murashige and Skoog)+0.5mg·L-16-苄基嘌呤(6-BA)+0.05mg·L-1萘乙酸(NAA)+0.1mg·L-1激动素(KT)+1.0g·L-1水解乳蛋白(LH)。复合添加物的试验表明,土豆汁对拟原球茎(PLBs)的增殖有很好的促进作用。对铁皮石斛拟原球茎的解剖学研究表明:拟原球茎是由位于顶端分生组织下的薄壁细胞脱分化形成的胚性细胞发育而来。外植体接种后20d左右外植体基部开始膨大,40d左右出现肉眼可见的乳白色突起,这些突起逐渐增大,成为圆形至卵圆形的乳白色拟原球茎。在条件适宜的拟原球茎增殖培养基上继续培养,拟原球茎边缘的薄壁细胞继续脱分化,进一步发育形成球形的细胞团,可继续形成突起,使拟原球茎不断增殖。

蝴蝶兰类圆球茎的化学诱变试验

用不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)和叠氮化钠(NaN3)对蝴蝶兰类圆球茎(PLB)作不同时间处理。结果显示:EMS和NaN3均可使部分PLB白化或褐化并逐渐致死。0.4%EMS接近PLB半致死剂量。PLB切片观察发现:用EMS和NaN3处理均可使细胞体积增大,细胞形状改变,细胞质浓缩。较高浓度NaN3处理的PLB细胞中出现晶体物质、双核、畸形核和核仁丢失等现象。较高浓度EMS处理的PLB细胞中出现微核、畸形核、多核、核破裂和核仁丢失等现象。同浓度的同种诱变剂随处理时间的增加材料的变异程度有增大趋势,但不很显著。EMS比NaN3的诱变处理效果好。0.5%EMS可作为创造蝴蝶兰PLB突变体的参考浓度。

云南独蒜兰原球茎诱导与增殖的研究

为组织培养快速繁殖云南独蒜兰,对其进行了种子无菌萌发的基本培养基、添加物与激素以及原球茎增殖激素配比的优化筛选。结果表明:在KC、1/2MS、B5这3种基本培养基中,B5较适于种子萌发;添加蛋白胨5 g/L、马铃薯泥50 g/L或活性炭粉1 g/L均有利于种子萌发形成原球茎;生长激素NAA、2,4-D对种子无菌萌发具有促进作用,而细胞分裂素6-BA则抑制了种子萌发。在以B5附加AC(活性炭)1 g/L的基础培养基中,激素组合6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L更有利于原球茎的增殖与生长。

寒兰的快速繁殖技术

以寒兰(CymbidiumkanranMakino)根状茎为外植体,采用B5基本培养基,并附加不同浓度的6-BA、NAA、TDZ(苯基噻二唑基脲-thidiazuron)和S-3307(优康唑-uniconazole),对类原球茎的诱导、继代增殖、分化、生根等进行研究。结果表明:诱导类原球茎的最佳培养基为B5+TDZ0.50mgL-1+NAA0.25mgL-1,诱导率98.3%;继代增殖的最佳培养基为B5+S-33071.0mgL-1+NAA0.2mgL-1+蔗糖3.5%,增殖系数9.4;类原球茎分化的最佳培养基为B5+S-33070.75mgL-1+6-BA1.0mgL-1+NAA0.4mgL-1,分化率87.8%;最佳的生根培养基为1/2B5+NAA0.2mgL-1+活性炭0.05%,生根率达100%。

铁皮石斛类原球茎增殖和分化的研究

通过单因素浓度试验和正交试验研究了5种金属离子、不同激素组合及不同天然附加物对铁皮石斛类原球茎增殖、分化的影响。试验结果表明,5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Mg2+(Fe2+(Ca2+(Mn2+(Zn2+,类原球茎增殖的最佳培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+10%马铃薯汁+3%蔗糖(含Mg2+1.0 mmol/L、Ca2+2.0 mmol/L、Fe2+0.1mmol/L、Mn2+0.1mmol/L和Zn2+0.03 mmol/L)。培养基1/2MS+NAA 0.5mg/L+20%马铃薯汁+蔗糖20g/L+琼脂0.8g/L最适于铁皮石斛类原球茎的分化。

