Prevalence and Study of the Clonality of Extended-Spectrum Beta-Lactamase-Producing Klebsiella pneumoniae Strains in Neonatology at the University Hospitals of Abidjan by the Pulsed Field Gel Electrophoresis and the Quantitative Antibiogram

Background: ESBL-producing strains of Klebsiella pneumoniae, one of the main causes of nosocomial and hospital-acquired infections, are commonly associated with therapeutic impasses. Surveillance of these multidrug-resistant pathogens is a crucial tool for controlling and preventing infections. This surveillance involves the use of appropriate molecular and phenotypic typing techniques. The choice of techniques is based on criteria such as discriminatory power, intra- and inter-laboratory reproducibility, epidemiological concordance, ease of use and cost. The aim of our study was to identify clusters of Extended-Spectrum Beta-Lactamase-producing Klebsiella pneumoniae (ESBL-K. pneumoniae) strains circulating in neonatology using quantitative antibiogram (QA) and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Materials and Methods: This cross-sectional study included 55 K. pneumoniae strains isolated from a total of 513 samples. These various samples are taken from newborns, healthcare personnel, and the environment. K. pneumoniae identification followed standard bacteriological procedures and was confirmed using the Vitek® 2 (bioMérieux). The detection of the ESBL phenotype was performed using the synergy test. QA and PFGE were used to identify clonal relationships between the various strains isolated. Concordance between these two methods was assessed by calculating Cohen’s KAPPA coefficient and Simpson’s diversity index. Results: Among the 55 K. pneumoniae strains included in this study, 58.2% (32/55) were found to be Extended-Spectrum Beta-Lactamase (ESBL) producers. Most of these strains were isolated from neonatal samples (blood samples and rectal swabs). The quantitative antibiogram method applied to 28 out of the 32 ESBL-producing strains revealed that the isolates were grouped into 5 clusters. Pulsed Field Gel Electrophoresis performed on a total of 16 ESBL-producing strains showed the existence of four profiles. A perfect concordance was observed between the two methods. Conclusion: The results of this study highlighted the existence of clonal strains of various origins within neonatology units.

Establishment and Comparison of Pulsed-field Gel Electrophoresis,Multiple-locus Variable Number Tandem Repeat Analysis and Automated Ribotyping Methods for Subtyping of Citrobacter Strains

Objective To establish and compare the pulsed-field gel electrophoresis （PFGE）, multiple-locus variable number tandem repeat analysis （MLVA） and automated ribotyping for subtyping of Citrobacter strains. Methods PFGE protocol was optimized in terms of plug preparation procedure, restriction enzymes and configuration of electrophoretic parameters. MLVA method was evaluated by finding variable number tandem repeats in two genomes of Citrobacter strains. The ribotyping was performed by using the automated RiboPrinter system. Results We optimized the plug preparation procedure, focused on the cell suspension concentration （turbidity of 2.5 to 3.5）, SDS addition （no SDS needed） and lysis time （1 h）, and selected the appropriate restriction enzyme （Xbal） and the electrophoretic parameters （1.0 s-20.0 s for 19 h） of PFGE. There was nearly no discriminatory power of MLVA between Citrobacter strains. For 51 Citrobacter strains, automated ribotyping gave a D-value of 0.9945, while PFGE gave a D-value of 0.9969. Both PFGE and automated ribotyping clustered strains from the same sources （with the same species from the same place at the same time identified as the same source） and divided strains from different sources （from different years, places and hosts） into different subtypes. Conclusion PFGE protocol established in this paper and automated ribotyping are suitable for application in Citrobacter subtyping.

CHARACTERIZATION OF PATHOGENIC FUNGI GENOMES USING PULSED FIELD GEL ELECTROPHORESIS

Pulsed field gel electrophoresis(PFGE) has been firstly introduced in characterization of the pathogenic fungi Penicillium marne f fei and Exophiala dermatitidis genomes.The numbers and sizes of their chromosomes have been detected.Polymorphism was identified on the smallest chromosome of E.dermatitidis.The result shows that PFGE for characterization of large molecular DNA pathogenic fungi is very suitable,it is more simple and more efficacy.The result also shows the diversity of pathogenic fungi is relative common even in rare occurred pathogenic fungi such as E.dermatitidis.

