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基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS代谢组学和16S rRNA基因测序探讨骨疏丹补肾机制
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作者 佟琳 冯啟圣 +4 位作者 张静 陆晴 石伟 赵龙山 熊志立 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第6期675-685,698,共12页
目的 整合代谢组学和肠道微生物组学的研究策略探讨骨疏丹(Gushudan, GSD)预防氢化可的松诱导的肾阳虚证(kidney-yang deficiency syndrome, KYDS)大鼠的补肾作用机制。方法 分别采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC... 目的 整合代谢组学和肠道微生物组学的研究策略探讨骨疏丹(Gushudan, GSD)预防氢化可的松诱导的肾阳虚证(kidney-yang deficiency syndrome, KYDS)大鼠的补肾作用机制。方法 分别采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)的非靶向代谢组学和16S rRNA基因测序分析的肠道微生物组学方法,分析正常对照组、肾阳虚证模型组、骨疏丹给药组和阳性对照组大鼠粪便代谢物谱与肠道菌群组成,采用Pearson相关分析探讨内源性差异代谢物与差异菌群之间的相关性。结果 基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS的代谢组学方法在正负离子模式下共发现骨疏丹参与调控肾阳虚症的22种差异代谢物,如色氨酸、鹅去氧胆酸、肌酐和油酸酰胺等,主要涉及氨基酸代谢、胆汁酸代谢、能量代谢和脂质代谢。基于16S rRNA测序分析发现骨疏丹在属水平显著上调普雷沃氏菌(Prevotellaceae)的相对丰度(P<0.05),显著下调颤杆菌(Oscillibacter)的相对丰度(P<0.05)。相关性分析结果表明甘胆酸和鹅去氧胆酸与在属水平显著改变的普雷沃氏菌(Prevotellaceae)显著正相关(P<0.05),而与考拉杆菌(Phascolarctobacterium)显著负相关(P<0.05)。二十二碳六烯酸与毛螺菌(Lachnospiraceae)显著负相关(P<0.05)。结论 骨疏丹通过良性调节内源性代谢和肠道菌群结构发挥补肾作用,为中药通过肠-肾轴治疗疾病提供新的思路和方法。 展开更多
关键词 肾阳虚证 骨疏丹 代谢组学 肠道菌群 UPLC-q-Orbitrap HRMS 16S rRNA基因测序
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A correlation study between ITGA6 gene,chromosome 8q24,MSMB genes and prostate cancer
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作者 王建业 《外科研究与新技术》 2011年第4期252-252,共1页
Objective To explore the correlation between IT-GA6 gene ( rs12621278, G ) , MSMB gene ( rs10993994,T) ,chromosome 8q24 9 ( rs10086908, T) and prostate cancer ( PCa) in Beijing residents,and to explore the correlation... Objective To explore the correlation between IT-GA6 gene ( rs12621278, G ) , MSMB gene ( rs10993994,T) ,chromosome 8q24 9 ( rs10086908, T) and prostate cancer ( PCa) in Beijing residents,and to explore the correlation between genotype and pheno- 展开更多
关键词 gene A correlation study between ITGA6 gene chromosome 8q24 MSMB genes and prostate cancer
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应用Q-PCR定性检测KIR基因有无方法的建立
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作者 李宇楠 甄建新 +2 位作者 梁爽 喻琼 邓志辉 《中国输血杂志》 CAS 2024年第6期660-665,共6页