药用霍山石斛原球茎的液体悬浮培养

目的:考察霍山石斛原球茎在液体培养中增殖、水溶性多糖与总生物碱积累的特征。方法:在霍山石斛试管苗茎段原球茎诱导与继代培养的基础上,进行原球茎的液体悬浮培养,分析原球茎生长动态,用比色法测定水溶性多糖与总生物碱的含量。结果:霍山石斛茎段在NAA或NAA与KT组合的MS培养基上可诱导出原球茎,MS基本培养基最适合原球茎继代培养增殖;原球茎在液体悬浮培养中最大比生长速率0.044·d^(-1),倍增时间15.8 d,最适生长周期为4周,水溶性多糖和总生物碱含量分别是3.75％和0.0261％。结论:霍山石斛原球茎液体培养生长良好,具有目的化学成分的合成能力,为发酵培养开发霍山石斛资源提供可能。

叠氮化钠诱变对离体蝴蝶兰类原球茎生理的影响

以2、4、6和8mmol/L的叠氮化钠浸泡6h处理蝴蝶兰类原球茎后进行组织培养,测定了处理组和对照的蝴蝶兰类原球茎中脯氨酸、丙二醛和可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力。结果表明,经叠氮化钠处理的类原球茎中的超氧化物歧化酶活力、脯氨酸和丙二醛含量均有上升,而过氧化氢酶活力与可溶性糖含量均有下降,并呈现浓度梯度效应。叠氮化钠诱变的半致死剂量介于4～8mmol/L之间,其中4mmol/L的叠氮化钠对蝴蝶兰类原球茎生理损伤较小,因此认为4mmol/L的叠氮化钠是诱变蝴蝶兰类原球茎较为合理的浓度。

根癌农杆菌介导大花蕙兰遗传转化的研究

以大花蕙兰原球茎(PLBs)为外植体,采用EHA105和LBA4404 2种根癌农杆菌菌株与pCAMBIA1301质粒构建工程菌介导,以建立大花蕙兰遗传转化体系,并比较不同受体处理方式、菌液浓度和侵染方式等对大花蕙兰转化的影响.结果表明:(1)以切成3 mm左右的PLBs小块作为受体材料,用OD600值为0.6的LBA4404根癌农杆菌菌株,并用MS+1.0 mg/L BA+200μmol/L AS(乙酰丁香酮)的液体培养基将菌液等体积稀释侵染,转化率可达62.5%.(2)大花蕙兰对潮霉素(Hyg)十分敏感,5 mg/L Hyg对转化后的PLBs有较好的筛选效果,筛选后最高成活率为13.0%.(3)PCR检测初步证明,通过根癌农杆菌介导的方法获得了2株转基因大花蕙兰植株.

高分子树脂膜培养容器在文心兰原球茎增殖中的应用

以薄叶系文心兰 (Oncidium)品种‘AlohaIwanaga’茎尖诱导形成的原球茎 (protocorm likebody ,PLB)为外植体 ,采用树脂膜培养容器 (CP)和三角瓶 ,分别以MS、1 2MS为基本培养基 ,比较 5种不同培养方式 (三角瓶固体方式、三角瓶液体方式、三角瓶液体振荡方式、CP固体方式、CP液体静置方式 )、CO2 施肥和 4种不同糖浓度 (5、10、2 0、30g L)对文心兰原球茎 (PLB)增殖效果的影响 .通过对PLB增殖后的鲜重、干物重和PLB分化幼苗等主要指标分析后表明 :①以 1 2MS为基本培养基、应用CP作培养容器的液体静置培养方式是该实验研究中文心兰PLB增殖的最佳培养方式 ;②CO2 施肥在一定程度上增加了PLB增殖后的鲜重和干物重 ,表明培养容器内的CO2 浓度提高 ,能够促进文心兰PLB的增殖 ;③培养基中 4种不同糖浓度处理中 ,2 0g L糖浓度下 ,增殖后PLB鲜重和干物重均高于其他处理 .糖浓度在 2 0g L以下时不利于PLB的快速增殖 ,高于 2 0g L时对PLB的增殖有一定的抑制作用 .