Optimization of Pulse-Field Gel Electrophoresis for Borrelia burgdorferi Subtyping

Objective To optimize the performance of Pulsed-Field Gel Electrophoresis （PFGE） for the comparison of inter-laboratory results and information exchange of Borrelia burgdorferi subtypingo Methods A panel of 34 strains of B. burgdorferi were used to optimize PFGE for subtyping. In order to optimize the electrophoretic parameters （EPs）, all 34 strains of B. burgdorferi were analyzed using four EPs, yielding different Simpson diversity index （D） values and the epidemiological concordance was also evaluated. Results The EP of a switch time of l s to 25 s for13 h and l s to10 s for 6 h produced the highest D value and was declared to be optimal for Mlul and 5mal PFGE of B. burgdorferi. Mlul and Smal were selected as the first and second restriction enzymes for PFGE subtyping of B. burgdorferi according to discrimination and consistency with epidemiological data. Conclusion PFGE can be used as a valuable test for routine genospecies identification of B burgdorferi.

Antimicrobial resistance, genotypic characterization and pulsed-field gel electrophoresis typing of extended spectrum β-lactamases-producing clinical Escherichia coli strains in Macao, China

Background The rise of the production of CTX-M class extended spectrum β-lactamases （ESBLs） has been well documented in traveling countries but no data are found for Macao, an international travel city. The objectives of this study were to identify the antimicrobial resistance pattern, and determine the prevalence, genotype and clonal relationship of ESBLs in 209 clinical Escherichia coli strains from Macao, China. Methods Antimicrobial susceptibility test was performed to determine the resistance patterns of the isolates using the disk diffusion method with 17 antimicrobial agents. Phenotypic detection was screened and confirmed according to the Clinical and Laboratory Standards Institute. Genotypic characterization was detected by isoelectric focusing analysis, polymerase chain reaction and sequencing. The clonal relationship between the different ESBL isolates was studied by pulsed-field gel electrophoresis （PFGE）. Results Imipenem and meropenem exhibited 100% susceptible among 209 strains. Overall, 82.3%, 67.3%, 52.9%, 51.2% and 51.0% of the isolates displayed resistance to ampicillin, tetracylcline, ciprofloxacin, sulfamethoxazole trimethoprin and gentamycin. The prevalence rate of ESBLs was 30.1%. Antibiotic resistances were found to be significantly higher among the ESBL producing group compared to non-ESBL producing group. We detected CTX-M-14 to be the major genotypic characterization of ESBLs （76.2%）. Two strains showed indistinguishable patterns by PFGE. Conclusions The prevalence of antimicrobial resistance is alarming high in Macao. Antimicrobial resistance is significantly higher among the ESBL producing group. This study documented CTX-M-14 as the predominant ESBL type. Although indistinguishable pattern was found between two strains, it was too small to decide whether any of the investigated strains was epidemic. Our findings may be also pertinent for other geographic areas undergoing similar travel characteristics to understand the corresponding effects on bacterial populations.