目的建立定性检测KIR基因有无的Q-PCR方法。方法根据高分辨水平中国人群KIR等位基因的多态性,并参考国际IPD-KIR数据库,针对16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted两种亚型,设计KIR基因特异性引物用于Q-PCR扩增反应;同时设置一孔阴性... 目的建立定性检测KIR基因有无的Q-PCR方法。方法根据高分辨水平中国人群KIR等位基因的多态性,并参考国际IPD-KIR数据库,针对16种KIR基因及2DS4-Normal、2DS4-Deleted两种亚型,设计KIR基因特异性引物用于Q-PCR扩增反应;同时设置一孔阴性对照、一孔阳性对照(特异性扩增人体生长激素HGH基因片段),以监控假阳性、假阴性的结果。为验证Q-PCR方法的可靠性,随机选择302份已采用KIR PCR-SSP商品化试剂盒检测的标本,采用Q-PCR方法盲检和对比。结果300人份的Q-PCR检测结果与已知的PCR-SSP检测结果相符,有2份标本结果不一致,其中1例标本的2DS5基因Q-PCR检测结果为阴性,而PCR-SSP检测结果为阳性;另一例标本2DS1基因Q-PCR检测结果为阳性,而PCR-SSP检测结果为阴性。对2份标本分别进行2DS5、2DS1基因测序分型,证实Q-PCR定性检测结果正确。结论本文建立的KIR Q-PCR方法结果准确、可靠,可用于KIR基因有无的定性检测。 展开更多
关键词 杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR) KIR基因有无 实时荧光定量-PCR 序列特异性引物-PCR 测序分型
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水稻粒长基因GS3和qGL3功能标记的设计及应用 被引量:8
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作者 丁丹 张亚东 +9 位作者 郑佳 赵春芳 陈涛 赵庆勇 朱镇 周丽慧 姚姝 赵凌 于新 王才林 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1191-1197,共7页
水稻粒型是与其产量直接相关的重要性状。在前期研究证实来源于特大粒水稻TD70和籼稻品种Kasalath的重组自交系(RIL)群体中检测到已克隆的粒长GS3和q GL3基因的基础上,通过TD70和Kasalath的GS3、q GL3基因序列差异分析,设计功能标记,检... 水稻粒型是与其产量直接相关的重要性状。在前期研究证实来源于特大粒水稻TD70和籼稻品种Kasalath的重组自交系(RIL)群体中检测到已克隆的粒长GS3和q GL3基因的基础上,通过TD70和Kasalath的GS3、q GL3基因序列差异分析,设计功能标记,检测240个RILs和不同粒长的6个粳稻、9个籼稻中GS3、q GL3基因类型及其效应。结果显示:TD70和Kasalath中的GS3基因和q GL3基因分别在第2外显子上的编码区+165位置和第10外显子上的编码区+1 092位置存在一个由碱基C到碱基A的单核苷酸替换,据此设计了四引物扩增受阻突变体系(Tetra-primer ARMS-PCR)标记,TD70的GS3和q GL3基因分别扩增为270 bp和145 bp条带及448 bp和288bp条带,Kasalath的GS3、q GL3基因分别扩增为270 bp和175 bp条带及448 bp和216 bp条带;240个RILs中含有GS3-T和q GL3-T基因的株系61个,含GS3-T和q GL3-K的株系48个,含GS3-K和q GL3-T的株系17个;不同粒型基因组合的粒长存在显著差异,表现为GS3-T+q GL3-T>GS3-T+q GL3-K或GS3-K+q GL3-T>GS3-K+q GL3-K;长粒型的1个粳稻和5个籼稻品种的GS3基因表现为TD70带型,短粒型的5个粳稻和4个籼稻品种的GS3基因表现为Kasalath带型;所有水稻品种的q GL3基因均表现为Kasalath带型。表明开发的GS3和q GL3基因功能标记是有效的,可用于水稻分子标记辅助育种。 展开更多
关键词 水稻 GS3基因 qGL3基因 序列差异 四引物ARMS-PCR标记
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梭梭过氧还蛋白基因(PrxQ)克隆与序列分析 被引量:5
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作者 甘晓燕 石磊 +3 位作者 周晓燕 陈虞超 李苗 宋玉霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期53-57,共5页
采用RT-PCR、RACE方法从超旱生、耐盐植物梭梭中扩增出PrxQ基因cDNA序列,该序列全长966bp,包含654bp的开放阅读框,推测氨基酸序列全长为218个氨基酸残基,该蛋白分子量为24 106.0,等电点为9.78,含有2个保守的Cys残基。序列同源性分析结... 采用RT-PCR、RACE方法从超旱生、耐盐植物梭梭中扩增出PrxQ基因cDNA序列,该序列全长966bp,包含654bp的开放阅读框,推测氨基酸序列全长为218个氨基酸残基,该蛋白分子量为24 106.0,等电点为9.78,含有2个保守的Cys残基。序列同源性分析结果显示,核苷酸序列与藜科几种盐生植物如碱蓬等的同源性为70.01%,与其他植物佛甲草等的同源性为55.30%。说明,PrxQ基因在藜科盐生植物中是一种较高保守的基因。 展开更多
关键词 梭梭 Prxq基因 基因克隆
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Q型烟粉虱化学感受蛋白基因BtabCSP1的克隆与分析 被引量:5
