坪草腐霉枯萎病菌(Pythium aphanidermatum)的生物学特性及诱变菌株毒素的除草活性研究

为了明确坪草腐霉枯萎病菌PA1菌株的生物学特性及其诱变菌株所产生毒素的除草活性,对PA1菌株的生长适度、保存条件及孢子囊和藏卵器的产生条件进行了研究,测定结果发现,PA1菌株菌丝生长的最适温度为34℃,菌种保存的适宜温度为10℃～15℃;20℃条件下,在CMA培养基和燕麦粉液体培养基中可以大量产生藏卵器和卵孢子;5℃～15℃条件下,可以产生孢子囊。利用紫外线对PA1菌株的菌丝进行紫外诱变,得到了18株诱变菌株(PAM 1～18)。通过生长速率测得,PAM1菌株的生长速率最快,诱变菌株所得粗毒素对马唐和反枝苋的生长抑制作用结果表明,以PAM1的除草活性最高。对PAM1诱变菌株进行了发酵试验,在72 h的发酵过程中,发酵液的pH值逐渐降低;用发酵液制备所得粗毒素对马唐、反枝苋具有很好的除草活性。

瓜果腐霉Pythium aphanidermatum PAM1菌株中除草活性物质的分离和纯化

为了对瓜果腐霉PAM1菌株中的除草活性物质进行分离纯化和结构分析,本试验通过有机溶剂超声波提取、硅胶柱层析和高效液相色谱相结合的方法对除草活性化合物进行分离,利用质谱、红外光谱和核磁共振等技术对所得到的化合物进行了结构分析。结果表明:从瓜果腐霉PAM1菌株的乙酸乙酯粗提物、甲醇粗提物中分别获得了保留时间为16.37和8.55min的化合物1和化合物2,2个化合物对马唐叶片均表现出较强的除草活性。化合物1的核磁图谱显示其分子中含有不饱和键、羟基和羧基,质谱图提示其分子量为578,推断其可能的分子式为C37H70O4;化合物2可能的分子量为453。瓜果腐霉菌丝提取得到的2个化合物均为长链脂肪酸类化合物。

Isolation and Structural Indentification of Herbicidal Toxin Fractions Produced by Pythium aphanidermatum

In order to understand the compsition and structure of herbicidal component of Pythium aphanidermatum,the isolation and structural indentification were researched.The culture filtrate was extracted by ethyl acetate,petroleum,and chloroform with the same volume respectively and the activity of the crude toxin was bioassayed.The toxin was separated by using the method of thin layer chromatography（TLC）,then the main fraction was separated by HPLC,and the structure was analyzed by the sepctrum of IR,13C-NMR and 1HNMR.The results showed that the ethyl acetate extracts had the strongest herbicidal activity.Using the method of TLC,the bioassay results showed that the extracts with Rf 0.19 had the strongest effect on weeds and the inhibition to Digitaria sanguinalis and Amaranthus retroflexus reached five levels,and the component was proved to be dimethyl o-phthalate from the spectrum of IR,13C-NMR and 1HNMR,which was one of the components from the toxin,and it had herbicidal activity.

坪草腐霉病菌毒素产生除草活性物质的条件优化

从多年生黑麦草上分离得到了5株腐霉菌(编号依次为PA1、PA2、PA3、PA4、PA5),通过鉴定,PA1和PA5菌株为瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum).将所得5株菌株分别在PD培养基、PS培养基、玉米粉培养基、改良Fries培养基、Czapek-Dox培养基和Richard培养基中进行培养,所得培养滤液、粗毒素对马唐和反枝苋的除草生物活性进行了测定.结果表明,在PD培养基中所产生的毒素除草生物活性最强,在供试的5株菌株中以PA1菌株所产生的毒素除草活性最强.PA1菌株在PD培养基中培养所得粗毒素对马唐、反枝苋、虎尾草、金色狗尾草、野燕麦、稗草、藜7种杂草的生长有明显的抑制作用;对玉米、小麦有轻微药害,而对大豆安全.试验发现,PA1菌株产毒的适宜pH值为7.0,以培养5 d的毒素除草活性最强;在100～150r/min条件下,振荡培养所得粗毒素的除草活性要明显高于静止培养.

