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SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析 被引量:8
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作者 敖叶 陈祥 +5 位作者 周志楠 张艳 洪磊 韦仕南 吴雨 唐文 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1607-1618,共12页
旨在验证SMAD1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究SMAD1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qRT-PCR法检测SMAD1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子... 旨在验证SMAD1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究SMAD1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qRT-PCR法检测SMAD1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑及卵巢组织的表达水平,PCR扩增黔北麻羊SMAD1基因CDS区,构建pEGFP-N3-SAMD1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-SAMD1重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达SMAD1试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇和孕酮的浓度,利用CCK-8法和Annexin V-FITC法检测超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测超表达SMAD1基因对SAMD1、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明,SMAD1基因在黔北麻羊各组织中均有表达。组间比较可知,卵巢和下丘脑组织单羔组极显著高表达于多羔组(P<0.01),输卵管组织中单羔组显著高表达于多羔组(P<0.05),其他组织未达到差异显著性(P>0.05)。本研究成功克隆了SMAD1基因CDS序列,未发现突变位点,并将pEGFP-N3-SAMD1重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞,转染试验组培养基中E2含量在12、48 h显著高于对照组(P<0.05),P4含量在12 h显著高于对照组(P<0.05);超表达SMAD1基因对细胞增殖在24 h达到显著促进作用(P<0.05),48、72 h达到极显著促进作用(P<0.01),并且发现超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的凋亡具有抑制作用,与SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖具有促进的结果是相符的。SMAD1基因超表达后繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达极显著降低(P<0.01)。综上表明,SMAD1基因超表达可提高E2、P4的生成,有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,也极显著抑制繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵。因此,SMAD1基因能够抑制这些基因的表达,致使黔北麻羊单羔组受胎率低,进而降低产羔数,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为SMAD1基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。 展开更多
关键词 黔北麻羊 SmaD1基因 卵巢颗粒细胞 差异表达 产羔性状
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OLR1基因生信分析及其在贵州黑山羊和黔北麻羊性腺轴中的表达
2
作者 杨红 杨远青 +4 位作者 周明帅 廖朝美 王正刚 袁超 杨洋 《安徽农业科学》 CAS 2024年第22期88-92,共5页