悬浮培养霍山石斛原球茎合成活性多糖的研究

本文考察了基本培养基、碳源、氮源以及有机添加物对霍山石斛原球茎液体培养合成活性多糖的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1/2基本培养基中,以1/2MS和N6最适多糖合成,继代培养30d,总多糖产率分别达到479.47mg/L和417.05mg/L。使用单一碳源时,葡萄糖对多糖的积累优于蔗糖和果糖,在30g/L时,总多糖产率达到1034.96mg/L。在一定浓度范围内,氮源种类对多糖的合成影响不太明显,但氮源浓度是主要因素,以10mmol/L最佳。另外,100g/L的马铃薯提取液与100g/L的香蕉提取液均有利于多糖的合成。

金属离子对霍山石斛类原球茎增殖及植株再生的影响

采用单因素浓度试验和正交试验研究了Mg2+、Ca2+、Fe2+、Mn2+和Zn2+离子对液体培养霍山石斛类原球茎增殖的影响。结果表明,5种金属离子对类原球茎增殖影响的主次顺序为Fe2+>Mn2+>Mg2+>Ca2+>Zn2+,促进类原球茎增殖的优化组合为Mg2+1.5 mmol.L-1、Ca2+4.5 mmol.L-1、Fe2+0.1mmol.L-1、Mn2+0.5 mmol.L-1、Zn2+0.06 mmol.L-1。经优化的液体培养基增殖的类原球茎能保持植株再生能力,平均每克类原球茎增殖后可再生植株1 985.2株,是相同时间内对照类原球茎再生植株数的4.2倍。

盾叶薯蓣类原球茎的离体诱导及快繁体系的建立

为解决盾叶薯蓣离体培养中试管苗移栽困难的难题,以盾叶薯蓣带腋芽的茎段为外植体,借助正交试验设计方法,离体诱导出类原球茎并建立了类原球茎微繁殖技术体系。结果表明:以带腋芽茎段为外植体诱导致密愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L+KT0.6mg/L+蔗糖3%;类原球茎诱导和增殖培养基为:MS+6-BA4.0mg/L+KT1.0mg/L+蔗糖6%;类原球茎生根培养基:1/2MS+NAA 0.3mg/L+IAA 0.8mg/L+活性炭0.3%+蔗糖1.5%。经该途径诱导得到的生根类原球茎植株经炼苗后移栽的成活率可达到90%以上。

大花蕙兰工厂化繁殖技术研究

研究了大花蕙兰原球茎诱导技术，快繁增殖技术，同步化发育技术以及生根苗假植技术。结果表明：①适当浓度的6-BA使各参试品种都能产生原球茎，3个品种平均诱导率约为64％，其中1#、2#、3#品种的最佳诱导率分别为80％、47％、64％。②较低浓度6-BA与较低浓度的NAA配合，可使各参试品种原球茎30天的平均增殖率达到4—5倍，个别增殖达10倍以上。③通过综合调控可以使90％以上的原球茎按照期望的方向同步发育。

长期离体培养的春石斛兰类原球茎生长及生根条件的优化

为解决春石斛兰(Dendrobium nobile)类原球茎(protocorm-like body,简称PLB)长时期离体培养后生长缓慢、形成的嫩梢瘦小及根系难于发生等问题,本文从生长调节剂、有机添加物、蔗糖和嫩梢高度等因子,对PLB的增殖、生长与生根等方面进行了系统研究。结果表明:0.5mg/L BA最适合PLB增殖和生长;20g/L的蔗糖最适合嫩梢的生根;IBA虽在一定程度上促进生根,但嫩梢高度才是决定生根的关键,2.5cm的嫩稍在添加0.05mg/L的IBA的培养基上,生根率提高到51.11%;鲜重增长倍数与PLB增殖倍数的比值(F/P值)是衡量PLB正常生长与否的一个重要指标,F/P≥0.6时,PLB生长健壮。