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作者 白润娥 李静静 +3 位作者 唐雅菲 熊大斌 李帅良 闫凤鸣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期3892-3898,共7页
【目的】克隆Q型烟粉虱(Bemisia tabaci)化学感受蛋白基因,分析其序列特征和表达特性,为深入研究该类基因功能奠定基础。【方法】根据桃蚜化学感受蛋白OS-D2a(ABM5558)的氨基酸序列,借助生物信息学搜索烟粉虱EST序列拼接了1个烟粉虱化... 【目的】克隆Q型烟粉虱(Bemisia tabaci)化学感受蛋白基因,分析其序列特征和表达特性,为深入研究该类基因功能奠定基础。【方法】根据桃蚜化学感受蛋白OS-D2a(ABM5558)的氨基酸序列,借助生物信息学搜索烟粉虱EST序列拼接了1个烟粉虱化学感受蛋白基因(BtabCSP1),以烟粉虱mRNA为模板,采用RT-PCR扩增克隆烟粉虱化学感受蛋白cDNA。采用半定量RT-PCR对不同发育阶段的烟粉虱样品中BtabCSP1的表达模式进行研究。【结果】BtabCSP1完整阅读框全长为2 626 bp,包含2个外显子和1个内含子,编码131个氨基酸残基,其中含有1个CX6CX18CX2结构域,为化学感受蛋白的典型特征。BtabCSP1在供试样品中均有表达,并且在2龄、3龄和伪蛹阶段表达量更高。聚类分析结果表明,烟粉虱与果蝇、桃蚜等物种遗传关系较远,化学感受蛋白基因在物种进化过程中较为活跃。【结论】从Q型烟粉虱若虫中克隆了1个化学感受蛋白基因BtabCSP1,该基因在烟粉虱不同发育阶段中均能表达,推测其对烟粉虱的生长发育具有重要的调控作用。 展开更多
关键词 q型烟粉虱 化学感受蛋白 基因克隆 特征分析
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肺炎克雷伯杆菌质粒介导喹诺酮耐药基因qnr的研究 被引量:2
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作者 何菡 孙桂珍 王清涛 《北京医学》 CAS 2012年第12期1055-1059,共5页
目的了解质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在肺炎克雷伯杆菌中的流行情况并探讨其相关耐药机制。方法纸片法和E-test法检测肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的敏感性;多重PCR方法检测菌株中qnr的携带情况;接合实验证实qnr的可转移性;肠道细菌基因间... 目的了解质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在肺炎克雷伯杆菌中的流行情况并探讨其相关耐药机制。方法纸片法和E-test法检测肺炎克雷伯杆菌对抗菌药物的敏感性;多重PCR方法检测菌株中qnr的携带情况;接合实验证实qnr的可转移性;肠道细菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)分型检测qnr阳性菌株的同源性;变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测qnr阳性菌株染色体旋转酶GyrA和拓扑异构酶ParC变异位点。结果 2006年首都医科大学附属北京朝阳医院临床分离的160株肺炎克雷伯杆菌中检出48株qnr阳性菌株,分别为1株qnrA阳性菌,21株qnrB阳性菌,22株qnrS阳性菌,4株同时携带qnrB和qnrS。25株qnrB阳性菌和7株qnrS阳性菌接合实验成功。同源性分析未发现qnr基因在院内有暴发流行。检测到GyrA亚基存在4种氨基酸突变类型,ParC亚基存在2种氨基酸突变类型。结论本研究分离的肺炎克雷伯杆菌中qnrB和qnrS为流行亚型。qnr基因在不同菌株中可水平转移,与编码GyrA和ParC氨基酸位点突变同时存在时可导致高水平耐药。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯杆菌 喹诺酮 抗菌药物 qNR基因
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利用基因芯片筛选禽致病性大肠杆菌中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因 被引量:4
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作者 薛媚 祁克宗 +2 位作者 薛挺 涂健 王惠珂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期672-674,共3页
为筛选禽致病性大肠杆菌(APEC)中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因表达谱情况并对耐药相关基因进行分析,本实验采用基因芯片技术对APEC野生株和△phoP/Q基因缺失突变株进行转录组的差异性比较,结果检测到713个差异表达基因,其中403... 为筛选禽致病性大肠杆菌(APEC)中与phoP/Q二元调控系统相关的耐药基因表达谱情况并对耐药相关基因进行分析,本实验采用基因芯片技术对APEC野生株和△phoP/Q基因缺失突变株进行转录组的差异性比较,结果检测到713个差异表达基因,其中403个基因的表达水平上调,310个基因的表达水平下调。这些基因涉及生物过程、细胞组分、蛋白质分类及调控通路等功能,本研究着重从上述差异基因中筛选出了aphA、parE等耐药相关的功能基因。本研究对phoP/Q二元调控系统与APEC耐药调控的相关性进行了探索与分析,为进一步深入探寻APEC耐药性的调控机制提供了新的切入点与研究靶标。 展开更多