[目的]研究OLR1基因与贵州黑山羊和黔北麻羊繁殖率之间的关系,为研究OLR1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。[方法]通过生物信息学的手段对OLR1蛋白理化性质、亚细胞定位、信号肽位点、蛋白高级结构等进行预测,并通过对不同物种O... [目的]研究OLR1基因与贵州黑山羊和黔北麻羊繁殖率之间的关系,为研究OLR1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。[方法]通过生物信息学的手段对OLR1蛋白理化性质、亚细胞定位、信号肽位点、蛋白高级结构等进行预测,并通过对不同物种OLR1氨基酸序列进行同源性分析,构建系统发育进化树;采用RT-qPCR的方法检测OLR1基因在单羔和多羔贵州黑山羊和黔北麻羊性腺轴各组织中的表达量。[结果]OLR1基因编码275个氨基酸,理论pi值为6.37,OLR1是一种主要由α-螺旋卷曲构成的不具有信号肽的不稳定亲水性蛋白;与其他动物相比,山羊OLR1与反刍动物绵羊和牛的遗传距离最近。qPCR结果显示:OLR1基因在贵州黑山羊及黔北麻羊下丘脑、输卵管、垂体、子宫和卵巢组织中均有表达。在单羔组贵州黑山羊下丘脑、子宫、卵巢、垂体中的表达量均极显著高于多羔组(P<0.01),在输卵管中的表达量高于多羔组,但二者间差异不显著(P>0.05)。在单羔组黔北麻羊下丘脑、垂体、卵巢中的表达量均极显著高于多羔组(P<0.01);在输卵管中的表达量高于多羔组,在子宫中的表达量低于多羔组,但二者间差异不显著(P>0.05)。[结论]OLR1基因表达量与贵州黑山羊和黔北麻羊的繁殖性状呈负相关,可作为影响贵州本地山羊繁殖性能的重要候选基因。 展开更多
关键词 贵州黑山羊 黔北麻羊 性腺轴 OLR1基因 生物信息学 繁殖性状
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黔北麻羊的肉用性能和肉质特性研究 被引量:57
3
作者 罗卫星 张启林 +1 位作者 穆林 李洪 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期1706-1710,共5页
为探索黔北麻羊的肉用性能和肉质特性,以更好地服务于黔北麻羊的保种、选育和产业化生产,对10只黔北麻羊的肉用性能和肉质特性进行了测定。结果表明,黔北麻羊的平均屠宰率为41.37%,净肉率为30.45%;羊肉水分含量为74.42%,脂肪含量为10.5... 为探索黔北麻羊的肉用性能和肉质特性,以更好地服务于黔北麻羊的保种、选育和产业化生产,对10只黔北麻羊的肉用性能和肉质特性进行了测定。结果表明,黔北麻羊的平均屠宰率为41.37%,净肉率为30.45%;羊肉水分含量为74.42%,脂肪含量为10.50%,蛋白质含量为20.78%;肌肉干物质中必需氨基酸含量为280.50 mg/g,非必需氨基酸含量为443.52 mg/g,总氨基酸含量为727.14 mg/g;矿物质含量丰富。 展开更多
关键词 黔北麻羊 肉质特性 氨基酸 矿物质
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贵州白山羊和黔北麻羊TFAM基因部分外显子多态性研究 被引量:4
4
作者 谢海强 杨永强 +5 位作者 宋桃伟 孙岩岩 刘彬 罗卫星 张依裕 刘若余 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期138-140,163,F0003,共5页
利用黔北麻羊和贵州白山羊构建品种DNA池,设计1对引物分别扩增其TFAM基因第2外显子及第1内含子部分序列。PCR产物纯化后进行双向测序,DNAStar和BLAST分析确定多态性位点。利用生物信息学软件分析SNPs位点对TFAM基因RNA二级结构和TFAM蛋... 利用黔北麻羊和贵州白山羊构建品种DNA池,设计1对引物分别扩增其TFAM基因第2外显子及第1内含子部分序列。PCR产物纯化后进行双向测序,DNAStar和BLAST分析确定多态性位点。利用生物信息学软件分析SNPs位点对TFAM基因RNA二级结构和TFAM蛋白二级、三级结构的影响。结果表明:在羊TFAM基因中筛选到5个SNPs:T1005C、G1099C、A1130C、G1164C、T1287C,其中T1005C为同义突变,G1099C为错义突变,导致编码的甘氨酸(Gly)变为半胱氨酸(Cys);A1130C、G1164C、T1287C 3个突变位点均位于内含子区。SNPs位点对TFAM基因RNA二级结构和TFAM蛋白结构有一定影响。 展开更多
关键词 TFAM SNPS 肌内脂肪沉积 黔北麻羊 贵州白山羊
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GHSR基因多态性与黔北麻羊生长性状关联性分析 被引量:4
5
作者 刘彬 宋桃伟 +2 位作者 罗卫星 蔡惠芬 孙岩岩 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第22期161-165,共5页
为了将GHSR基因应用于山羊生长性状的标记辅助选择中,利用PCR-SSCP技术分析了黔北麻羊生长激素促分泌素受体GHSR基因外显子1、2、3’UTR区及5’UTR区的多态性及其与黔北麻羊生长性状的关联。结果表明,在GHSR基因外显子2和3’UTR区各检测... 为了将GHSR基因应用于山羊生长性状的标记辅助选择中,利用PCR-SSCP技术分析了黔北麻羊生长激素促分泌素受体GHSR基因外显子1、2、3’UTR区及5’UTR区的多态性及其与黔北麻羊生长性状的关联。结果表明,在GHSR基因外显子2和3’UTR区各检测到2个SNP位点G996A和T1424C,其中G996A位点为错义突变,氨基酸由甘氨酸变为丝基酸,表现为3种基因型,分别命名为GG、GA和AA;外显子1和5’UTR区未发现多态位点。进一步将G996A位点与生长性状进行关联性分析,发现GG和GA基因型个体的体重显著高于AA基因型个体,胸深显著低于AA基因型个体。初步推断GHSR基因G996A位点是非常有价值的辅助选择标记,可为黔北麻羊生长性状方向选择提供理论依据。 展开更多