2015-2021年西安市腹泻患者沙门菌耐药性及分子分型研究

目的 分析2015-2021年西安市腹泻患者沙门菌分离株的血清型分布、耐药情况及分子分型特征,为沙门菌引起腹泻的防治提供科学依据。方法 对分离自2015-2021年西安市感染性腹泻病例的128株沙门菌进行血清学分型,采用微量肉汤稀释法和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行菌株的药物敏感性测定和分子分型分析。结果 128株沙门菌分为23种血清型,优势血清型为沙门菌4,[5],12:i:-、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,占比分别为34.38%、21.88%和17.19%。111株菌(86.72%)对至少1种抗生素耐药,对氨苄西林耐药率最高为78.91%,其次为四环素(69.50%)、链霉素(67.19%)和萘啶酸(53.12%)。共检出41种耐药谱,菌株的耐药谱相对分散,最常见耐药谱为氨苄西林-四环素-链霉素。多重耐药率高达76.56%,沙门菌4,[5],12:i:-和鼠伤寒沙门菌多重耐药现象严重。PFGE聚类分析得到94种带型,相似度为56.8%~100.0%,共聚集形成13个簇。相同血清型菌株PFGE带型相似度较高,同一血清型带型相同或成簇的菌株耐药谱有较高的一致性。结论 西安市腹泻患者沙门菌血清型以4,[5],12:i:-、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,菌株的耐药及多重耐药现象严重,需加强本地区沙门菌耐药性监测。

2006-2020年宁夏单核细胞增生李斯特菌病原学特征分析

目的探讨宁夏食品及病例中单核细胞增生李斯特菌流行特征及耐药现状。方法对宁夏2006—2020年食品及病例中分离的138株李斯特菌采用肉汤稀释法、血清凝集和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行药敏、血清及分子分型研究。结果食品来源113株菌共分属6个血清型,优势血清型为1/2a型,共45株,占39.82%。其次为1/2c型,共32株,占28.32%,致病性较强的4b型在食品中亦分离到5株,占4.42%。25株病例来源菌株分属4个血清型,优势血清型为致病性较强的4b型,共12株,占48.00%;138株不同来源李斯特菌对8种抗生素均出现不同程度的耐药;食品来源菌株共分属17个耐药谱,病例来源菌株分属7个耐药谱,优势耐药谱一致,均为VAN-TET。电泳后,113株食品来源分离株获得94个不同的PFGE带型,相似度为37.1%~97.0%。25株病例来源菌株共分为22个不同的PFGE带型,相似度为46.2%~100%。不同时期、不同来源、不同地区分离株PFGE带型优势型别不明显,呈散在分布。结论宁夏单核细胞增生李斯特菌血清型呈现多元化流行趋势,不同地区流行特征呈现多样性。本地区单核细胞增生李斯特菌病应采取区域化防治手段,临床治疗尽可能在药敏结果的指导下合理用药。

副溶血性弧菌引起食源性疾病暴发事件调查与病原特征分析

目的调查和分析山西省阳泉市一起食源性疾病暴发事件中副溶血性弧菌的病原特征,提高对食物中毒应急事件的处理能力。方法使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、血清学分型、毒力基因检测、药物敏感实验和全基因组测序的方法分析25例有腹泻、腹痛、恶心、呕吐等消化道症状的患者分离出的11株分离菌株。结果11株分离菌株均为副溶血性弧菌,其中8株副溶血性弧菌分离株携带毒力基因tdh,1株同时携带毒力基因trh和tdh,1株只携带毒力基因trh,1株只有毒力基因tlh。血清型分为3种型别,分别是O10:K4、O4:K63以及O5:unknown。根据11株副溶血性弧菌的PFGE图谱将菌株分为5种不同的群,基于全基因组序列的分析显示8株来自患者的副溶血性弧菌具有相同的ST型,属于同一克隆群。副溶血性弧菌病原体毒力、耐药基因和药敏表型相同,符合暴发流行病学特征,判断其为该起食物中毒事件的病原体。11株菌均只含有blaCARB耐药基因,且未检测到耐药质粒,对氯霉素、萘啶酸、四环素、美罗培南、阿米卡星、氨苄西林、厄他培南、替加环素、头孢噻肟、头孢他啶和环丙沙星均敏感,对多黏菌素E中度敏感,均无耐药表型。结论这是一起由多种血清型副溶血性弧菌污染了食品而导致的食源性疾病暴发事件。该食堂储存食物时生熟不分,副溶血性弧菌机会性繁殖在合适的含盐食物中也可以增殖,进而引起该起事件发生。

