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丙二酸盐克罗诺杆菌pspA基因的干燥诱导及表达载体构建
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作者 汪馨 董晶晶 叶应旺 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第3期402-407,共6页
噬菌体休克蛋白(phage shock protein,Psp)系统目前已被证明与包膜应激反应相关。为了探索干燥胁迫下丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)噬菌体休克蛋白A(PspA)的作用,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain r... 噬菌体休克蛋白(phage shock protein,Psp)系统目前已被证明与包膜应激反应相关。为了探索干燥胁迫下丙二酸盐克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)噬菌体休克蛋白A(PspA)的作用,文章通过实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术验证干燥胁迫可以诱导丙二酸盐克罗诺杆菌PspA编码基因pspA显著表达,提示Psp系统对克罗诺杆菌抗干燥胁迫具有一定的作用。该文成功克隆出丙二酸盐克罗诺杆菌pspA基因并构建pET28a-EGFP-PspA原核表达载体,诱导PspA的高效表达,可用于后续分析PspA在干燥胁迫下的功能及定位情况,以期对丙二酸盐克罗诺杆菌Psp系统的干燥胁迫机制展开进一步的研究和讨论。 展开更多
关键词 丙二酸盐克罗诺杆菌 pspa基因 原核表达 干燥胁迫
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肺炎链球菌毒力因子PspA的原核表达、纯化及鉴定 被引量:1
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作者 胥文春 曹炬 +3 位作者 许颂霄 罗进勇 阳强 尹一兵 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第6期571-574,共4页
目的:通过构建原核表达载体,获得肺炎链球菌毒力因子PspA重组蛋白。方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将PspA序列克隆到原核表达载体PET-32(a)上,用酶切及测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)... 目的:通过构建原核表达载体,获得肺炎链球菌毒力因子PspA重组蛋白。方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将PspA序列克隆到原核表达载体PET-32(a)上,用酶切及测序鉴定。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,进行蛋白纯化,获得的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果:克隆的DNA序列与GenBank中的数据相符,获得的重组蛋白PspA纯度达到90%。结论:成功表达和纯化了PspA,为肺炎链球菌多肽联合疫苗研制和该蛋白的结构生物学分析奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 pspa 疫苗
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发菜PspA基因克隆及其转基因植物的抗旱性分析 被引量:3
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作者 王猛 李晓旭 +4 位作者 张筝 马彩霞 马晓蓉 王玲霞 梁文裕 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期502-511,共10页
为探讨发菜噬菌体休克蛋白A(PspA)的分子信息和基因功能,本研究通过设计特异引物克隆发菜PspA基因,采用qRT-PCR技术,分析发菜PspA基因在干旱胁迫下的表达模式;构建PspA真核表达载体pCAM35s-GFP-PspA,对PspA进行亚细胞定位和PspA基因拟... 为探讨发菜噬菌体休克蛋白A(PspA)的分子信息和基因功能,本研究通过设计特异引物克隆发菜PspA基因,采用qRT-PCR技术,分析发菜PspA基因在干旱胁迫下的表达模式;构建PspA真核表达载体pCAM35s-GFP-PspA,对PspA进行亚细胞定位和PspA基因拟南芥遗传转化,并对阳性转化拟南芥分别进行Southern和Western杂交验证;对转基因植株进行抗旱实验,结果表明,PspA基因全长为777 bp,干旱胁迫下发菜PspA基因表达量显著增加;PspA定位于细胞膜上,通过花絮浸染法获得稳定遗传的转PspA基因拟南芥。Southern杂交表明,PspA基因已成功导入拟南芥基因组中并以低拷贝形式存在,Western blot进一步证实PspA蛋白在转基因拟南芥中成功表达。在干旱胁迫下,转PspA基因拟南芥生长状态明显好于野生型植株。研究结果为深入探讨发菜PspA基因功能及其在响应干旱胁迫过程中的应答机制奠定了基础。 展开更多
关键词 发菜 pspa基因 亚细胞定位 遗传转化 差异表达