关键词 黔北麻羊 GHSR基因 单核苷酸多态性 生长性状
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黔北麻羊MSTN基因的多态性分析 被引量:2
6
作者 冯会利 田兴贵 +2 位作者 朱红刚 主性 刘若余 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第10期131-133,共3页
为给黔北麻羊品种遗传资源的保护及进一步选育提供科学依据,利用BsmAI、MspI、EcoRI、MvaI、XmnI、MnII等6种限制性内切酶对黔北麻羊MSTN基因部分内含子1、2和外显子2进行PCR-RFLP多态性分析。结果表明:在扩增的MSTN基因1 241bp序列中含... 为给黔北麻羊品种遗传资源的保护及进一步选育提供科学依据,利用BsmAI、MspI、EcoRI、MvaI、XmnI、MnII等6种限制性内切酶对黔北麻羊MSTN基因部分内含子1、2和外显子2进行PCR-RFLP多态性分析。结果表明:在扩增的MSTN基因1 241bp序列中含有BsmAI、EcoRI、MvaI和MnII 4个酶切位点,但均不具有多态性;未发现MspI和XmnI酶切位点。 展开更多
关键词 黔北麻羊 MSTN基因 PCR-RFLP 多态性
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黔北麻羊CTSK、FN1基因生物信息学分析及其在性腺轴中的表达 被引量:3
7
作者 赵佳福 周明帅 +2 位作者 徐畅 杨秀远 陈祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期854-860,共7页
【目的】研究组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)和纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)基因与黔北麻羊繁殖率之间的相互关系,为研究CTSK、FN1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。【方法】通过生物信息学方法分析黔北麻羊CTSK、FN1蛋白... 【目的】研究组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)和纤维连接蛋白1(Fibronectin 1,FN1)基因与黔北麻羊繁殖率之间的相互关系,为研究CTSK、FN1基因调控山羊卵泡发育的分子机制提供参考。【方法】通过生物信息学方法分析黔北麻羊CTSK、FN1蛋白理化性质、亚细胞定位、信号肽位点和蛋白高级结构,并进行氨基酸同源性分析,构建系统发育进化树;采用荧光定量PCR法检测CTSK、FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊性腺轴(下丘脑、垂体、子宫、输卵管、卵巢)中的表达量。【结果】CTSK、FN1基因分别编码330和2478个氨基酸,理论PI值分别为8.82和5.37,CTSK是一种具有信号肽的稳定亲水性蛋白,而FN1是一种具有信号肽的不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位结果说明:CTSK蛋白可能主要在细胞外和内质网中发挥生物学作用,而FN1蛋白可能主要在细胞核中发挥生物学作用;高级结构预测结果显示,CTSK和FN1蛋白均主要由无规则卷曲构成;与其他动物相比,黔北麻羊CTSK、FN1基因均与反刍动物绵羊及牛的亲缘关系最近。qPCR分析表明:CTSK和FN1基因在单羔、多羔黔北麻羊下丘脑、垂体、子宫、输卵管和卵巢组织中均有表达,与单羔组相比,多羔组CTSK基因在卵巢、下丘脑、子宫中的表达量均极显著下调(P<0.01),而FN1基因在下丘脑和子宫中的表达均极显著上调(P<0.01),在卵巢中显著上调(P<0.05)。【结论】CTSK基因表达量与黔北麻羊的繁殖性状呈负相关,FN1基因则呈正相关,CTSK和FN1基因均是影响黔北麻羊繁殖性能的重要候选基因。 展开更多
关键词 黔北麻羊 性腺轴 CTSK基因 FN1基因 生物信息学
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INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊不同组织的表达研究 被引量:3
8
作者 张艳 敖叶 +4 位作者 周志楠 韦仕南 陈祥 洪磊 宋俊伟 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期62-66,72,共6页