1起ST19型鼠伤寒沙门氏菌引起的食物中毒调查、溯源分析与探讨

目的分析武汉市某区1起食物中毒事件的致病原因,探讨分离菌株之间的分子流行病学关系,为食源性疾病暴发溯源和临床诊治提供参考依据。方法采集食物中毒相关样本20份,提取样本总DNA进行18种食源性致病菌多重PCR检测,同时按时GB4789.4-2016进行病原菌分离鉴定;应用传统玻片凝集法和微量肉汤稀释法对阳性菌株进行血清型分型和耐药性检测,并提取所有菌株核酸进行全基因组测序组装,利用Abricate和SeqSero在线预测每株菌的血清型和耐药基因,然后与传统方法进行比较分析。对分离的9株沙门氏菌分别采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和全基因组序列方法(WGS)递进分析。结果共检出12株沙门氏菌(菌株编号DXH001~DXH012),其中病例肛拭子样本7份、病例粪便样本2份,工作人员肛拭子样本3份。常规血清型分型均为B群鼠伤寒沙门氏菌,与全基因组测序鉴定分型结果一致。12株菌株耐药谱完全一致,对阿米卡星、氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、哌拉西林、四环素均耐药。基于全基因组预测的氨基糖苷类、头孢菌素、青霉烷、四环素的耐药性与耐药表型结果完全一致。选取DXH001~DXH009开展PFGE和WGS分析。9株鼠伤寒沙门氏菌获得完全一致的PFGE图谱,全基因组序列大小无明显差异,约为4.9 Mbp,MLST型均为ST19。从SNP的最小生成树来看共存在17个变异位点,各菌株间SNP差异数为1~6。全基因组系统发育进化树分析显示,9株沙门氏菌自成一簇,与数据库其他沙门氏菌相差甚远,属于新的克隆分支。同源性最高的来源于江西的GCF_020221795.1参考样本。结论本次食物中毒事件致病源为鼠伤寒沙门氏菌ST19,为同一暴发来源。9株沙门氏菌遗传距离较近,但与数据库中其他沙门氏菌遗传距离较远,自成一簇属于新的克隆分支。本研究中沙门氏菌具有多重耐药性,需加强对多重耐多药菌株的监控及抗菌药物使用的监管。

2013-2014年贵阳市感染性腹泻监测病例中沙门菌的病原学监测分析

目的了解2013-2014年贵阳市腹泻监测病例中沙门菌的血清型别分布及脉冲场凝胶电泳(Pulse-Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型特征,为贵阳市沙门菌病的防控提供科学依据。方法收集2013-2014年贵阳市4家哨点医院感染性腹泻病例的432份粪便标本,对其进行沙门菌的分离培养、生化鉴定、血清分型及PFGE分型。结果 432例感染性腹泻患者的粪便标本共检出沙门菌35株,检出率为8.10%(35/432),男女检出之比为1.5:1,发病年龄主要集中在0~5岁;各季度间沙门菌检出率经Fisher确切概率法比较无统计学差异(P=0.052)。35株沙门菌分成9种血清型,其中优势血清型为肠炎沙门菌11株(占31.43%)和鼠伤寒沙门菌9株(占25.71%),其次克勒肯威尔沙门菌6株(占17.14%),斯坦利沙门菌3株,德尔卑沙门菌2株,阿贡纳沙门菌、婴儿沙门菌和病牛沙门菌血清型各1株,1株未分型。经XbaⅠ酶切后11株肠炎沙门菌分成8种PFGE型,优势型为JEGX01.CN0007;9株鼠伤寒沙门菌分成9种PFGE型,总体型别呈多样性分布。结论贵阳市引起感染性腹泻的沙门菌以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,PFGE型别呈多样性。