添加物和植物生长调节剂对铁皮石斛离体快速繁殖的影响

以铁皮石斛未成熟种子为外植体,在离体条件下进行原球茎诱导,类原球茎增殖、分化、生根试验研究。结果表明,以种子萌发直接诱导原球茎的适宜培养基为MS+1.0mg/L BA+0.5mg/L NAA+0.5g/L活性炭(AC)+1.0g/L水解酪蛋白(CH),诱导率达95%以上。在MS+1.0mg/L BA+0.5mg/L KT+0.5mg/L NAA+0.5g/L AC+0.6g/L CH条件下可获得类原球茎最大增殖系数(达18.7),该培养基也适宜于维持类原球茎的增殖保存。类原球茎的最大分化率为93.7%,所需的培养基成分为MS+0.5mg/L BA+0.5mg/L KT+0.2mg/L NAA+0.5g/L AC+0.6g/L CH。试管苗在1/2 MS+0.5mg/L NAA+0.5g/L AC培养基上生根率达100%,且根系健壮发达,移栽后全部成活,长势良好。

蔷薇属植物类根体和类原球茎发生发育的影响因子

【目的】以多种蔷薇属植物的叶片为外植体,研究影响类根体和类原球茎发生发育的影响因子,为进一步揭示类根体和类原球茎发生发育的机理及蔷薇属植物分子育种奠定基础。【方法】在MS基本培养基上,通过改变植物生长调节剂种类、浓度、培养条件和类根体与愈伤组织的完整性来观察并统计类根体和类原球茎发生发育情况。【结果】类根体的发生受生长素类调控,3种不同结构类型的生长素类物质诱导的类根体在数量和质量存在差异,其中2,4-D对类根体的诱导效应最明显,IBA次之,NAA最差,细胞分裂素不能诱导类根体的形成;形成高质量的类根体暗培养和是必需条件,与光暗培养差异极显著,类根体的发生率和每个外植体类根体数存在差异;相反,类根体发育成类原球茎必需有光照的参与,暗培养的类根体不能变绿、膨大并最终发育成类原球茎,TDZ和光照在类根体发育成类原球茎的过程中具有协同作用;被从顶部截去1/3长度的类根体仍然可以变绿并发育为类原球茎;相反,将类根体从愈伤组织直接剪下,无论直插还是平放,类根体都不能变绿发育成类原球茎,而是逐渐变褐死亡。【结论】生长素类物质控制类根体的发生具有普遍性,但形成的类根体在数量和质量上存在差异;光照抑制类根体的发生但可以促进类原球茎的产生,光照和TDZ在类根体发育成类原球茎过程中具有协同作用;类根体先端不是形成类原球茎的必需条件而下部组织的完整性是必不可少的。

蝴蝶兰原球茎液体增殖培养的研究

以茎尖诱导形成的原球茎为外殖体，采用液体培养方式探讨了不同浓度的激素配比、蔗糖浓度和添加不同量的新鲜液汁对蝴蝶兰原球茎增殖的影响，并比较了液体和固体两种培养方式的原球茎增殖特征。结果表明：不同浓度的外源激素及其配比对蝴蝶兰原球茎增殖影响不明显，但对原球茎生长影响较大，6-BA2．0mg／L＋Ad1．0mg／L＋NAA0．5mg／L的激素浓度组合比较适合蝴蝶兰原球茎增殖，蔗糖浓度对蝴蝶兰原球茎增殖和生长影响较大，适合蝴蝶兰PLBs增殖的蔗糖浓度为20g/L，添加10％～40％的新鲜椰汁对蝴蝶兰原球茎增殖生长有明显促进作用；原球茎液体增殖培养的时间不宜超过4周，5周内连续培养增殖曲线呈倒“V”字形；液体增殖培养的原球茎分化成苗的时间相对较晚。