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PspA外源表达对枯草芽孢杆菌168蛋白质分泌的影响 被引量:3
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作者 刘大伟 王正祥 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2008年第5期855-858,共4页
PspA同源物广泛存在于细菌和高等生物的组织中。在本研究中克隆了来源于地衣芽孢杆菌的PspA基因,并将其克隆于用于大肠-芽孢穿梭诱导表达载体pDG-StuI中构建重组质粒pDG-PspA。将构建的诱导表达型的重组质粒转化到Bacillus subtilis 168... PspA同源物广泛存在于细菌和高等生物的组织中。在本研究中克隆了来源于地衣芽孢杆菌的PspA基因,并将其克隆于用于大肠-芽孢穿梭诱导表达载体pDG-StuI中构建重组质粒pDG-PspA。将构建的诱导表达型的重组质粒转化到Bacillus subtilis 168中,研究PspA的外源表达对该菌的生长,总蛋白分泌,以及Sec分泌途径中α-淀粉酶分泌的影响,结果表明,PspA基因的外源表达,在发酵过程后期能在一定程度上提高总蛋白的分泌量,在发酵过程后期能在一定程度上提高分泌的α-淀粉酶浓度。 展开更多
关键词 BACILLUS SUBTILIS pspa 蛋白质分泌
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PspA免疫小鼠抗肺炎链球菌侵袭性感染研究 被引量:4
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作者 胥文春 曹炬 +3 位作者 许颂霄 罗进勇 朱旦 尹一兵 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第9期783-786,共4页
目的:获取原核表达的肺炎链球菌PspA重组蛋白并研究其作为疫苗的价值.方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将编码PspA抗原表位在内的部分序列克隆到原核表达载体PET-32(a)内,酶切及测序鉴定重组质粒转化... 目的:获取原核表达的肺炎链球菌PspA重组蛋白并研究其作为疫苗的价值.方法:分离培养肺炎链球菌TIGR4,获取其染色体DNA,采用基因体外重组法将编码PspA抗原表位在内的部分序列克隆到原核表达载体PET-32(a)内,酶切及测序鉴定重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,将获得的重组蛋白用Western Blot鉴定,镍柱纯化并透析除盐.用重组蛋白免疫动物,观察PspA抗体对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用.结果:DNA序列与Gen-Bank中的数据相符,所表达纯化的蛋白经Western Blot证实为PspA,其抗体在肺炎链球菌感染中对小鼠有保护作用.结论:重组PspA刺激产生的抗体能够有效抵抗肺炎链球菌TIGR4侵袭性感染,该重组蛋白可作为肺炎链球菌多肽联合疫苗的组成部分之一. 展开更多
关键词 肺炎链球茵 肺炎链球茵表面蛋白A 疫苗
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肺炎链球菌疫苗候选抗原PspA异家族亚类间交叉反应评价 被引量:2
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作者 马千里 张巧 +2 位作者 李琦 姚伟 王长征 《湖南中医药大学学报》 CAS 2009年第7期30-33,共4页
目的:观察肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)在临床肺炎链球菌自然感染情况下家族分布及异家族亚类间抗原抗体交叉反应情况,探索肺炎链球菌PspA核酸疫苗的抗原组成形式。方法:采集我院42例临床侵入性肺炎链球菌感染菌... 目的:观察肺炎链球菌DNA疫苗候选抗原肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)在临床肺炎链球菌自然感染情况下家族分布及异家族亚类间抗原抗体交叉反应情况,探索肺炎链球菌PspA核酸疫苗的抗原组成形式。方法:采集我院42例临床侵入性肺炎链球菌感染菌株,及患者恢复期(第21±3天)的血清样本,同期确诊为非感染性疾病患者36例血清样本为对照组,细菌基因组特异性PCR及测序比对鉴定PspA家族分布,酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清PspA抗体与PspA蛋白6种亚类抗原的交叉反应情况。结果:42株肺炎链球菌中以PspA家族Fam1-Clade2(31.0%)和Fam2-Clade3(47.6%)的菌株为优势分布,所有侵入性肺炎链球菌感染患者血清中针对PspA-Fam1特异性抗体水平高于针对PspA-Fam2的特异性抗体水平,血清PspA抗体与PspA蛋白6种亚类抗原的交叉反应发现异家族各亚类间交叉反应弱,但同家族亚类间显著交叉反应以Fam1-Clade1和Fam2-Clade3为优势。结论:肺炎链球菌PspA核酸疫苗靶抗原的组成时应同时包括产生高保护性抗体效价和强交叉反应的Fam1及Fam2的优势Clade亚类成分才能有效针对广泛的临床致病肺炎链球菌菌株感染的保护。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 肺炎链球菌表面蛋白A 抗体交叉反应
