Smad7/Psmad2表达失衡在糖尿病肾病大鼠肾脏组织的动态观察

目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中转化生长因子(TGF)-β1的下游正负反馈调节因子Smad7、Psmad2在肾脏的表达变化及对细胞外基质主要成分CollagenⅣ表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分成4组:CON、DM4W、DM8W、DM16W组。STZ诱导糖尿病肾病模型,Masson染色动态观察各组大鼠胶原合成变化。Westernblot、免疫组化方法动态观察Smad7、Psmad2、CollagenⅣ表达变化。结果:Masson染色结果示,随糖尿病肾病进展,肾内胶原生成逐渐增多,Smad7从4周开始即比正常组表达减少,且随时间进展逐渐减少(P<0.05)。Psmad2、CollagenⅣ从4周开始表达增多,随时间的延长逐渐增多(P<0.05)。到16周Smad7/Psmad2明显失衡。结论:TGF-β/Smad信号通路的正负反馈调节蛋白失衡导致细胞外基质大量沉积及胶原生成可能是糖尿病肾病肾脏纤维化进展重要信号转导途径之一。

糖尿病大鼠肾组织内Smads信号通路活化的动态观察

目的动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1的下游信号分子正负反馈调节因子Smad2及其活化形式Psmad2在肾脏的表达变化。方法 40只SD大鼠随机分成4组:正常对照组、4周组、8周组和16周组。链脲菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型,动态观察各组大鼠血压,24h尿量,ELISA测尿液浓度从而行24h尿白蛋白定量、肾重/体重、血肌酐和肾脏病理。免疫组化、Western blotting方法动态观察糖尿病大鼠肾病发生发展过程中肾组织内Smad2和Psmad2蛋白表达。结果 Smad2蛋白4周表达比正常增多,但差异无统计学意义(P>0.05),从8周起表达明显多于正常组(P<0.05),Psmad2蛋白从4周开始即比正常组表达增多(P<0.05),且随着糖尿病进展逐渐增加。结论 Smad2信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化过程,早期Smad2信号蛋白活化较明显,继而Smad2蛋白也表达增加,再刺激Smad2活化增多,形成的放大效应是导致糖尿病肾病肾脏纤维化进展重要的信号转导途径之一。

TGF-β1/Smads通路在体外培养的鼻息肉组织重构中的作用

目的·在体外培养的原代鼻息肉组织中检测探讨TGF-β1/Samds信号通路在鼻息肉组织重构中的作用。方法·筛选慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)和慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)各15例,对照组为单纯鼻中隔偏曲患者10例。在术中收集鼻黏膜或鼻息肉组织,通过免疫组织化学染色(SP法)检测组织中蛋白表达水平及分布;通过马松(Masson)染色法检测胶原表达差异;通过实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测mRNA表达水平,Western blotting检测蛋白质表达水平。体外培养15例鼻息肉组织,用转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)进行刺激,使用qRT-PCR、Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测mRNA、蛋白和上清胶原表达情况。结果·与CRSsNP组相比,CRSwNP组中TGF-β1、Smad2/3的蛋白和mRNA表达均降低(均P<0.05)。在所有CRS中,TGF-β1与pSmad2/3的蛋白表达呈正相关(r=0.991,P<0.01),与Smad2、Smad3mRNA表达均呈正相关(r=0.581,r=0.658,均P<0.01),与胶原表达呈正相关(r=0.982,P<0.01)。在体外培养的鼻息肉中,TGF-β1能促进pSmad2/3、Smad2、Smad3和胶原的表达。结论·TGF-β1/Smads通路在CRSwNP的组织重构中有重要作用,可能是鼻息肉胶原减少、组织水肿的重要原因之一。

Peutz-Jeghers综合征中转化生长因子β/smad信号通路相关蛋白的表达及意义

目的检测转化生长因子(TGF)β/smad信号通路相关蛋白在人Peutz-Jeghers综合征(PJS)中的表达,探讨其与PJS致病基因LKB1表达的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测20例PJS息肉及20例正常肠黏膜组织LKB1、TGFβ1、psmad2蛋白的表达和分布,比较两种组织表达程度的差异。结果与正常粘膜相比,PJS组织中的LKB1、TGFβ1、psmad2蛋白均有降低,LKB1、TGFβ1蛋白表达差异有显著性(P<0.05),psmad2蛋白表达差异无显著性。PJS组织中LKB1与TGFβ1蛋白表达呈正相关,有统计学意义(r=0.474,P=0.04),TGFβ1与psmad2蛋白表达呈正相关,有统计学意义(r=0.491,P=0.033)。结论在PJS息肉中TGFβ/smad信号通路可能受到LKB1的分子调控。TGFβ/smad信号通路可能参与PJS息肉的发生。

全反式视黄酸诱发胎鼠腭裂及抑制Smad2磷酸化的作用

目的观察过量全反式视黄酸(atRA)对胎鼠腭发育的影响及其对Smad2磷酸化的调节作用。方法将ICR孕鼠随机分为atRA实验组和溶剂对照组,在11天(查见阴栓为孕0天),分别灌胃给予80mg/(kg·d)atRA或等体积的玉米油溶剂。常规HE组织学染色观察胎鼠上腭发育情况;免疫组化和Western Blot检测突中嵴上皮内pSmad2的表达。结果80mg/(kg·d)atRA可导致90%胎鼠发生腭裂;在腭突融合过程中,中嵴上皮细胞内Smad2被内源性的激活,出现明显磷酸化,在80mg/(kg·d)atRA组,可检测到总Smad,但是不能检测到磷酸化pSmad2的表达。结论孕期过量atRA可导致胎鼠发生腭裂,其致畸作用机制可能与中嵴上皮细胞内Smad2磷酸化被抑制有关。

菌毛素介导牙龈卟啉单胞菌对食管鳞癌促进作用

目的:探究牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis)菌体表面菌毛素(fimbrillin, FimA)在 P. gingivalis促进食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)进展过程中的作用。 方法:野生型 P. gingivalis与 fimA基因缺失型 P. gingivalis( fimA-/-P. gingivalis)经形态学和PCR鉴定后感染ESCC细胞,免疫荧光、CCK-8、Transwell小室检测 fimA-/-对 P. gingivalis侵入细胞、增殖、迁移和侵袭能力影响,Western blot检测pSmad2/3变化,裸鼠皮下成瘤检测荷瘤生长。 结果:fimA-/-P. gingivalis与野生型 P. gingivalis比较,FimA缺失可能降低菌体间黏附, fimA-/-P. gingivalis侵入NE6-T细胞内细菌数目减少,刺激NE6-T和KYSE30细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,pSmad2/3激活降低, fimA-/-P. gingivalis感染的KYSE30在裸鼠皮下生长较野生型 P. gingivalis明显降低。 结论:FimA介导了 P. gingivalis促进ESCC演进的作用,是阻断 P. gingivalis促肿瘤作用的潜在靶点分子。