关键词 基因芯片 phoP/q二元调控系统 禽致病性大肠杆菌 耐药基因
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辅酶Q的生物合成途径以及相关的酶和基因 被引量:2
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作者 刘克杉 黄晓星 +2 位作者 吴文芳 韩斯琴 徐梅 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期140-144,共5页
综述了辅酶Q在生物体中的合成途径以及催化各步反应的酶和编码基因。
关键词 辅酶q 合成途径 编码基因 综述
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广西南宁地区Hb Q-Thailand基因分析 被引量:6
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作者 张强 范歆 +3 位作者 韦媛 陈秋莉 唐燕青 何升 《检验医学与临床》 CAS 2014年第20期2803-2804,2807,共3页
目的了解广西南宁地区异常血红蛋白Hb Q-Thailand分子特征。方法回顾性分析2013年1月至2014年1月来广西壮族自治区妇幼保健院·儿童医院做地贫筛查的23 026例患者资料,通过毛细管电泳方法,确定可疑Hb Q-Thailand患者,运用扩增不应... 目的了解广西南宁地区异常血红蛋白Hb Q-Thailand分子特征。方法回顾性分析2013年1月至2014年1月来广西壮族自治区妇幼保健院·儿童医院做地贫筛查的23 026例患者资料,通过毛细管电泳方法,确定可疑Hb Q-Thailand患者,运用扩增不应突变系统对可疑阳性患者进行确诊。结果在23 026例中共确诊Hb Q-Thailand阳性患者29例,占筛查人数的0.13%。且有1例是我国首次发现的Hb Q-Thailand不与4.2左侧缺失型α-地贫连锁的患者。结论 Hb Q-Thailand作为异常血红蛋白的一种,有其独特的分子特征,在日常工作中应引起足够的重视。 展开更多
关键词 HB q-Thailand ARMS-PCR 基因分析
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产辅酶Q_(10)大肠杆菌工程菌的构建 被引量:1
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作者 李家洲 谢明权 +1 位作者 李安兴 罗晓春 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第5期90-95,共6页
克隆放射型根瘤菌ddsA基因,用于构建red重组的打靶片段,通过同源重组替换大肠杆菌基因组上的ispB基因,使合成辅酶Q8的大肠杆菌具备合成辅酶Q10的能力.通过强化辅酶Q合成过程中的ddsA、ubiA、ispA、idi等关键酶基因,可使大肠杆菌辅酶Q10... 克隆放射型根瘤菌ddsA基因,用于构建red重组的打靶片段,通过同源重组替换大肠杆菌基因组上的ispB基因,使合成辅酶Q8的大肠杆菌具备合成辅酶Q10的能力.通过强化辅酶Q合成过程中的ddsA、ubiA、ispA、idi等关键酶基因,可使大肠杆菌辅酶Q10的合成能力提高126.9%.综合分析表明,ddsA与ubiA为辅酶Q10合成的关键基因,ispA与idi为辅酶Q10合成的次关键基因. 展开更多
关键词 辅酶q 大肠杆菌 ddsA基因 工程菌 同源重组
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少突胶质细胞瘤中PTEN基因突变和10q染色体的杂合性缺失分析 被引量:3
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作者 何杰 汪万英 +2 位作者 徐杰 Hoang-Xuan Khe Sanson Marc 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期275-278,共4页
目的 探讨PTEN基因突变和 10q染色体的杂合性缺失 (LOH)在少突胶质细胞瘤发生和发展中的意义。 方法 以 5 5例少突胶质细胞瘤和混合性胶质细胞瘤为研究对象 ,PCR扩增PTEN基因所有 9个外显子 ,其产物经变性梯度凝胶电泳 (DGGE)后 ,DN... 目的 探讨PTEN基因突变和 10q染色体的杂合性缺失 (LOH)在少突胶质细胞瘤发生和发展中的意义。 方法 以 5 5例少突胶质细胞瘤和混合性胶质细胞瘤为研究对象 ,PCR扩增PTEN基因所有 9个外显子 ,其产物经变性梯度凝胶电泳 (DGGE)后 ,DNA序列分析检测PTEN基因突变。应用不同颜色荧光标记 10q微卫星标志物引物 ,PCR扩增后 ,其产物在自动测序仪上进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,用GeneScan软件分析LOH。 结果  2 5 5例有PTEN基因突变 ,1例是PTEN的第 9外显子的 2 0号T碱基缺失导致终止密码 35 1易位至 347,另 1例在 139位发生C到A的转换 ,使得Phe变成Leu。 2 3 5 5 (4 2 % )例出现染色体 10q的LOH ,其中 15 / 5 5例位于 10q2 3,3(D10S5 4 1) ,其为PTEN基因位点 ,12 / 5 5例 10q微卫星标志物位点完全缺失。 结论 在少突胶质细胞瘤中PTEN突变较少见 ,而 10qLOH较频繁 ,尤其在恶性度高的少突胶质细胞瘤中表现明显 ,提示 10qLOH与少突胶质细胞瘤恶性进展有关 ,且 展开更多