生防木霉菌T_2菌株对禾草腐霉病抑菌作用及机制研究

深绿木霉对引起禾草腐霉病原菌瓜果腐霉有明显的抑制作用。深绿木霉菌与瓜果腐霉对峙培养结果表明,深绿木霉菌可以包围、覆盖瓜果腐霉的菌落,同时产生大量孢子;当孢子悬浮液的浓度为4.65×106个/mL时,对瓜果腐霉菌的抑制率达53.56%。通过深绿木霉菌孢子悬浮液和3种药剂对草坪禾草腐霉病病原菌抑制效果的比较,深绿木霉孢子悬浮液浓度为1×107个/mL时与25%甲霜.霜霉的抑菌效果接近,分别为77.37%和79.57%。显微观察结果表明,深绿木霉菌丝缠绕在瓜果腐霉菌菌丝上,穿透菌丝在其内生长;或与瓜果腐霉菌的菌丝平行生长,再侵入瓜果腐霉菌内寄生。深绿木霉菌对瓜果腐霉的主要作用机制为重寄生作用。

腐霉枯萎病菌毒素在坪草抗病性筛选中的应用研究

为了快速鉴定坪草的抗病性，本研究利用坪草腐霉枯萎病菌毒素对坪草进行了抗病性鉴定。根、茎抑制率试验表明，多年生黑麦草中英斯派对该毒素的敏感性最强，10倍液对其根、茎抑制率分别为46．3％和86．1％。而草地早熟禾的抗性最强，其中阔雅对该毒素的敏感性最低，10倍液对根、茎抑制率分别为5．5％和30．1％。活体、离体生物测定结果表明草地早熟禾对腐霉病抗性最强，表现为1级，属于抗性品系，其次为高羊茅，为2～3级，匍匐剪股颖为3级，属于敏感品系，多年生黑麦草为3～4级，属于较敏感品系，综合评定阔雅和英斯派分别为抗病和感病品种。对抗、感品种进行防御酶类（SOD、POD、CAT）比活变化测定，结果显示，阔雅出现活性峰的时间要比英斯派早12-36h，而且阔雅细胞内SOD、POD、CAT的比活分别比英斯派高38．8％，59．1％和89．5％。

抗瓜果腐霉芽孢杆菌优良菌株的筛选及生物学特性

为获得具有高效抗菌活性的芽孢杆菌用于生物防治与果蔬保鲜,从柠檬、葡萄、红枣、酸奶、腐乳、豆瓣酱、哈尔滨红肠等26种食品样品中分离获得204株芽孢杆菌,通过对峙培养法,初筛得到62株抗瓜果腐霉(P.aphanidermatum)的菌株,选取其中抑菌效果明显的4株菌株,采用牛津杯扩散法经复筛得到1株显著抗瓜果腐霉的芽孢杆菌L-NM62,其发酵上清液对瓜果腐霉的抑菌圈直径达到(24.54±0.13)mm。菌株L-NM62经形态学、生理生化和16S rDNA序列分析,被鉴定为枯草芽孢杆菌L-NM62(Bacillus subtilis L-NM62)。进一步研究枯草芽孢杆菌L-NM62的生物学特性,发现该菌株的最适生长温度37℃,最适pH值7.5,最适接种量1.0%,并测定了该条件下枯草芽孢杆菌L-NM62的生长曲线。在此基础上,考察枯草芽孢杆菌L-NM62的抗菌谱,结果表明,枯草芽孢杆菌L-NM62具有广谱的抗菌活性,尤其对霉菌具有高效广谱的抗菌效果,显示出了很好的潜在开发应用前景。

木霉（TR－5）对病原真菌的拮抗机制和防病效果研究

从土壤中分离获得一株木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｓｐ．）菌株（ＴＲ－５），用对峙法和系列稀释法测定其对立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ），禾谷丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｃｅｒｅａｌｉｓ），西瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ∫ｎｉｖｅｕｍ），油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ），昆明腐霉（Ｐｙｈｔｉｕｍｋｕｎｍｉｎｇｅｎｓ）和寄生疫霉（ＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａＰａｒａｓｉｔｉｃａ）的拮抗作问。结果表明，ＴＲ－５菌株对６种病原真菌都具有极强的拮抗作用，主要表现为缠绕、附着在病原真菌菌丝上，同时产生吸器侵入病原真菌的菌丝，使菌丝断裂。还能分泌有毒或抗生物质抑制其生长，并具有很强的生长竞争能力。ＴＲ－５菌株对立枯丝核菌，禾谷丝核菌和西瓜枯萎病菌的有效抑制浓度为１０６～１０７个孢子／ｍｌ；对油菜菌核病菌和昆明腐霉菌为１０４～１０５个孢子／ｍｌ；而对寄生疫霉为１０５～１０６个孢子／ｍｌ。用ＴＲ－５木霉的分生孢子制剂在温室条件下对黄瓜猝倒病（Ｐｙｔｈｉｕｍａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）和黄瓜疫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｄｒｅｃｈｓｌｅｒｉ）进行防治试验，效果分别?