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Study of Pneumococcal Surface Protein, PspA, Incorporated in Poly(Vinyl Alcohol) Hydrogel Membranes
7
作者 Hazim Aljewari Raquel de Castro +3 位作者 Olivia Solomon Quincy C. Moore III Felecia Nave Audie Thompson 《Journal of Biomaterials and Nanobiotechnology》 2020年第1期67-81,共15页
This study investigates poly(vinyl alcohol) (PVA) membranes as controlled release micro-matrices, which can be useful in therapeutic applications for optimizing the administration of drugs. Currently, the use of hydro... This study investigates poly(vinyl alcohol) (PVA) membranes as controlled release micro-matrices, which can be useful in therapeutic applications for optimizing the administration of drugs. Currently, the use of hydrogels is limited by protein size. This study investigates the delivery of PspA, a large protein of approximately 38 kD. Pneumococcal surface protein A (PspA) has been shown to provide protective immunity against pneumococcal infection and is considered as a pneumococcal vaccine. The protein release experiments demonstrated that from an initial pH 7.4, approximately 60% of PspA diffuse into a neutral environment with an initial burst and a declining rate reaching equilibrium. The results indicate that the protein was successfully incorporated and released from the membrane over time. The hydrogel and protein interaction is temporary, and the membrane system is ideal for protein drug delivery. The data confirm that the protein did not aggregate and was active after release. The protein release is promising and a step forward to develop microneedles to facilitate high molecular weight protein delivery as well as vaccine delivery. 展开更多
关键词 HYDROGEL Recombinant pspa Drug Delivery Vaccine Poly(Vinyl Alcohol) (PVA) Membrane STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
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含有PspA家族1和2的双价结合疫苗具抗广谱肺炎链球菌菌株和伤寒沙门菌的潜力
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作者 张丽芝 Kothari N 《微生物学免疫学进展》 2016年第2期62-62,共1页
先前作者发现,无需添加佐剂,肺炎球菌表面蛋白A(PspA)与伤寒沙门菌Vi荚膜多糖结合可增强抗PspA的免疫应答。目前研究由PspA家族1或2的α螺旋区结合到Vi多糖组成结合物用于免疫小鼠,以检测它抗静脉注射的能致死的肺炎链球菌各种菌株的... 先前作者发现,无需添加佐剂,肺炎球菌表面蛋白A(PspA)与伤寒沙门菌Vi荚膜多糖结合可增强抗PspA的免疫应答。目前研究由PspA家族1或2的α螺旋区结合到Vi多糖组成结合物用于免疫小鼠,以检测它抗静脉注射的能致死的肺炎链球菌各种菌株的能力。包含PspA家族1成分的结合疫苗对PspA家族1菌株的攻击提供了良好的保护作用,但对PspA家族2菌株的攻击没有保护作用。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 pspa 结合疫苗 伤寒沙门菌 免疫应答 结合物 肺炎球菌 Α螺旋 表面蛋白 荚膜多糖