关键词 少突胶质细胞瘤 PTEN基因 基因突变 10q染色体 杂合性缺失 混合性胶质细胞瘤
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光通信系统Q因子测量和原理 被引量:8
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作者 张成良 《电信工程技术与标准化》 2001年第4期10-13,共4页
10Gbit/s及其以上速率光传输系统非线性效应很强,对系统最终的BER性能有着举足轻重的影响。人 们倾向采用Q因子来衡量系统性能。Q因子被定义为在接收机判决电路信噪比,这种检测到的电SNR 最终决定物理层系统BER。... 10Gbit/s及其以上速率光传输系统非线性效应很强,对系统最终的BER性能有着举足轻重的影响。人 们倾向采用Q因子来衡量系统性能。Q因子被定义为在接收机判决电路信噪比,这种检测到的电SNR 最终决定物理层系统BER。可以适用于各种信号格式和速率的数字客户信号,而且不需要解开帧结构, 比较简单易行。本文具体讨论Q因子的定义及与OSNR之间的关系。同时介绍ITU关于Q因子的测 试方法和对测试设备的要求。 展开更多
关键词 q因子 高斯噪声 光通信系统
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“阿Q的外甥:”1990年代后小说中的阿Q文学后裔 被引量:1
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作者 古大勇 《山西师大学报(社会科学版)》 CSSCI 北大核心 2009年第5期112-116,共5页
阿Q作为一种精神现象的"原型",有着众多的文学后裔,仅就1990年代后小说而言,就出现了刘跃进、许三观、福贵、陈奂生、张大民、《阿Q后传》中的"阿Q"等人物形象,这些变异的后裔或多或少遗传了他们的先祖阿Q的精神基... 阿Q作为一种精神现象的"原型",有着众多的文学后裔,仅就1990年代后小说而言,就出现了刘跃进、许三观、福贵、陈奂生、张大民、《阿Q后传》中的"阿Q"等人物形象,这些变异的后裔或多或少遗传了他们的先祖阿Q的精神基因,表现了大致相似的"阿Q相"和文化—心理结构。但由于作家写作宗旨、价值立场与所处时代背景的不同,作家对人物的主体情感态度差异甚殊。 展开更多
关键词 q 原型 精神基因 主体态度
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Characterization of WAP2 gene in Aegilops tauschii and comparison with homoeologous loci in wheat
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作者 Shun-Zong NING Qi-Jiao CHEN +4 位作者 Zhong-Wei YUAN Lian-Quan ZHANG Ze-Hong YAN You-Liang ZHENG Deng-Cai LIU 《Journal of Systematics and Evolution》 SCIE CSCD 北大核心 2009年第6期543-551,共9页
The Q/q gene, also known as WAP2, is an important gene for wheat domestication and is a member of the AP2 (APETALA2) class of transcription factors. In the present study, we first isolated the WRAP2 allele (where t... The Q/q gene, also known as WAP2, is an important gene for wheat domestication and is a member of the AP2 (APETALA2) class of transcription factors. In the present study, we first isolated the WRAP2 allele (where the superscript "t" refers to the speciese source, in this case "tauschii") on chromosome 5D from Aegilops tauschii Coss., the D-genome donor species of common wheat. We found that WRAP2 and the AP2 gene from Arabidopsis share a central core of the AP2 polypeptide, a highly basic 10-amino acid domain, and an AASSGF box, although