瓜果腐霉毒素对多年生黑麦草的致病作用机理初步研究

为了明确瓜果腐霉毒素对多年生黑麦草的致病作用机制,本试验对瓜果腐霉毒素处理后多年生黑麦草的叶绿素、β-胡萝卜素、光合系统Ⅱ、丙二醛、超氧自由基、希尔反应活力、根系活力以及叶片含水量进行了测定。结果发现,毒素处理后的多年生黑麦草叶绿素、β-胡萝卜素遭到了破坏,Fv/Fm,Fm随剂量增加而降低,新速ⅡFo几乎不变,而英斯派Fo随剂量的增大而增大,丙二醛含量随除草毒素剂量的增大而增大,超氧自由基含量随除草毒素剂量的增大而增大,同时发现2种多年生黑麦草的希尔反应活力、叶片含水量、根系活力也受到了不同程度的影响。

草坪禾草根腐病病原菌生物学特性研究

从草坪禾草根腐病病株不同发病部位分离到的病原菌,经致病性测定确定该病原菌为腐霉属的瓜果腐霉。本试验研究了不同温度、光照、pH值、碳氮源营养和多种培养基对瓜果腐霉菌菌落扩展、孢子囊产量和卵孢子产量的影响。结果表明,瓜果腐霉菌菌落扩展的温度范围为15～40℃,最佳温度为30～35℃,孢子囊产生的最适温度为15～25℃,卵孢子产生的最适温度为20～25℃。菌落在pH值为7～8的培养基上能够迅速扩展,孢子囊产量最大的pH值为9～10,pH值为6时卵孢子的产量最大。黑暗条件有利于菌丝生长和卵孢子的产生,光照条件下孢子囊产量最大,紫外光处理能加速菌丝的生长和孢子囊的产生,但同时却抑制了卵孢子的形成。淀粉对孢子囊和卵孢子的产生有明显的促进作用;瓜果腐霉可以很好的利用NH4NO3产生孢子囊,而脲有利于卵孢子的产生。

西瓜绵腐病菌生物学特性研究

本文针对辽宁省西瓜生产上近年趋重发生的绵腐病,通过病原菌形态特征观察、柯赫氏法则证病试验、rD-NA-ITS序列测定及分析,确定其致病菌为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum);并对该病原菌的主要生物学特性进行了研究。试验结果表明:菌丝在黄瓜煎汁培养基、蔗糖培养基、硫酸铵、甘氨酸培养基中生长最适;其生长最适温度35℃,最适pH为6～8;光照对菌丝生长影响较小;菌丝致死温度为51℃,10min。产生孢子囊以菠菜煎汁培养基为最适,在麦芽糖、硝酸钾培养基中孢子囊产生量最大;产生孢子囊的最适温度为25℃、最适pH为8;光照培养产生孢子囊数量最多。

高羊茅对瓜果腐霉引起的草坪草腐霉枯萎病的抗病性评价

采用土壤接菌法,对来自7个国家的44份高羊茅(Festuca arundinace Schreb.)种质材料进行了苗期抗腐霉枯萎病性状评价。通过对存活率、株高、生物量等形态指标和质膜电导率、游离脯氨酸含量等生理指标的测定,并利用主成分分析法对其进行了抗病性综合评价。结果表明:接种瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)后,抗腐霉枯萎病较强的高羊茅种质材料有追寻者、蒂坦、爱瑞3及奥运金牌等;抗病性中等的材料有米斯特拉尔、阿里安尼、交战2号、巴塞尔等;抗病性较差的材料有猎狗6号、柏拉图、易凯、野传等。因此追寻者、蒂坦、爱瑞3等抗性较强的材料值得在生产中进行推广应用。

寄生玉米的6种腐霉及其致病性研究

从国内12省、自治区、直辖市玉米植株上分离出腐霉菌菌株,依据形态特征、培养性状、生长抑制温度,以及产生的有性与无性器官,鉴别出6个腐霉种:棘腐霉(Pythium acanthicum Drechsler),瓜果腐霉(P.aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick),强雄腐霉(P. arrhenomanes Drechsler),禾生腐霉(P.graminicola Subramaniam),肿囊腐霉(P.inflatum Matthews),寡雄腐霉(P.oligandrum Drechsler),其中肿囊腐霉出现频率高,分布广泛。回接玉米表明,腐霉能够侵染玉米并引起病害,肿囊腐霉、禾生腐霉、强雄腐霉、棘腐霉是玉米青枯病的重要致病菌;瓜果腐霉能够引起玉米中部茎节腐烂;寡雄腐霉虽寄生玉米,但对玉米成株无致病力。

