热原实验计算机管理系统开发与应用

根据《中华人民共和国药典(2020年版)》四部通则1142热原检查法,梳理热原实验全过程的实验流程,并结合实际经验,开发以热原实验过程为主线、家兔状态为辅线的信息管理系统,从而实现了热原实验中家兔全生命周期管理、热原实验全过程及结果可追溯、家兔状态管理的可视化管理。

LAL test and RPT for endotoxin detection of CPT-11/DSPE-mPEG_(2000) nanoformulation: What if traditional methods are not applicable?

Endotoxin detection is an important step in drug characterization. Herein we found that a chemotherapeutic drug nanoformulation composed of irinotecan hydrochloride(CPT-11) and an amphiphilic molecule DSPE-mPEG_(2000) can interfere with the limulus amebocyte lysate assay(LAL). Furthermore, the rabbit pyrogen test(RPT) results indicated that at a relatively high dosage, the drug irinotecan hydrochloride can induce a hypothermia effect which may render the RPT results ambiguous in determination of the safety of the drug formulation.Our findings demonstrate limitations of endotoxin detection in micellar drugs,and call for the necessity of developing reliable endotoxin detection methods that can overcome the interference of nanomaterials in order to better ensure the drug safety of patients in future pharmaceutical drug development.

重组C因子法检测4种生物制剂中细菌内毒素的方法学研究

目的:考察重组C因子法对生物制剂适用性,建立该方法检测细菌内毒素的质量标准。方法:选取2种代表性的生物重组制剂和2种单克隆抗体制剂,进行重组C因子干扰试验,并用原标准规定的细菌内毒素检查法进行对比实验。按照《中国药典》2020年版四部附录1143细菌内毒素检查法干扰试验的规定,与原检测法的结果进行对比。结果:4种生物制剂回收率均在《中国药典》规定的50%~200%范围内,符合药典规定,并与原实验结果一致。结论:本研究为重组C因子检测生物制剂中的细菌内毒素的方法学和标准的建立提供了实验依据。

聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球的生物安全性评价

背景:纳米材料以及包含纳米相的医疗器械,因为纳米材料具有尺寸小、比表面积大等独特特性,可能会引发特殊的生物效应,其生物安全性成为人们关注的重点。目的:评价聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球的生物安全性。方法:采用乳液溶剂挥发法制备聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球。(1)细胞毒性实验:将聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球浸提液与小鼠成纤维细胞共培养,同时设置空白对照(完全培养基)、阴性对照(高密度聚乙烯树脂浸提液)与阳性对照(二乙基二硫代氨基甲酸锌浸提液),采用MTT法评价细胞毒性;(2)致敏反应:将复合微球分别进行极性浸提和非极性浸提,进行豚鼠皮内诱导和激发实验,记录结果;(3)皮内反应:将复合微球进行极性浸提和非极性浸提,兔皮内注射后即刻及24,48,72 h,观察各注射部位状况;(4)全身急性毒反应:将复合微球分别进行极性浸提和非极性浸提,通过静脉和腹腔注射到KM小鼠体内,观察小鼠体质量变化;(5)热源反应:将复合微球进行极性浸提,通过耳缘静脉注射至兔体内,记录体温变化;(6)骨植入实验:将圆柱状的复合微球与高密度聚乙烯棒分别植入兔胫骨缺损部位,进行大体观察和局部组织病理学观察。结果与结论:(1)聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球无细胞毒性、无致敏性、无皮内刺激反应、无全身急性毒反应,热源反应符合检测规定;复合微球植入兔胫骨缺损部位后,植入部位未见血肿、水肿、炎症等病变,组织学观察显示复合微球具有一定的骨组织修复能力;(2)骨结果显示,聚乳酸/纳米羟基磷灰石复合微球具有良好的生物安全性。

盐酸多柔比星脂质体注射液热原检查方法学验证

目的验证盐酸多柔比星脂质体注射液热原检查方法的适用性,制定热原检查质量标准。方法参考《中国药典》2020年版四部“9301注射剂安全性检查法应用指导原则”、“1142热原检查法”进行热原检查方法学验证,并对3批盐酸多柔比星脂质体注射液进行热原检查。结果盐酸多柔比星脂质体注射液(10 mL∶20 mg)按2.8 mL·kg^(-1)给药时对家兔热原检查无干扰,3批样品热原检查结果均符合规定。结论可采用家兔热原检查法检查盐酸多柔比星脂质体注射液中可能存在的热原,给药剂量为2.8 mL·kg^(-1)。

美国、欧洲、日本和中国药典中家兔热原检测法的主要差异及分析

对美国、欧洲、日本和中国药典的现行版关于家兔热原检测法的主要差异进行了汇总比较。结合多年的实际工作经验,分析了这些差异对热原检测的影响,并对中国药典的今后改版提出了6点建议。