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南京地区儿童肺炎链球菌临床分离株的PspA 蛋白分型 被引量:2
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作者 钟天鹰 朱涛 +4 位作者 徐飞 孟夏萌 邵忠琦 常云松 宇学峰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期927-932,共6页
目的:调查由来自PspA家族1和PspA家族2的3个PspA蛋白组成的重组蛋白疫苗在流行的肺炎链球菌中的覆盖率。方法采用ELISA方法,分别用这3个蛋白的抗血清与159株南京地区儿童中的肺炎链球菌分离株(包括47株侵袭性菌株)进行反应,对PspA... 目的:调查由来自PspA家族1和PspA家族2的3个PspA蛋白组成的重组蛋白疫苗在流行的肺炎链球菌中的覆盖率。方法采用ELISA方法,分别用这3个蛋白的抗血清与159株南京地区儿童中的肺炎链球菌分离株(包括47株侵袭性菌株)进行反应,对PspA 蛋白分布情况进行研究。结果分属于9个血清型的47株侵袭性菌株中,10.7%的菌株为PspA家族1菌株,89.3%的菌株为PspA家族2菌株,而没有PspA家族3的菌株。在所有159个菌株中,属于PspA家族1的菌株为10.1%,属于PspA家族2的菌株为88.0%,另有1.9%的菌株不能用本研究中所采用的方法进行PspA蛋白分型,但仍然没有发现属于PspA家族3的菌株。结论这3个PspA蛋白组成的疫苗可以覆盖本研究中(南京地区)几乎所有的临床侵袭性和非侵袭性分离株。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 pspa蛋白 疫苗 覆盖率
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肺炎链球菌外膜蛋白PspA和PsaA的免疫原性比较
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作者 林海英 孟春 +1 位作者 林子琳 郭养浩 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期712-716,共5页
目的 比较肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)表面黏附素A(PsaA)和表面蛋白A(PspA)的免疫原性.方法 电泳分析Sp6B亚型菌株的两种外膜蛋白基因及所编码蛋白相对分子质量的可变性,采用Western blot方法比较两种重组外膜蛋白对5... 目的 比较肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)表面黏附素A(PsaA)和表面蛋白A(PspA)的免疫原性.方法 电泳分析Sp6B亚型菌株的两种外膜蛋白基因及所编码蛋白相对分子质量的可变性,采用Western blot方法比较两种重组外膜蛋白对5种亚型菌株相应蛋白抗血清的交叉反应,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析两种外膜蛋白的抗体类型和抗体水平以及抗血清对5种亚型菌株的亲和性,以小鼠保护实验比较两种蛋白对5种亚型菌株的交叉保护作用.结果 两种蛋白产生的抗体亚型水平相当 PspA蛋白与其他亚型蛋白的交叉反应广泛性不如PsaA蛋白,只限于同一支系的蛋白之间 PspA抗体与病原菌具有可接近性,并具备交叉免疫保护作用.可作为一种更有效的抗原成分.结论 PspA对同家族同支系菌株攻击具有交叉免疫保护作用,可作为一种更有效的抗原成分. 展开更多
关键词 肺炎链球菌 PSAA pspa 免疫原性
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肺炎球菌表面蛋白A(PspA)的克隆表达及交叉免疫作用 被引量:1
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作者 林子琳 林海英 +2 位作者 汪媛媛 白锴凯 郭养浩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期936-942,共7页
本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01,FY05,FY6B,FY19F,FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段。分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上,成功构建重组质粒pET-pspA,转化大肠杆菌BL21(DE3)。... 本工作从中国临床最常见的5种荚膜血清型肺炎链球菌(FY01,FY05,FY6B,FY19F,FY23F)克隆获得编码PspA蛋白N端α-螺旋区的基因片段。分别将5种PspA基因片段克隆到表达载体pET-27b(+)上,成功构建重组质粒pET-pspA,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经乳糖诱导表达和亲和层析分离,获得高纯度重组蛋白。通过家族专属引物PCR的方法鉴定这5种荚膜血清型肺炎球菌的PspA蛋白所属家族,并进一步根据基因测序结果通过生物信息学方法鉴定了所属支系。FY01 rPspA、FY6B rPspA、FY19F rPspA同属于家族Ⅰ支系1,FY05 rPspA属于家族Ⅰ支系2,FY23F rPspA属于家族Ⅱ支系3。