产OXA-23型碳青霉烯水解酶鲍曼不动杆菌基因研究

目的 了解临床分离 12株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的耐药情况、耐药株来源以及产碳青霉烯酶的类型。方法 收集本院对碳青霉烯类药中介或耐药的鲍曼不动杆菌 12株 ,用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC) ,脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分析其同源性 ,并用聚合酶链反应 (PCR)检测分析其耐药基因。结果 12株细菌均为多重耐药株 ,有 9株对亚胺培南耐药 ,6株对美罗培南耐药。对青霉素类、头孢菌素类、复方磺胺甲唑均耐药 ,对氟喹诺酮类和酶抑制剂复合物耐药率最低。 12株PFGE图谱分为A、B(B1、B2 ) 2型 ,以A型为主要流行株 (9株 ) ,主要集中在重症监护病房 (ICU)。PCR检出 12株菌株均携带OXA 2 3基因 ,未能检出OXA 2 4基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致 ,该流行株呈多重耐药 ,12株菌株均产OXA 2 3型碳青霉烯酶。

云南省2016—2022年志贺氏菌分子分型及耐药性分析

目的对云南省2016—2022年食源性疾病主动监测分离的志贺氏菌进行血清、分子分型和药敏试验等分析,了解云南省志贺氏菌的病原学特性,为志贺氏菌感染的防控和治疗提供数据支持。方法2016年1月至2022年12月从患者粪便中分离志贺氏菌,采用玻片凝集法进行血清学分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型分析,微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果共分离志贺氏菌89株,其中福氏志贺氏菌占52.81%,宋内志贺氏菌占47.19%。PFGE分析发现,2种志贺氏菌均分为A和B 2个聚类簇,B簇为优势簇。47株福氏志贺氏菌分为30种PFGE带型,有3组优势带型,42株宋内志贺氏菌分为22种PFGE带型,有4组优势带型,并识别两起疑似暴发事件。志贺氏菌对13种抗生素存在不同程度的耐药,78.65%的菌株为多重耐药菌株。结论云南省志贺氏菌PFGE优势带型明显,部分带型聚集分布。耐药形势严峻,多重耐药现象严重。福氏志贺氏菌和宋内志贺氏菌耐药表型存在差异。

产碳青霉烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行

目的了解我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌的耐药机制及其同源性分析。方法收集2006年3月～9月我院对碳青霉烯类抗生素敏感性下降的肺炎克雷伯菌共10株,采用Etest法测定细菌对各抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);通过等电聚焦电泳(IEF)检测所产生的β-内酰胺酶,并通过聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定其基因型;接合试验和Southern杂交进行基因定位;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对这些菌株进行同源性分析。结果10株肺炎克雷伯菌均产KPC-2(pI6.7)、DHA-1(pI7.8)和SHV-28(pI7.6),其中3株同时产TEM-1广谱酶(pI5.4)。blaKPC-2位于60kb左右可接合性质粒上。10株菌株对β-内酰胺类抗生素呈多重耐药,但对多黏菌素,替加环素,复方SMZ敏感。PFGE证实为同一克隆株的传播。结论质粒介导的KPC-2造成肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性下降,并在我院短暂流行;携带KPC-2基因的临床菌株同时携带多种耐药基因。

铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶、质粒介导AmpC酶基因分布及流行特征分析

目的研究临床分离铜绿假单胞菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒介导AmpC酶的基因分布及流行特性,为细菌耐药性的监控提供依据。方法回顾性调查5年间临床分离的铜绿假单胞菌的分布和耐药情况。选取每年同一时间段的临床连续分离株共169株,用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、VEB、PER、GES、TLA、IBC、CTX-M、OXA等β-内酰胺酶基因和AmpC酶基因。使用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分析菌株间的同源性。结果铜绿假单胞菌主要分离自呼吸道(痰标本),占75.7%;对复方磺胺甲噁唑和头孢曲松耐药情况严重,耐药率分别为91.9%和91.7%;对其他主要抗菌药物的耐药率分别为头孢他啶46.7%、亚胺培南38.2%、左旋氧氟沙星30.2%、环丙沙星28.3%、阿米卡星5.0%。169株铜绿假单胞菌中产TEM、CTX-M、OXA和GES型β-内酰胺酶菌株84株(49.7%);质粒介导AmpC酶23株(13.6%)。PFGE结果显示铜绿假单胞菌仅3株具有同源性,呈散发流行。结论铜绿假单胞菌临床感染率高,呈多重耐药且散发流行趋势。