多酶清洗剂去热原效果的研究

目的 通过试验了解多酶清洗剂去热原的效果。方法 取使用后的玻璃注射器 4 0付 ,随机分成两组 ;试验组用 1:2 0 0的多酶清洗剂浸泡 30min ,对照组用 1%三效热原灭活剂浸泡 1h ;两组水温相同 ,均为 30℃ ;常规清洗后分别采样 ,进行热原检测。结果 试验组热原检测阴性结果占 88% ,对照组热原检测阴性结果占 90 % ,P >0 0 5 ,多酶清洗剂去热原效果与三效热原灭活剂相比差异无显著性。结论 多酶清洗剂可以去热原 ,可能与多酶能分解蛋白质、脂肪和糖有关 ,热原大多是革兰阴性菌的代谢产物 ,它是一种脂多糖 ,能被多酶所分解 ,但在使用过程中应注意浓度、水温和个人防护。

注射用兰索拉唑的安全性评价

目的评价国产注射用兰索拉唑的安全性.方法将注射用兰索拉唑配成适当浓度,观察豚鼠静脉注射后有无过敏反应、家兔静脉注射有无血管刺激性及热原反应、体外溶血试验中是否具有溶血和血球凝集作用,小鼠静脉注射的急性毒性.结果豚鼠静脉注射兰索拉唑无过敏反应,家兔静脉注射兰索拉唑无血管刺激性及热原反应,体外溶血试验无溶血和血球凝集作用,小鼠静脉给药的LD50及95%的可信限为163.8 mg/kg和150.7～178.0 mg/kg.结论该药可供静脉注射试用给药.

建立可吸收医用膜细菌内毒素检查的新方法

[目的]检验粘克TM可吸收医用膜是否符合生物材料的热原要求,建立粘克TM可吸收医用膜的细菌内毒素检查方法。[方法]按《中华人民共和国药典》2005年版附录及GB/16175-1996规定,同时采用热原检查法和细菌内毒素检查法对粘克TM可吸收医用膜72h的浸提液样品进行检测。[结果]该浸提液对细菌内毒检测不产生干扰,细菌内毒素试验结果为阴性。同时受试家兔体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.4℃。[结论]粘克TM可吸收医用膜不含引起机体发热的内毒素或致热原,符合医用生物材料的使用标准。用细菌内毒素检查法替代家兔热原法对该可吸收膜进行热原检查是可行的。

家兔热原实验中预检温对实验结果的影响

本文从预检温的筛选方式、筛选标准、稳定时间和不同基础体温的家兔对热原的敏感性等方面探讨了做好家兔热原实验值得注意的一些问题 ,并就美国药典和欧洲药典的要求进行了介绍和比较。建议对预检温筛选家兔采用至少与家兔热原实验一样的方式 ;为减少复试率和不合格率 ,应尽量不使用基础体温较低家兔进行实验。

热原检查实验次数对家兔致热灵敏度的影响

目的针对热原检查实验次数是否改变家兔对热原物质灵敏度进行研究。方法于实验第1d、第3d、第10d和第24d给家兔静脉注射不同浓度内毒素溶液各4次。记录各组家兔体温变化并进行统计学处理。结果5EU.mL-1.k-g1组家兔在第1次和第2次给药后判定为不合格,第3次和第4次给药后判定为合格;而10EU.mL-1.kg-1组家兔4次给药后均判定为不合格。结论热原检查使用9～10次的家兔对细菌内毒素的灵敏度未发生明显变化,但家兔短期内多次接触≥临界内毒素剂量可产生耐受性,减少其对热原物质的灵敏度。

新的体外热原试验方法研究进展

非肠道给药的药品、生物制品及植入性医疗器械要求无热原,目前各国药典采用兔热原试验或细菌内毒素检查法(BET)这2种基于动物的方法进行试验,但它们还存在一些问题。外热原可刺激人单核细胞释放炎性因子(如 IL-1B,IL-6,TNF-α,IFN-λ等)即内热原,内热原使人体温调定点升高从而引起体温升高,这些内热原的含量可用 ELISA 方法进行测定,新的体外热原试验方法是基于此原理的系统。新方法结合了 BET 高灵敏度和家兔法宽检测谱的优点,与兔法相比,新方法更加灵敏、费用低,能直接反映人对多种热原的反应,与细菌内毒素检查法相比,新方法不仅仅局限于革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素的检测,对各种热原质均能检测。在欧洲,目前有6种最突出的系统被确认,试验表明他们是安全的、不使用动物的、更有效的热原检查方法,可以作为热原检查替代方法向药政管理部门和药典推荐。

清开灵注射液抗内毒素作用的实验研究

目的探讨清开灵注射液抗大肠埃希菌O111B4内毒素作用。方法采用细菌内毒素检查法(体外)和兔热原检查法(体内),对清开灵注射液抗细菌内毒素作用进行实验。结果清开灵注射液稀释16倍可使浓度为10EU·mL1等体积的内毒素破坏;兔静脉注射清开灵注射液(2mL·kg1)后注射细菌内毒素40EU·kg1引起轻度发热反应(Tmax=035℃),而未给清开灵注射液组呈现典型的发热反应(平均Tmax=105℃)。结论清开灵注射液有抗大肠埃希菌内毒素作用。