以FY01 rPspA免疫小鼠,在20μg/mL免疫剂量时抗体滴度达到1:210000,显示了重组蛋白较好的免疫原性。Western blotting交叉免疫反应性研究表明,抗FY01 rPspA抗血清与FY01 rPspA、FY6B rPspA和FY19F rPspA反应性较好,而与另外两种重组蛋白几乎无反应,提示PspA交叉免疫作用仅限于本支系内。动物保护实验表明,FY01 rPspA免疫的小鼠对FY6B、FY01两种菌的攻击具有较好的保护作用,对FY05、FY23F的攻击未见明显的保护作用。本研究成果对于研制高效肺炎球菌疫苗具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 肺炎球菌表面蛋白A(pspa) 交叉保护作用 家族 支系 克隆表达
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肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白双抗夹心ELISA定量检测方法的建立及验证 被引量:3
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作者 孙青 赵兴红 +1 位作者 吴永革 谷铁军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第8期892-895,901,共5页
目的建立快速测定肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白含量的双抗夹心ELISA方法,并进行验证。方法制备PsaA-PspA抗原,确定PsaA单抗和PsaA-PspA兔多抗的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA方法。对方法的抗原特异性、精密性和准确性进行验... 目的建立快速测定肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白含量的双抗夹心ELISA方法,并进行验证。方法制备PsaA-PspA抗原,确定PsaA单抗和PsaA-PspA兔多抗的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA方法。对方法的抗原特异性、精密性和准确性进行验证,并分析变性抗原对测定的影响。结果单抗和兔多抗最佳稀释倍数为1∶500和1∶10 000。建立的双抗夹心ELISA法检测PsaA-PspA抗原的浓度范围为70~560 ng/m L,R^2为0.993 8;该方法不适用于其他抗原的测定,但可用于鉴定抗原是否变性;该方法检测不同批次PsaA-PspA抗原的批内平均变异系数(CV)为4.9%,批间平均CV为19%,平均回收率为88.98%。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性、精密性和准确性良好,可用于PsaA-PspA融合蛋白浓度的检测,且可检测抗原是否变性。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 表面抗原 PsaA-pspa融合蛋白 酶联免疫吸附测定
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一种肺炎链球菌重组蛋白PsaA-PspA23原核表达载体的构建及表达
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作者 甘忠桥 孟祥玉 +6 位作者 李博 陈晓瑞 张悦 袁剑文 梁丹虹 吴永革 谷铁军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期955-959,964,共6页
目的优化肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定。方法以肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重... 目的优化肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定。方法以肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重组基因进行扩增,得到Psa A-Psp A2和Psp A3的CDR区(亚类决定区)基因片段。利用重叠延伸PCR(Overlap PCR)技术,将Psa A-Psp A2基因片段和Psp A3的CDR区基因片段连接,得到同源区优化后的基因片段。利用PCR技术扩增同源区优化后的基因片段,使该基因3′末端引入终止密码子,阻止Psa APsp A23基因表达载体上His-tag的融合表达。将得到的片段同源区优化且无His-tag融合表达的目的基因连接至p ET20b载体后,转入大肠埃希菌(E.coli)中进行表达,表达产物进行Western blot分析。结果重组表达质粒p ET20b-Psa A-Psp A23经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;转化E.coli中,37℃,IPTG终浓度1 mmol/L诱导5 h,获得可溶性表达的重组蛋白,且无His-tag。结论 Psa A-Psp A23蛋白基因同源区优化及His-tag成功去除,并在原核表达系统E.coli中可溶性表达,可为Psa A-Psp A23蛋白疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 组氨酸标签 肺炎链球菌表面蛋白A 同源区序列 重叠延伸PCR