为探究抑制素(Inhibin,INH)α亚基(INHA)和βA亚基(INHBA)基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平及初步探明其对山羊产羔性状的影响,本实验以单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑和卵巢组织并提取总R... 为探究抑制素(Inhibin,INH)α亚基(INHA)和βA亚基(INHBA)基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平及初步探明其对山羊产羔性状的影响,本实验以单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采集子宫、输卵管、垂体、下丘脑和卵巢组织并提取总RNA,通过qRT-PCR技术对INHA、INHBA基因mRNA在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平进行检测。结果表明:INHA、INHBA基因在单、多羔黔北麻羊卵巢组织中的表达量高于其他组织(P<0.01),在多羔组黔北麻羊卵巢中的表达量高于单羔组(P<0.01),INHA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>垂体>子宫>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>垂体>下丘脑>输卵管>子宫;INHBA基因在单羔黔北麻羊5个组织的表达量依次为:卵巢>输卵管>子宫>垂体>下丘脑,在多羔黔北麻羊5个组织中的表达量依次为:卵巢>子宫>输卵管>垂体>下丘脑。结果提示,INHA、INHBA基因主要调控单、多羔黔北麻羊母羊的卵巢组织,本研究为进一步探讨INHA、INHBA基因对山羊繁殖性能的影响机制及基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 INHA基因 INHBA基因 黔北麻羊 实时荧光定量PCR
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黔北麻羊GHSR基因外显子多态性及其与体重体尺的关联分析 被引量:1
9
作者 李达 宋桃伟 +2 位作者 罗卫星 韦国渠 赵英 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第11期122-125,共4页
为给山羊品种的选育和种质鉴定提供理论依据,以黔北麻羊为试验对象,采用DNA池结合PCR产物直接测序及PCR-SSCP技术对GHSR基因进行单核苷酸多态性检测。结果表明:在黔北麻羊GHSR基因外显子2处检测到1个同义位点G200A,氨基酸由甘氨酸变为... 为给山羊品种的选育和种质鉴定提供理论依据,以黔北麻羊为试验对象,采用DNA池结合PCR产物直接测序及PCR-SSCP技术对GHSR基因进行单核苷酸多态性检测。结果表明:在黔北麻羊GHSR基因外显子2处检测到1个同义位点G200A,氨基酸由甘氨酸变为丝氨酸,表现为3种基因型,分别命名为GG、GA和AA,其频率分别为0.507 4、0.408 0和0.084 6,等位基因G、A频率分别为0.711 4和0.288 6。χ2检验表明,黔北麻羊GHSR基因G200A位点分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。基因型与体重体尺的关联分析显示,GG和GA基因型个体的体重显著高于AA基因型个体,胸深显著小于AA基因型个体(P<0.05),而其余5个指标差异不显著(P>0.05)。 展开更多
关键词 黔北麻羊 GHSR基因 单核苷酸多态性 体重
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黔北麻羊种质特性研究初报 被引量:35
10
作者 罗卫星 史忠辉 +1 位作者 刘贞德 杨文君 《山地农业生物学报》 2010年第5期466-470,共5页
通过对黔北麻羊的来源与变化、分布地的生态环境特征、体型外貌、生理指标、生产性能、繁殖性能的研究,并与贵州白山羊、贵州黑山羊相关性能进行比较,结果表明:黔北麻羊在其分布地的生境特征、体型外貌、生理指标、生产性能、繁殖性能... 通过对黔北麻羊的来源与变化、分布地的生态环境特征、体型外貌、生理指标、生产性能、繁殖性能的研究,并与贵州白山羊、贵州黑山羊相关性能进行比较,结果表明:黔北麻羊在其分布地的生境特征、体型外貌、生理指标、生产性能、繁殖性能方面具有特点和特色,是一种比较独特的遗传资源。 展开更多
关键词 黔北麻羊 种质特性 初报
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黔北麻羊RERGL基因cDNA克隆与生物信息学分析 被引量:1
11
作者 蔡惠芬 陈志 +3 位作者 罗卫星 刘若余 张依裕 石照应 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第15期3362-3365,共4页
选择与羊同源性较高的牛RERGL基因组序列设计特异性引物,提取黔北麻羊脾脏总RNA,通过RT-PCR技术对RERGL基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,成功克隆了黔北麻羊RERGL基因,其cDNA序列646 bp,GenBank登录号JN 671919,编码205个氨基酸... 选择与羊同源性较高的牛RERGL基因组序列设计特异性引物,提取黔北麻羊脾脏总RNA,通过RT-PCR技术对RERGL基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,成功克隆了黔北麻羊RERGL基因,其cDNA序列646 bp,GenBank登录号JN 671919,编码205个氨基酸。生物信息学分析表明,黔北麻羊RERGL基因蛋白二级结构α-螺旋占40.68%,延伸链占16.18%,无规则卷曲占43.14%;没有跨膜螺旋结构域且没有糖基化位点。 展开更多