深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立与应用

[目的]建立深圳市伤寒PulseNet数据库,用于伤寒的实时监测和分子流行病学调查。[方法]采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对深圳市2002～2005年106株伤寒的染色体DNA进行酶切,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。[结果]深圳市各年的伤寒菌株变异较多,呈现30多种PFGE图谱。同一起伤寒暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。[结论]深圳市伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。

云南省2005-2012年91株甲型副伤寒沙门菌病原学特征分析

目的通过对分离自云南省不同地区、不同年份的甲型副伤寒沙门菌进行病原学分析研究,弄清云南省甲型副伤寒的流行特征,为查明云南省甲型副伤寒高发原因提供科学依据。方法采用K-B纸片扩散法对所有菌株进行药物敏感试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型研究。结果 91株甲型副伤寒沙门菌药敏试验结果表明,大多数菌株对常用多种抗生素敏感,但有部分地区的菌株出现三重及多重耐药。所有菌株的PFGE结果显示,91株甲型副伤寒沙门菌XbaI酶切结果可分为两个大的聚类群,而且经XbaI和Spe I双酶切证实云南省不同地区、年份分离的菌株具有较高的同源性关系。结论云南省的甲型副伤寒沙门菌具有2种类型的优势菌株,并且具有较高的同源性关系,提示云南省不同地区、年份的甲型副伤寒的流行可能具有相似的传播途径,而菌株的药敏试验结果则能给临床治疗提供用药参考依据。

产KPC-2肺炎克雷伯菌的基因分型、毒力基因和血清型特征研究

目的分析我院产KPC-2肺炎克雷伯菌基因分型、毒力基因和血清型特点。方法收集碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株75株(采用改良Hodge试验和DNA测序以确定其表型和基因型)和同期分离的敏感株97株,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性,PCR检测9种毒力基因all S、rmp A、mrk D、kfu BC、cf29a、fim H、uge、wab G、ure A和K1、K2、K5、K54、K57、K206种血清型。比较产KPC-2和非产KPC-2肺炎克雷伯菌的毒力基因和血清型差异。结果 75株碳青霉烯类不敏感肺炎克雷伯菌菌株中,有61株细菌经改良Hodge试验初筛为产碳青霉烯酶菌株,PCR扩增及DNA测序确定其为产KPC-2酶。PFGE结果显示,依据相似度80%的折点,产KPC-2酶组的61株细菌来源于30个克隆菌株,不产KPC-2酶组的111株肺炎克雷伯菌来源于96个克隆菌株。all S基因在不产KPC-2组中的阳性率(21.9%)高于在产KPC-2组的阳性率(3.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。血清型K1、K2和K54在产KPC-2组与不产KPC-2组间的分布差异无统计学意义(P>0.05),其他3种血清型未检测到。结论产KPC-2肺炎克雷伯菌临床分离株携带的尿素酶基因all S减少,且大多不属于高致病性血清型,但作为高度耐药菌,应加强监控。

ERIC-PCR技术在鲍曼不动杆菌基因分型中的应用评估

目的了解仁济医院鲍曼不动杆菌的基因同源性,验证肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)在鲍曼不动杆菌基因分型中的实用性。方法采用琼脂稀释法检测临床分离的81株鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);采用ERIC-PCR对81株鲍曼不动杆菌进行基因分型;使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对其中的43株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌进一步分型,以PFGE分型为参考标准,验证ERIC-PCR在基因分型中的实用性。结果 81株鲍曼不动杆菌对临床常用的13种抗菌药物普遍耐药,只对米诺环素耐药率最低,为30.9%,其次是亚胺培南,为53.1%,对其他抗菌药物的耐药率均>60%。81株鲍曼不动杆菌ERIC-PCR分型主要为A、B、C、D、E、F 6型,其中A、B、C型为主要的流行株。43株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌分型为A型41株(A1型29株,A2型12株)、B型1株、C型1株。PFGE分型将其分为5型,A型34株(A1型31株,A2型3株),B型6株,C、D、E分型各1株。结论仁济医院鲍曼不动杆菌存在克隆播散,且主要为耐亚胺培南鲍曼不动杆菌。ERIC-PCR分辨力较强,结果可靠,与PFGE结果具有一定的相关性,是一种简便、快捷的基因分型技术。