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添加剂对多硫代聚苯胺电化学性能的影响 被引量:4
14
作者 苑克国 王维坤 +1 位作者 王安邦 曹高萍 《电池》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期86-88,共3页
为了提高正极材料多硫代聚苯胺(PSPA)的电化学性能,在PSPA中添加了碳纳米管(CNTs)和纳米SiO2。添加CNTs能够降低PSPA的欧姆电阻,添加纳米SiO2能够降低PSPA的法拉第电荷传递电阻,CNTs和纳米SiO2的协同作用可提高PSPA的放电比容量和循环... 为了提高正极材料多硫代聚苯胺(PSPA)的电化学性能,在PSPA中添加了碳纳米管(CNTs)和纳米SiO2。添加CNTs能够降低PSPA的欧姆电阻,添加纳米SiO2能够降低PSPA的法拉第电荷传递电阻,CNTs和纳米SiO2的协同作用可提高PSPA的放电比容量和循环性能。PSPA(5%CNTs+5%纳米SiO2)的首次放电比容量为650 mAh/g,15次循环后,放电比容量达到553 mAh/g。 展开更多
关键词 正极材料 多硫代聚苯胺(pspa) 纳米添加剂 电化学性能
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地震波技术在沥青路面性能测试中的应用研究 被引量:2
15
作者 郭仪南 张宏超 +1 位作者 李增光 王健 《公路工程》 2011年第1期112-115,126,共5页
地震波技术是一种以弹性波在材料中的传播特征为途径获取了材料的弹性模量的测试方法。其可以作为获取沥青路面结构各层模量和厚度的无损测试方法,为路面力学计算以及施工验收提供依据。从地震波技术的原理出发,分析其在路面测试中的应... 地震波技术是一种以弹性波在材料中的传播特征为途径获取了材料的弹性模量的测试方法。其可以作为获取沥青路面结构各层模量和厚度的无损测试方法,为路面力学计算以及施工验收提供依据。从地震波技术的原理出发,分析其在路面测试中的应用范围,并讨论其在温度条件下的局限性,为其在道路工程中的应用提供技术上的参考。 展开更多
关键词 沥青路面 地震波技术 SPA&pspa 温度 地震波模量 动态模量
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肺炎球菌表面蛋白的克隆表达与免疫原性研究 被引量:1
16
作者 蔡倩影 方亮 +3 位作者 黄金钟 林海英 郭养浩 孟春 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期65-69,共5页
从肺炎球菌YF05中扩增了肺炎球菌表面蛋白A(PspA)和肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)基因,以pET27b(+)为载体构建了重组表达质粒的表达系统后,转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白约占菌体总溶解蛋白的75%,结果显示:表达的PspA蛋... 从肺炎球菌YF05中扩增了肺炎球菌表面蛋白A(PspA)和肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)基因,以pET27b(+)为载体构建了重组表达质粒的表达系统后,转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白约占菌体总溶解蛋白的75%,结果显示:表达的PspA蛋白和PsaA蛋白,分子量分别约为75kDa和37kDa。成功表达的重组蛋白具有较强的免疫活性和交叉免疫效果。 展开更多
关键词 pspa基因 PsaA基因 免疫原 原核表达
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沥青混合料流变历程与模量演变 被引量:4
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作者 张宏超 王健 +1 位作者 郭仪南 吴迪 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期124-127,共4页
为了解沥青混合料的流变特性,采用MMLS3进行沥青混合料的足尺(Full scale)加速加载试验,并利用便携式路面分析仪对沥青混合料流变后的隆起和下陷部分的地震波模量进行测量.试验结果表明:在荷载作用下,沥青混合料下陷量与隆起量的变化值... 为了解沥青混合料的流变特性,采用MMLS3进行沥青混合料的足尺(Full scale)加速加载试验,并利用便携式路面分析仪对沥青混合料流变后的隆起和下陷部分的地震波模量进行测量.试验结果表明:在荷载作用下,沥青混合料下陷量与隆起量的变化值不等;并且下陷处的地震波模量逐渐增大并趋于稳定,而隆起处的地震波模量在逐渐减小.试验证明沥青混合料呈现非匀质流变,流变后的隆起处与下陷处的力学特性变化规律相异. 展开更多
关键词 沥青路面 流变特性 地震波技术 便携式路面分析仪 行车荷载模拟设备 地震波模量
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基于听觉模型的特征在英语重音检测中的应用 被引量:3
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作者 陈楠 贺前华 李韬 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期26-27,30,共3页
