SD大白鼠骨髓多能间质干细胞QY1细胞系的生物稳定性分析

目的：探索建立Sprague-Dawley大白鼠骨髓间质干细胞（mesenchymat stem cells，MSCs）系体外长期培养的适宜条件及其生物学特性，并分析其稳定性，为进一步研究MSCs的诱导分化和应用提供理想的细胞模型。方法：应用细胞生物学、干细胞组织工程学等方法培养并纯化骨髓MSCs，检测细胞生长的形态、换液时间、生长曲线、倍增时间、贴壁率、染色体、培养条件和反复冻存后复苏对其生物学特性的影响。结果：多次传代后的细胞呈均一的成纤维细胞样；骨髓MSCs原代培养10～12d时融合至80％～90％，不同的首次换液时间之间差异没有统计学意义（P〉0．05）；P1，P3，P10，P20代细胞生长曲线基本相同，细胞的倍增时间P1为34．2h；P3为33．9h；P10为31．8h；P20为30．6h。4代细胞任意两代之间的细胞数差异没有统计学意义（P〉0．05）；传代后细胞迅速贴壁，约89％的细胞贴壁主要发生在接种后10h内。4代细胞任意两代之间的贴壁率差异没有统计学意义（P〉0．05）；在浓度为20％的标准胎牛血清中，骨髓MSCs的增殖活性最高；在种植细胞密度为8×10^4／mL时，骨髓MSCs的增殖活性最高；吉姆萨染色显示P8代骨髓MSCs胞浆为淡紫红色，胞核为深蓝色，细胞内可见1～2个核仁；P8和P20代细胞染色体形态及数目均正常，染色体核型组成均为42，XY，符合大鼠正常二倍体细胞系特征；反复冻存后复苏骨髓MSCs，其活细胞数〉85％。至今已体外培养10个多月。结论：QY1细胞系是纯的、可长期传代的细胞系，可扩增并保持未分化状态，且其生物学性能稳定。