there are many differences in the 37-amino acid serine-rich acidic domain and the remaining regions. In addition, WRAP2 was highly homologous to the homoeologous loci on 5A and 5B of wheat at both the nucleotide and amino acid level. However, there were some variations that are probably related to gene function. In the first AP2 domain, the amino acids VYL on the 5D and 5A loci were replaced with LLR on 5B. In the 37-amino acid serine-rich acidic domain, WRAP2 on 5D had an extra amino acid insertion. There was also a variation at the 329 amino acid position, which is thought to be related to the appearance of free-threshing wheat. At this position, the amino acid is isoleucine on 5A for the Q allele and valine for the q allele, whereas the amino acid is leucine on 5D and 5B. Furthermore, a Stowaway miniature terminal inverted repeat element (MITE) insertion was present in the ninth intron of WAP2 on 5B of all common wheats and partial tetraploid Triticum turgidum wheats. These results provide new clues for studies into the evolutionary biology of WAP2 and the origin of common wheat. 展开更多
关键词 Aegilops tauschii AP2 gene miniature terminal inverted repeat element (MITE) q gene wheat.
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用人染色体14q24.3区带探针池直接分离表达顺序 被引量:3
16
作者 张民 余龙 +4 位作者 胡培蓉 毕安定 夏家辉 邓汉湘 赵寿元 《实验生物学报》 CSCD 1997年第3期241-246,共6页
本文报道了从显微切割的人染色体区带直接分离区带专一性表达序列的方法和结果。
关键词 染色体 14q24.3区带 探针 基因表达序列 分离
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Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒 被引量:2
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作者 于雷 李永红 +2 位作者 秦玺 杨靖清 饶春明 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期352-355,共4页
目的:建立Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒(RCA)。方法:首先制备高纯度的pXC1质粒参考品(含有E1基因序列),紫外吸收法定量后经过数学换算得到拷贝数;然后比较染料法和探针法的灵敏度,建立适用的Q-PCR检测方法;最后用新建... 目的:建立Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒(RCA)。方法:首先制备高纯度的pXC1质粒参考品(含有E1基因序列),紫外吸收法定量后经过数学换算得到拷贝数;然后比较染料法和探针法的灵敏度,建立适用的Q-PCR检测方法;最后用新建Q-PCR法定量测定腺病毒基因治疗产品中的RCA。结果:pXC1质粒参考品的拷贝数初步标定为2.6×1010拷贝/μL;探针法的灵敏度比染料法高1000倍;将pXC1质粒参考品应用于Q-PCR(探针法)测定腺病毒基因治疗产品中的RCA,标准曲线回归方程为y=-1.416ln(x)+47.395,R^2=0.9966,供试品的Cq值均位于标准曲线范围内。结论:新建Q-PCR法适用于检测腺病毒基因治疗产品中的RCA,且结果准确可靠。 展开更多
关键词 腺病毒基因治疗产品 复制型腺病毒 q—PCR pXC1质粒
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幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagQ基因缺失株的构建与鉴定 被引量:1