对于英语等"重音节拍语言",重音是一个非常重要的韵律学特征。从听觉模型的角度出发,利用基音同步幅度峰值特征能同时表征瞬时频率和强度信息的特点进行重音检测。使用基音同步幅度峰值特征以及与传统特征的组合对英语连续语... 对于英语等"重音节拍语言",重音是一个非常重要的韵律学特征。从听觉模型的角度出发,利用基音同步幅度峰值特征能同时表征瞬时频率和强度信息的特点进行重音检测。使用基音同步幅度峰值特征以及与传统特征的组合对英语连续语音的试验结果表明,新特征能使系统误识率降低1.5%。 展开更多
关键词 重音检测 听觉模型 基音同步幅度峰值
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复杂系统误差传递的主次作用分析与控制 被引量:4
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作者 唐冰松 王增会 《江苏科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第4期326-330,共5页
系统观测目标误差渗透着系统误差和随机误差,系统误差和随机误差的分离与溯源理论和应用一直是误差分析的难点和热点.文中基于系统误差和随机误差的互相关系与传递特征,提出了以传递函数为基础的误差传递模型,并基于该模型,将复杂系统... 系统观测目标误差渗透着系统误差和随机误差,系统误差和随机误差的分离与溯源理论和应用一直是误差分析的难点和热点.文中基于系统误差和随机误差的互相关系与传递特征,提出了以传递函数为基础的误差传递模型,并基于该模型,将复杂系统划分为若干个子系统,分析了各子系统在观测目标误差中的主次作用(primary and secondary position analysis,PSPA).算例表明,该理论能够分析得出引起观测误差灵敏度较高的子系统,这对于误差溯源、分析和控制误差,提高观测目标的精度具有一定的指导意义. 展开更多
关键词 系统误差 随机误差 传递函数 主次作用 子系统
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肺炎链球菌溶菌酶作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价 被引量:1
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作者 张巧 林科雄 +1 位作者 马千里 王长征 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期711-714,共4页
目的:肺炎链球菌溶菌酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytA)作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价。方法:PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增LytA基因序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-LytA,免疫印迹(western-blot... 目的:肺炎链球菌溶菌酶(N-acetylmuramoyl-L-alanine amidase,LytA)作为肺炎链球菌多价核酸疫苗候选抗原的保护效能评价。方法:PCR技术从肺炎链球菌R6标准株扩增LytA基因序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-LytA,免疫印迹(western-blot)检测重组质粒在哺乳动物BHK-21细胞中的表达。与前期构建的肺炎链球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)N端序列基因构建的质粒pcDNA3.1-PspA’核酸疫苗联合或单独肌肉注射免疫BABL/c小鼠,检测各组小鼠血清特异性抗体IgG水平,并观察免疫小鼠肺炎链球菌D39腹腔攻击21d生存情况。结果:ELISA检测发现3组(pcDNA3.1-LytA组,pcDNA3.1-PspA’组,pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组)实验组小鼠特异性IgG水平较空质粒对照组显著升高(P<0.001),pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组小鼠抗LytA特异性抗体IgG水平较pcDNA3.1-LytA组明显升高(P<0.01),但是与pcDNA3.1-PspA’组比较抗PspA特异性抗体IgG水平无显著差异(P>0.05)。小鼠攻击试验提示pcDNA3.1-LytA+pcDNA3.1-PspA’组小鼠中位生存时间较pcDNA3.1-LytA组及空质粒对照组显著延长(P<0.01),但与pcDNA3.1-PspA’组比较中位生存时间无显著差异(P>0.05),生存曲线相似。结论:LytA联合PspA’的肺炎链球菌多价核酸疫苗免疫效能并不优于单一抗原PspA’的肺炎链球菌核酸疫苗,LytA作为肺炎链球菌多价核酸疫苗的优势候选抗原组分之一有待进一步研究。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 肺炎链球菌溶菌酶 肺炎链球菌表面蛋白A 多价疫苗
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