关键词 黔北麻羊 RERGL基因 克隆 生物信息学分析
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RERG基因多态性与黔北麻羊生长性状的相关性研究 被引量:1
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作者 蔡惠芬 陈志 +3 位作者 罗卫星 刘若余 张依裕 宋桃伟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期152-154,共3页
以黔北麻羊为研究对象,利用PCR-SSCP和直接测序技术,对RERG基因的第3、4外显示和部分第5外显子进行多态性检测,结果在第3外显子处发现了1个SNP(C264A),进一步将该SNP位点与生长性状进行关联分析,结果表明,AB型个体的体重、体高、体长、... 以黔北麻羊为研究对象,利用PCR-SSCP和直接测序技术,对RERG基因的第3、4外显示和部分第5外显子进行多态性检测,结果在第3外显子处发现了1个SNP(C264A),进一步将该SNP位点与生长性状进行关联分析,结果表明,AB型个体的体重、体高、体长、胸围、胸深、胸宽、管围均大于AA型和BB型个体。AA型和BB型个体的体重、体高、胸围与AB型个体差异极显著,AA型个体与BB型个体的体长差异显著,AA型个体与AB型个体的体长差异极显著。研究显示,RERG基因对黔北麻羊的生长有一定影响。 展开更多
关键词 RERG基因:黔北麻羊 SNP
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山羊腺苷单磷酸脱氨酶1基因启动子区单核苷酸多态性研究 被引量:1
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作者 王德凤 杨永强 韩勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期127-132,共6页
为筛选腺苷单磷酸脱氨酶1(adenosine monophosphate deaminase 1,AMPD1)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)及研究其对启动子功能元件的影响,试验选择小香羊、黔北麻羊、努比山羊构建不同DNA池,直接测序结合BLAST筛选SNP位点。结果表明,AM... 为筛选腺苷单磷酸脱氨酶1(adenosine monophosphate deaminase 1,AMPD1)基因启动子区单核苷酸多态性(SNP)及研究其对启动子功能元件的影响,试验选择小香羊、黔北麻羊、努比山羊构建不同DNA池,直接测序结合BLAST筛选SNP位点。结果表明,AMPD1基因启动子区存在5个SNPs位点,分别为:T-614A、G-326A、G-309A、T-287C和T-165C。生物信息学软件预测得到AMPD1基因核心启动子区和转录因子结合位点,SNPs位点导致9个转录因子结合位点消失,而产生7个新的转录因子结合位点。AMPD1基因RNA二级结构在突变后显著改变,但未检测到CpG岛区域。 展开更多
关键词 腺苷单磷酸脱氨酶1 单核苷酸多态性 启动子 小香羊 黔北麻羊 努比山羊
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紫花苜蓿和黑麦草混合青贮饲料在黔北麻羊瘤胃体外发酵的产气量及有机物消化率研究 被引量:3
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作者 莘海亮 吴文旋 +4 位作者 乔艳龙 李凌云 陈胜昌 张森 刘晓东 《贵州畜牧兽医》 2019年第6期5-8,共4页
为研究不同青贮时间对青贮饲料品质的影响,试验将紫花苜蓿和黑麦草按照70∶30质量比例混合青贮,采用黔北麻羊瘤胃体外发酵法测定其在青贮第1~142 d的产气量和有机物消化率。结果:随着青贮时间的延长,青贮饲料在瘤胃内的产气量呈下降趋势... 为研究不同青贮时间对青贮饲料品质的影响,试验将紫花苜蓿和黑麦草按照70∶30质量比例混合青贮,采用黔北麻羊瘤胃体外发酵法测定其在青贮第1~142 d的产气量和有机物消化率。结果:随着青贮时间的延长,青贮饲料在瘤胃内的产气量呈下降趋势;潜在产气量和有机物消化率以42、142 d较低,与第1 d相比潜在产气量分别下降21.42%、20.29%,有机物消化率分别下降20.81%、16.31%,差异显著(P<0.05);快速产气部分以42 d最高(1.28 mL),差异显著(P<0.05);慢速产气部分以21 d最高(45.34 mL),差异显著(P<0.05)。结果表明:紫花苜蓿和黑麦草混合青贮饲料在瘤胃内的产气量和有机物消化率随着青贮时间的延长呈下降趋势,其品质略有下降,但延长了饲料的保存期。综合分析,建议在青贮21 d后应尽早饲喂。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 黑麦草 混合青贮 体外发酵 黔北麻羊