不同基础体温的家兔对热原检查结果的影响

对实验中使用的普通级家兔基础体温进行统计,观察不同基础体温家兔注射血液制品后的升温情况。按照中华人民共和国药典（2005）年版三部的热原检查规定进行测定,将实验家兔基础体温38.0℃-39.6℃分为3组：38.0℃-38.5℃为1组;38.6℃-39.0℃为2组;39.1℃-39.6℃为3组。注射制品后,家兔升温≥0.4℃记为升温家兔,统计升温≥0.4℃的家兔升温百分率并对其进行统计学处理。经卡方检验,升温家兔≥0.4℃的百分率1组与2组、1组与3组有显著性差异（p〈0.05）;2组与3组无显著性差异（p〉0.05）。家兔对热原的敏感性随基础体温的高低而有明显的差异,基础体温偏低的家兔对热原更敏感,其升温幅度大于基础体温偏高的家兔。

三类体外热原检测方法的研究进展

目的为补充或替代现有热原检测方法提供参考。方法对国内外相关文献进行检索分析,总结体外热原检测的新方法。结果与结论体外热原检测新方法可检测多种热原物质,消除种属差异,实现标准化。但新方法还有许多不可忽视的缺陷,仍需要进一步研究和完善。

载银珊瑚羟基磷灰石的生物相容性评价

目的评价负载8×10-5 mol/L银离子后珊瑚羟基磷灰石(CHA)的生物相容性。方法采用珊瑚羟基磷灰石材料与AgNO3及NaCl复合,经真空冷冻干燥后制备成8×10-5 mol/L Ag+浓度的载银珊瑚羟基磷灰石(Ag-CHA),并对健康成年昆明小白鼠、新西兰大白兔、白化豚鼠进行了全身急性毒性实验、热原实验、溶血实验和致敏实验。结果全身急性毒性实验中,负载8×10-5 mol/L银离子的Ag-CHA材料对小鼠无全身急性毒性作用,72 h内小鼠无毒性表现,体重无下降;热原实验中,家兔体温升高数最高分别为0.2、0.2、0.4℃,材料无热原反应;材料的急性溶血率为0.64%,无溶血作用;致敏实验中,实验组豚鼠皮肤无红斑无水肿。结论载银浓度为8×10-5 mol/L的Ag-CHA有良好的生物相容性,无全身急性毒性作用和溶血作用,无热原和致敏原。

碳酸氢钠注射液进行细菌内毒素检查的研究

目的 :研究5 %碳酸氢钠注射液进行细菌内毒素检查的可行性。方法 :通过加浓盐酸中和样品溶液、沸水浴和冰浴后 ,再考察中和液对鲎试验的干扰性。结果 :中和液按1∶4稀释后 ,用灵敏度为0 125EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查无干扰。结论 :细菌内毒素检查法似可代替兔法热原检查。

影响家兔热原检查结果的因素分析

目的统计实验数据,分析影响家兔热原检查结果的因素。方法将一定剂量的供试品静脉注入家兔体内,在规定时间内,观察家兔体温升高的情况。结果基础体温≥38.9℃的家兔,其升温≥0.4℃及≥0.6℃的百分比与基础体温<38.9℃家兔相比具有显著性差异(P<0.05),且不同季节家兔升温≥0.4℃的家兔数百分比具有显著性差异(P<0.05),夏秋两季所占百分数高于冬春两季,夏季(6～8月)家兔基础体温较高。结论不同基础体温家兔对热原敏感程度不同,敏感性随家兔基础体温的升高而下降,为保证热原试验结果的准确性,夏季应适当提前热原质检查时间。

注射用两性霉素B脂质体细菌内毒素检查法研究

目的建立注射用两性霉素B脂质体细菌内毒素检查法。方法按2010年版《中国药典》附录"细菌内毒素检查法"进行实验。结果注射用两性霉素B脂质体稀释至质量浓度0.05 mg.mL-1以下时,对细菌内霉素检查无干扰作用。结论采用细菌内毒素检查法检查注射用两性霉素B脂质体的细菌内毒素,方法稳定可靠,可替代家兔热原检查法。

细菌内毒素检查法与家兔法同步检测丹参川芎嗪注射液热原的比较

目的考察细菌内毒素检查法和家兔法对丹参川芎嗪注射液检查的可行性。方法采用《中国药典》2010年版一部附录细菌内毒素检查法,对家兔试验进行比较试验。结果丹参川芎嗪注射液稀释至160倍时,用灵敏度为0.06 EU/ml的鲎试剂进行实验,干扰消失。家兔热原检查法与细菌内毒素检查法相吻合。结论采用细菌内毒素检查法和家兔检查法检测丹参川芎嗪注射液热原均可行。