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作者 姚逸正 王华 +4 位作者 倪颖 沈以新 徐驰 孙凤英 邵世和 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2014年第6期487-490,494,共5页
目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)Ⅳ型分泌系统cag Q基因缺失株。方法:通过PCR扩增出cag Q基因编码区侧翼同源臂序列,经TA克隆后进行双酶切,并将纯化后上下游同源臂连接至两端含有卡那霉素抗生素基因的载体p Bluscrip... 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)Ⅳ型分泌系统cag Q基因缺失株。方法:通过PCR扩增出cag Q基因编码区侧翼同源臂序列,经TA克隆后进行双酶切,并将纯化后上下游同源臂连接至两端含有卡那霉素抗生素基因的载体p Bluscript SK II(-),构建为cag Q基因自杀质粒。利用电穿孔法将自杀质粒导入H.pylori,进行同源重组。培养后通过卡那霉素抗生素筛选出基因缺失株,并经PCR及核酸序列分析进一步确定基因缺失株。结果:H.pylori的cag Q基因自杀质粒p Blue KM40-△cag Q经酶切验证无误,进行电转化后经PCR及核酸序列分析结果正确。结论:成功获得H.pylori cag Q基因缺失株,命名为Hp26695-△cag Q。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 Ⅳ型分泌系统 CAG q 基因缺失株
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抗生素利福平对Q烟粉虱防御基因表达水平的影响 被引量:2
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作者 刘凌云 苏奇 +2 位作者 方艺伟 张友军 褚栋 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期962-969,共8页
通过饲喂昆虫,抗生素广泛应用于昆虫共生菌功能研究中。为了探讨抗生素对烟粉虱功能基因的直接影响,研究了通过喂食含利福平棉花叶片后烟粉虱体内乙醇脱氢酶adh-class III,knottin抗菌肽,四次跨膜蛋白tetraspanin-3,丝氨酸蛋白酶抑制剂s... 通过饲喂昆虫,抗生素广泛应用于昆虫共生菌功能研究中。为了探讨抗生素对烟粉虱功能基因的直接影响,研究了通过喂食含利福平棉花叶片后烟粉虱体内乙醇脱氢酶adh-class III,knottin抗菌肽,四次跨膜蛋白tetraspanin-3,丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin和TCP1-delta基因等5个防御基因表达量变化,结果表明50.0μg/m L利福平处理,烟粉虱adh-class III、knottin、tetraspanin-3基因表达量显著高于对照(P<0.05),而serpin和TCP1-delta基因表达量没有显著差异(P>0.05)。100.0μg/m L利福平处理,5个防御基因表达量均显著高于对照(P<0.05)。抗生素利福平影响烟粉虱防御基因表达且与其浓度相关。本研究结果对于利用抗生素揭示昆虫共生菌功能研究具有重要参考价值。 展开更多
关键词 烟粉虱q 利福平 防御基因 表达量 共生菌
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禽致病性大肠杆菌双组分系统phoP/Q对鞭毛Ⅲ型分泌系统基因的调控预测 被引量:4
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作者 邓志文 王泽平 +4 位作者 李倩文 尹磊 涂健 宋祥军 祁克宗 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期821-829,共9页
本研究旨在探究禽致病性大肠杆菌(APEC)中双组分系统phoP/Q与鞭毛Ⅲ型分泌系统(鞭毛T3SS)蛋白之间的联系。运用软件进行功能分析,预测phoP/Q与鞭毛T3SS的关系,利用基因芯片技术对APEC野生株和ΔphoP/Q缺失突变株进行转录组的差异性比较... 本研究旨在探究禽致病性大肠杆菌(APEC)中双组分系统phoP/Q与鞭毛Ⅲ型分泌系统(鞭毛T3SS)蛋白之间的联系。运用软件进行功能分析,预测phoP/Q与鞭毛T3SS的关系,利用基因芯片技术对APEC野生株和ΔphoP/Q缺失突变株进行转录组的差异性比较,筛选鞭毛T3SS基座中变化较大基因,并用荧光定量PCR检测基因表达变化量。结果显示:经STRING预测发现phoP/Q可能通过调控鞭毛T3SS基因座附近的双组分系统来间接调控鞭毛T3SS。基因芯片筛选与荧光定量PCR检测发现phoP/Q缺失能使鞭毛T3SS核心组件的大部分基因表达差异显著,同时也影响了双组分中motA、motB与cheY的表达。本研究对phoP/Q双组分系统与鞭毛T3SS的关系进行了预测与探索,为进一步研究揭示细菌的活动与致病机制提供了新的切入点与研究方向。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 phoP/q 鞭毛T3SS 基因芯片
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