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贵州本地山羊线粒体转录因子B2基因5′调控区SNP筛查与生物信息学分析
15
作者 谢海强 刘若余 +1 位作者 龚俞 焦仁刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期183-188,共6页
试验旨在筛选线粒体转录因子B2(mitochondrial transcription factor B2,TFB2M)基因启动子区SNP,并研究其对启动子功能元件的影响。选择贵州本地优良品种黔北麻羊、贵州白山羊及贵州黑山羊3种山羊构建不同DNA池,直接测序筛选SNP位点。TF... 试验旨在筛选线粒体转录因子B2(mitochondrial transcription factor B2,TFB2M)基因启动子区SNP,并研究其对启动子功能元件的影响。选择贵州本地优良品种黔北麻羊、贵州白山羊及贵州黑山羊3种山羊构建不同DNA池,直接测序筛选SNP位点。TFB2 M基因5′调控区存在4个SNPs位点,分别为:G-601C、C-381A、C-286T和G-283T。生物信息学软件预测得到TFB2 M基因核心启动子区和CpG岛,SNP位点导致附近大量转录因子新位点产生和原来结合位点消失,但并不改变CpG岛大小。TFB2 M基因5′调控区存在4个对启动子功能元件有较大影响的SNPs位点。本研究结果为进一步确定TFB2 M基因启动子功能奠定基础。 展开更多
关键词 线粒体转录因子B2基因 SNP 启动子 黔北麻羊 贵州白山羊 贵州黑山羊
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TGFβ2和PPP3CA基因在黔北麻羊性腺轴组织表达及对卵巢颗粒细胞的调控研究 被引量:7
16
作者 敖叶 陈祥 +6 位作者 周志楠 骆金红 韦仕南 张艳 惠茂茂 吴雨 杨沛方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2699-2709,共11页
旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多... 旨在对转录组测序中单羔组对多羔组TGFβ2和PPP3CA基因的上、下调结果进行验证,并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞的调控机制。本研究以单、多羔黔北麻羊母羊为试验对象。通过RT-qPCR技术检测TGFβ2与PPP3CA基因在单、多羔黔北麻羊性腺轴中的表达水平;构建目的基因真核表达载体。培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞,并利用脂质体转染法将pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重组质粒导入卵巢颗粒细胞,检测培养基中雌二醇(E2)、孕酮(P4)的浓度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法检测TGFβ2、PPP3CA基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响。随后,利用RT-qPCR从细胞水平检测超表达TGFβ2、PPP3CA基因对TGFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表达的影响。RT-qPCR结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因在被检测的组织中均有表达,且在单羔组中的表达量普遍高于多羔组;免疫荧光法证实,所培养的细胞为黔北麻羊卵巢颗粒细胞;TGFβ2与PPP3CA基因真核表达质粒导入细胞后,在极显著提高TGFβ2与PPP3CA基因表达的同时,能够极显著地抑制卵巢颗粒细胞中FSHR、GnRHR、BMP4、TIMP3基因的表达(P<0.01)。细胞增殖与凋亡结果显示,TGFβ2与PPP3CA基因能够促进颗粒细胞凋亡,抑制其增殖。酶联免疫吸附试验结果表明,TGFβ2与PPP3CA基因能够显著促进E2的分泌,但对P4的分泌无显著影响。本研究成功构建了TGFβ2、PPP3CA基因真核表达载体,荧光定量结果表明,超表达TGFβ2、PPP3CA基因抑制了繁殖相关基因的表达,提示TGFβ2、PPP3CA基因对山羊繁殖相关基因表达有一定的影响。为进一步研究TGFβ2、PPP3CA基因对黔北麻羊繁殖力的影响提供基础数据。 展开更多
关键词 黔北麻羊 TGFβ2基因 PPP3CA基因 卵巢颗粒细胞 差异表达
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黔北麻羊SRD5A2基因干扰载体构建及其对产羔相关基因表达的影响 被引量:7
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作者 洪磊 陈祥 +3 位作者 唐文 周志楠 段志强 赵佳福 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2980-2990,共11页
