试验对以莆田黑猪精液为材料分离纯化得到的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)进行了理化特性研究。经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G100分子筛层析获得PAGE电泳纯化的NAGase酶制剂。以对硝基苯...试验对以莆田黑猪精液为材料分离纯化得到的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)进行了理化特性研究。经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G100分子筛层析获得PAGE电泳纯化的NAGase酶制剂。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-GlcNAc)为底物,研究酶催化水解的相关性质。分离纯化获得的酶制剂比活力为1561.42U/mg,分子质量为58ku,只有1个亚基,等电点pI为9.13。酶的最适pH为5.6,最适温度为45℃,酶在pH3.6~7.8之间稳定,当pH〉8时迅速失活,在50℃以下处理30min酶活力保存稳定,高于50℃时,酶活力迅速降低。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,米氏常数Km为0.82mmol/L,最大反应速度Vm为39.23μmol/(L·min)。催化pNP-GlcNAc反应的活化能为27.30kJ/mol。金属离子中Na^+、K^+、Mg^2+、Ca^2+对酶活力无明显影响,Zn^2+、Cu^2+、Pb^2+对酶有抑制作用。展开更多
文摘试验对以莆田黑猪精液为材料分离纯化得到的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)进行了理化特性研究。经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G100分子筛层析获得PAGE电泳纯化的NAGase酶制剂。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-GlcNAc)为底物,研究酶催化水解的相关性质。分离纯化获得的酶制剂比活力为1561.42U/mg,分子质量为58ku,只有1个亚基,等电点pI为9.13。酶的最适pH为5.6,最适温度为45℃,酶在pH3.6~7.8之间稳定,当pH〉8时迅速失活,在50℃以下处理30min酶活力保存稳定,高于50℃时,酶活力迅速降低。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,米氏常数Km为0.82mmol/L,最大反应速度Vm为39.23μmol/(L·min)。催化pNP-GlcNAc反应的活化能为27.30kJ/mol。金属离子中Na^+、K^+、Mg^2+、Ca^2+对酶活力无明显影响,Zn^2+、Cu^2+、Pb^2+对酶有抑制作用。