伽师甜瓜猝倒病生防放线菌的筛选

【目的】分离、鉴定引起伽师甜瓜(Cucumismelo L.)猝倒病的病原菌,筛选可用于甜瓜猝倒病生物防治的拮抗性放线菌。【方法】采用组织分离法分离伽师甜瓜猝倒病的病原菌,用琼脂块法和无菌发酵滤液抑菌性试验筛选拮抗瓜果腐霉的生防放线菌,搭片法观察生防放线菌菌丝与瓜果腐霉菌丝间的相互作用。【结果】伽师甜瓜猝倒病的病原菌为瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum);筛选出7株对瓜果腐霉具有显著拮抗性的生防放线菌,其中8号放线菌对瓜果腐霉的拮抗环宽度为13.3mm,其无菌发酵滤液对瓜果腐霉的抑菌率在培养120h时高达88.3%。【结论】7株生防放线菌对由瓜果腐霉引起的伽师甜瓜猝倒病均有显著抑制作用;7株生防菌可通过产生抗菌物质或缠绕、消解菌丝的方式抑制瓜果腐霉生长。

瓜果腐霉毒素除草活性物质的初步分离

为分离纯化瓜果腐霉毒素中的除草活性物质,本研究利用吸附树脂对瓜果腐霉毒素进行了吸附,利用薄层层析对其粗毒素样品进行了初分离,在展开剂乙酸乙酯-甲醇-石油醚-乙酸为30∶5∶25∶1时,可以分离出5个条带,生物测定结果表明,其中M1和M2条带的除草活性较强。对M1进行了HPLC分析,结果表明,该样品可分离出2种除草活性组分,其保留时间分别为9.89 min和14.98 min,其中保留时间为14.98 min的组分与已报道的邻苯二甲酸二甲酯相同。

一株拮抗腐霉病菌的枯草芽孢杆菌的分离鉴定及诱变选育

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可产生多种抗菌蛋白、抗生素及酶类抗菌物质,对多种植物病原真菌有良好的防治效果。通过从土壤中分离抑真菌活性的枯草芽孢杆菌,并进行UV-NaNO2物理化学联合诱变,获得一株对腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)具有较强拮抗作用的菌株。突变菌株的生长速率、耐高温性均较出发菌株有较大提高,盆栽试验表明诱变菌株较出发菌株对腐霉病菌引发的黄瓜腐霉病具有更好的防治作用。

木霉菌对3种致病真菌的作用关系研究

采用室内生长速率法测定了木霉菌 (Trichodermaspp .)与 3种致病真菌的互作关系 ,结果表明 ,木霉菌与 3种致病真菌间均存在明显的互作关系 ,但其互作类型与作用强度各不相同 :木霉菌与立枯丝核菌 (Rhi zoctoniasolani)间存在拮抗作用 ,但抑制强度不大 ;木霉菌与腐霉菌 (Pythiumaphanidermatum)不仅存在拮抗作用 ,且对腐霉菌的抑制强度较大 ;木霉菌与镰刀菌 (Fuariumspp .)间存在明显的协生作用。经进一步多方面考察后 。

黄瓜可培养内生细菌抗病株的筛选与鉴定

以黄瓜叶片为材料,在初花和结瓜2个时期共分离得到内生细菌81株。采用平板对峙方法筛选出5株对黄瓜叶片病原真菌有明显体外拮抗活性的内生细菌,其中2株为单抗瓜果腐霉内生细菌Y1和CE1,2株为单抗掘氏疫霉内生细菌Y2和CE8,1株为对2种病原菌都产生抗性的Y5。经16S rDNA进行了初步鉴定,确认这5株细菌分别属于短小杆菌属(Curtobacte-rium sp.)、节杆菌属(Arthrobacter sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、泛菌属(Pantoea sp.)和芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。相关研究为黄瓜内生拮抗细菌的理论探索和生产应用提供了一定的理论基础。

瓜果腐霉的液体发酵工艺及代谢产物活性测定

本试验对具有除草活性的瓜果腐霉PA1-M1菌株进行了液体发酵工艺探讨,并对其发酵产物进行了除草活性和抑菌活性测定。结果表明:PA1-M1菌株以振荡方式、中酸性发酵为适宜,其培养滤液粗提物和菌丝粗提物对马唐根和芽的IC50分别为0.36 mg/mL、0.46 mg/mL和7.36 mg/mL、4.09 mg/mL。此外,培养滤液粗提物对小麦赤霉病菌表现出了一定程度的抑菌活性。

草坪草腐霉枯萎病菌的分离鉴定及其对高羊茅的致病性

对采自高尔夫球场内11份早熟禾的腐霉病株进行分离培养,形态学鉴定为瓜果腐霉。生物学测定结果表明,其最适生长温度是35℃,在25～35℃时生长速度最快;最适pH值为7.5,在pH值为6～9时生长较好;通过rDNA-ITS序列测定和同源性比较也表明,菌株是瓜果腐霉,用MEGA5.0软件构建系统发育树得到,与该菌株遗传距离最近的腐霉是AF452151;对高羊茅品种美洲虎4号(Jaguar 4G)的致病性试验测定表明,该菌株为致病菌。