旨在探究SRD5 A2基因对山羊产羔性状相关基因表达的影响。本研究选择健康的(2~3岁)黔北麻羊经产母羊3只,体重约32 kg,采集卵巢组织并成功培养卵巢颗粒细胞。通过在线软件设计SRD 5A2基因的4对siRNA干扰序列和1对阴性对照序列,连接pGPH1/... 旨在探究SRD5 A2基因对山羊产羔性状相关基因表达的影响。本研究选择健康的(2~3岁)黔北麻羊经产母羊3只,体重约32 kg,采集卵巢组织并成功培养卵巢颗粒细胞。通过在线软件设计SRD 5A2基因的4对siRNA干扰序列和1对阴性对照序列,连接pGPH1/GFP/Neo载体后,将构建成功的干扰载体转染至黔北麻羊卵巢颗粒细胞。利用qRT-PCR方法筛选出干扰效率最佳的载体,检测其对SRD 5A2基因表达的影响。运用qRT-PCR检测沉默SRD 5A2基因对山羊产羔性状相关基因骨形态发生蛋白15(BMP 15)、生长分化因子9(GDF 9)、骨形态发生蛋白1B(BMPR-1B)和卵泡刺激素β亚基(FSHβ)表达的影响。结果表明,本试验在培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞的基础上,成功构建了黔北麻羊SRD 5A2基因的干扰载体,并筛选出shRNA-SRD5A2-1干扰效果最佳(P<0.01);抑制SRD 5A2基因表达后,qRT-PCR检测产羔性状相关基因BMP 15、BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量均显著降低,BMP 15的表达量极显著低于shRNA-NC对照组(P<0.01),BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量显著低于shRNA-NC对照组(P<0.05)。本研究成功构建了SRD 5A2基因干扰载体并转染至卵巢颗粒细胞,发现体外沉默SRD 5A2基因可抑制产羔性状相关基因的表达,提示SRD 5A2基因与黔北麻羊产羔性状密切相关,本试验结果为进一步研究SRD 5A2基因对黔北麻羊产羔性状的调控机制提供了基础。 展开更多
关键词 黔北麻羊 SRD5 A2基因 RNA干扰 卵巢颗粒细胞 产羔性状
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黔北麻羊TYR基因多态性及生物信息学分析 被引量:4
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作者 翁吉梅 罗铮 +4 位作者 徐伟 封竣琪 黄兰 蔡惠芬 罗卫星 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期60-64,共5页
为研究黔北麻羊毛色形成的遗传机制,本实验对黔北麻羊哺乳动物酪氨酸酶(TYR)基因外显子区域运用混合DNA池结合PCR产物直接测序方法进行多态性分析,在TYR基因外显子区域共筛选出5个SNPs,分别为Exon1-G617A、Exon1-G685T、Exon3-C1236T(As... 为研究黔北麻羊毛色形成的遗传机制,本实验对黔北麻羊哺乳动物酪氨酸酶(TYR)基因外显子区域运用混合DNA池结合PCR产物直接测序方法进行多态性分析,在TYR基因外显子区域共筛选出5个SNPs,分别为Exon1-G617A、Exon1-G685T、Exon3-C1236T(Asn-Lys)、Exon5-C1578T(Gly-Glu)、Exon5-T1862C;进而利用生物信息学分析软件对PCR扩增所获序列进行m RNA二级结构及蛋白质二级结构和三级结构分析,发现Exon3-C1236T(Asn-Lys)、Exon5-C1578T(Gly-Glu)引起m RNA二级结构的改变,其中Exon1-G685T、Exon3-C1236T(Asn-Lys)、Exon5-T1862C突变导致其m RNA二级结构最小自由能增大,即二级结构稳定性降低,其错义突变位点Exon3-C1236T(Asn-Lys)、Exon5-C1578T(Gly-Glu)均引起蛋白质二级结构和三级结构的改变。 展开更多
关键词 黔北麻羊 TYR基因 SNPS 生物信息学
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CTSD对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制及功能分析 被引量:4
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作者 周志楠 陈祥 +4 位作者 张艳 杨沛方 惠茂茂 唐文 洪磊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1278-1292,共15页