2022—2023年贵州省单核细胞增生李斯特氏菌PFGE分型及耐药性分析

目的了解2022—2023年贵州省单核细胞增生李斯特氏菌血清表型、脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型特征和耐药情况,旨在为贵州省李斯特氏菌病的防控提供实验室数据支持并提高预警监测能力。方法收集2022年1月—2023年12月贵州省致病菌识别网中心实验室监测腹泻疾病相关样本1220份,按照GB 4789.30—2016《食品安全国家标准食品卫生微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》的执行标准分别进行分离培养,按照《国家致病菌识别网实验室监测技术手册(2022试用版)》进行实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法鉴定,多重PCR检测血清型分型、PFGE分子分型和药敏试验。结果1220份腹泻疾病相关样本分离出424株菌株,其中单核细胞增生李斯特氏菌11株,阳性率为2.59%(11/424);11株单核细胞增生李斯特氏菌分为6种血清表型,血清型分布为1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b和3c型;11株单核细胞增生李斯特氏菌对头孢西丁(cefoxitin,FOX)耐药率高达100%,对氯霉素(chloroamphenicol,CHL)中介率为72.72%,剩余12种药物[红霉素(erythromycin,ERY)、复方新诺明(trime-thoprim/sulfamethoxazole,T/SUL)、庆大霉素(gentamicin,GEN)、亚胺培南(imipenem,IPM)、苯唑西林(benzoxacillin,OXA)、克林霉素(clindamycin,CLI)、环丙沙星(ciprofloxacine,CIP)、达托霉素(datomycin,DAP)、氨苄西林(ampicillin,AMP)、四环素(tetracycline,TET)、万古霉素(vancomycin,VAN)、青霉素(chloramphenical,PEN)]均100%敏感;经AscⅠ酶切后11株单核细胞增生李斯特氏菌分成7种PFGE带型,相似性为40%~100%,其中3株菌相似性高达100%。结论2022—2023年贵州省发生了一起家庭聚集性李斯特氏菌病事件,遵义市肉制品中存在相同的污染来源,且污染源持续存在,贵州省具有多种致病性单核细胞增生李斯特氏菌,但尚未出现严重耐药情况。

重症监护室产OXA-23碳青霉烯类酶的鲍曼不动杆菌的分子流行病学研究

目的:研究重症监护病房中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的分子流行病学特征,为临床预防和控制医院感染暴发提供分子流行病学依据。方法:本研究收集了重症监护病房自2006年10月～2010年1月,从患者分离的40株耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌,琼脂稀释法测定14种抗菌药物的最小抑菌浓度,设计通用引物多重PCR扩增D类碳青霉烯酶基因blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58并测序。EDTA纸片法检测金属酶表型,PCR检测基因型blaIMP、blaVIM、blaSIM,脉冲凝胶电泳分析其同源性。结果:所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌对阿米卡星、庆大霉素和左氧氟沙星等保持有一定敏感性,但对其余抗菌药物耐药率均为100%。所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶,在blaOXA-23上游连接有ISAba1启动元件,未检测到blaOXA-24、blaOXA-58碳青霉烯酶基因;金属酶表型及基因型均为阴性。PFGE分为4种克隆型,以A、D型为主。所有耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌感染患者中,34例(85.0%)为呼吸道感染,5例(12.5%)为伤口感染,1例(2.5%)为血流感染。经临床治疗后,21例(52.5%)存活,12例(30.0%)死亡,7例未出院。结论:本研究重症监护病房流行的40株耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌均产OXA-23型碳青霉烯酶,以A型和D型克隆为主要流行株,随着抗菌药物选择性压力的作用,出现了全耐药菌株。