旨在分析组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制并初步探究其对产羔性状的影响机理。本研究以36周龄、健康、多胎黔北麻羊母羊(n=5)为研究对象,屠宰后采集卵巢组织分离培养卵泡颗粒细胞,构建真核表达载体pEGFP... 旨在分析组织蛋白酶D(cathepsin D,CTSD)对黔北麻羊卵泡颗粒细胞的调控机制并初步探究其对产羔性状的影响机理。本研究以36周龄、健康、多胎黔北麻羊母羊(n=5)为研究对象,屠宰后采集卵巢组织分离培养卵泡颗粒细胞,构建真核表达载体pEGFP-N3-CTSD,将其导入细胞后在转录与翻译水平验证真核表达效率;通过CCK-8法检测在不同时间段内重组质粒对颗粒细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测重组质粒对颗粒细胞凋亡及周期的影响;随后使用RT-qPCR法在细胞水平检测重组质粒对细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3,细胞周期相关因子Cyclin A1、Cyclin D2、Cyclin E mRNA表达水平的影响,最后,以多胎性状候选基因BMPR-IB、FSHR、INHA为功能基因,在转录与翻译水平上验证重组质粒对其mRNA与蛋白表达的影响。双酶切及测序结果证实,黔北麻羊CTSD基因真核表达载体pEGFP-N3-CTSD构建成功,且在转录与翻译水平极显著上调CTSD在颗粒细胞中的表达(P<0.01);细胞增殖检测结果表明,颗粒细胞中上调CTSD后能够抑制细胞的增殖,其中在12、24、48、72 h对细胞增殖的抑制效率达到极显著(P<0.01);细胞凋亡检测结果表明,CTSD的过表达能够极显著促进颗粒细胞的凋亡(P<0.01),且能够显著下调细胞抗凋亡基因Bcl-2的表达(P<0.05),极显著上调细胞促凋亡相关基因Bax、Caspase-3的表达(P<0.01);此外,细胞周期检测发现,pEGFP-N3-CTSD在转染后能够极显著上调G0/G1期与G2/M期的细胞数量(P<0.01),极显著下调S期细胞数量(P<0.01),同时能够极显著提高细胞周期相关因子Cyclin A1的表达(P<0.01),极显著降低Cyclin D2的表达(P<0.01)。RT-qPCR及Western blot检测结果表明,在颗粒细胞中上调CTSD后,能够极显著的下调多胎性状候选基因与蛋白BMPR-IB、FSHR、INHA在转录和翻译水平中的表达(P<0.01)。本研究发现,CTSD的高表达能抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,改变颗粒细胞的周期进程;还能改变细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3与细胞周期相关因子Cyclin A1、Cyclin D2、Cyclin E的表达;同时也能够极显著降低颗粒细胞中多胎性状候选基因与蛋白BMPR-IB、FSHR、INHA的表达量(P<0.01)。这提示,CTSD可能通过改变细胞水平相关因子的表达量来调控颗粒细胞的生物学行为以及影响山羊多胎性状候选基因的表达进而间接的成为影响山羊产羔性状的重要因子,本研究为进一步探明CTSD对山羊产羔性状调控机理及对颗粒细胞的影响机制奠定基础。 展开更多
关键词 CTSD 黔北麻羊 颗粒细胞 调控机制 产羔性状
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黔北麻羊不同组织中FABP1、FABP3基因表达水平的研究 被引量:11
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作者 艾锦新 龙安炬 +1 位作者 罗卫星 蔡惠芬 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期63-67,73,共6页
本实验旨在探究肝脏型脂肪酸结合蛋白(FABP1)和心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因在黔北麻羊不同组织中mRNA的表达水平。以6月龄、1周岁和1.5周岁黔北麻羊公、母羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测黔北麻羊不同性别和不同生长时... 本实验旨在探究肝脏型脂肪酸结合蛋白(FABP1)和心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)基因在黔北麻羊不同组织中mRNA的表达水平。以6月龄、1周岁和1.5周岁黔北麻羊公、母羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测黔北麻羊不同性别和不同生长时期心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、胸腺、下丘脑、十二指肠、皮下脂肪及背最长肌等11个组织中FABP1和FABP3基因的mRNA相对表达量。结果显示:FABP1、FABP3基因mRNA在黔北麻羊的11个组织中广泛表达,FABP1基因在肝脏中表达量最高,其次是十二指肠和肺脏,FABP3基因在心脏中表达量最高,其次是背最长肌和肾脏,其余各组织表达量较低。黔北麻羊FABP1、FABP3基因mRNA的表达量受性别、生长时期的影响,且存在一定的显著性差异,不同性别FABP1、FABP3基因mRNA的表达量母羊普遍高于公羊,不同时期FABP1、FABP3基因mRNA的表达量随月龄的增加总体呈小幅上升趋势。本研究结果为进一步研究FABP1、FABP3基因调控山羊脂质代谢和肉质性状提供理论依据。 展开更多
关键词 黔北麻羊 FABP1基因 FABP3基因 组织表达
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