启膈散对食管癌Eca-9706细胞株诱导血管生成的影响

目的:研究启膈散对食管癌血管生成的影响。方法:MTT法检测启膈散醇提物对人食管鳞癌Eca-9706细胞株生长抑制作用,收集其IC50浓度的Eca-9706细胞条件培养基,以鸡胚绒毛尿囊膜模型、MTT法、迁移试验和小管形成试验观察条件培养基对血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的影响,ELISA法检测Eca-9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清VEGF、IL-6含量。结果:启膈散醇提物可明显抑制Eca-9706细胞增殖,具一定量效关系,IC50为96μg/m L。Eca-9706细胞条件培养基显著增加CAM生成的血管总面积,促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成;启膈散醇提物可减少Eca-9706细胞条件培养下CAM血管生成,人脐静脉内皮细胞增殖和小管形成,但增加内皮细胞迁移。启膈散醇提物可减少内皮细胞分泌IL-6和VEGF,但在Eca-9706细胞却使之增加。结论:启膈散醇提物可抑制Eca-9706细胞所致血管生成、内皮细胞增殖和小管形成,增加内皮细胞迁移,减少内皮细胞分泌VEGF和IL-6。

启膈散协同顺铂抑制食管癌EC9706细胞生长与miR-21的关系

目的:观察启膈散含药血清联合顺铂对人食管癌细胞EC9706的增殖效应,从miR-21探讨其作用机制。方法:制备启膈散含药血清,MTT法筛选其最佳作用浓度;PCR检测miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA的表达情况;Western-blot检测蛋白PDCD4、PTEN的表达水平。结果:5%含药血清的浓度作用效果最为显著(q>1)。与5%对照血清组比较,除5%含药血清PDCD、PTEN mRNA和0.5μg/m L顺铂组的PTEN mRNA表达量下降外,其余各组的miR-21、PDCD4 mRNA和PTEN mRNA表达均升高(P<0.05);顺铂联合含药血清后,两组miR-21表达和联合高浓度顺铂组的PDCD4 mRNA均比其单用下降(P<0.05),而两组PTEN mRNA和联合低浓度组的PDCD4 mRNA的表达则升高(P<0.05)。与对照组相比,各组PDCD4蛋白表达量升高P<0.05;高浓度顺铂联合含药血清组比单用高顺铂组PDCD4蛋白表达量升高(P<0.05),低浓度顺铂的两组变化不明显(P>0.05);两个浓度顺铂联合含药血清时PTEN的表达量均高于单独使用顺铂(P<0.05)。结论:启膈散能够增加EC9706对顺铂的敏感性,可能是通过miR-21与其调控的下游基因PDCD4与PTEN共同参与完成。

启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响

目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制。方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达。结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875μg/m L,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响。结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡。

启膈散通过STAT3信号通路抑制EC-9706细胞移植瘤的生长

目的：研究启膈散对食管癌EC-9706细胞移植瘤抑制作用,并从STAT3信号通路探讨其机理。方法：收集对数期生长的EC-9706细胞,皮下注射于裸鼠右前腋下,8 d后,随机分为模型组、抑制剂组、启膈散组、抑制剂＋启膈散组,每2 d测量大小,3周后处死,摘取移植瘤,称重;移植瘤组织H.E染色显微镜下观察一般病理;免疫组化检测移植瘤微血管;Western blot检测移植瘤中蛋白表达。结果：在种植肿瘤第7天,可见有粟米粒大小肿瘤产生;在种植肿瘤第14天,模型组肿瘤大小增速快于用药各组,抑制剂组、启膈散组、启膈散＋抑制剂组肿瘤成长相近。与模型组比较,用药组移植瘤的重量明显变轻（P〈0.05）。镜下可见各组肿瘤细胞大小形态不一,异型性明显,有病理性核分裂像,部分肿瘤区域中出现肿瘤组织坏死,并有少部分淋巴细胞浸润,用药组肿瘤组织坏死区增大。与模型组相比,用药各组CD34表达面积明显下降（P〈0.05）。与模型组比,除启膈散＋抑制剂组的STAT3下降不明显外,其它均下降明显（P〈0.05）;与抑制剂组相比,仅启膈散和启膈散＋抑制剂组的STAT3蛋白表达增高（P〈0.05）。结论：启膈散能有效抑制移植瘤的生长,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

中药启膈散免疫调节作用的体外实验研究

目的:探讨启膈散抗肿瘤作用的机制,为启膈散治疗肿瘤提供客观依据。方法:将实验细胞分为启膈散组、刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组和空白对照组,ConA组及LPS组分别给予ConA、LPS5μg/ml,空白对照组不给药,采用MTT法观察50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.63、0.78mg/ml启膈散水提取物对小鼠脾细胞体外增殖的促进作用,50.00、5.00、0.50mg/ml时对小鼠脾细胞分泌IL-2的影响;50.00、5.00、0.50mg/ml时对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响;50.00、5.00、0.50mg/ml时对NK细胞肿瘤细胞杀伤活性的影响。结果:启膈散显著刺激小鼠脾细胞增殖,且存在明显的量效关系;能显著提高小鼠脾细胞分泌IL-2的活性;促进小鼠单核细胞分泌TNF-α作用显著;可提高NK细胞对靶细胞的杀伤率。结论:启膈散的抗肿瘤活性可能与其免疫调节功能有关。

启膈散联合顺铂对与成纤维细胞共培养的食管癌EC9706细胞生长的影响

目的研究与成纤维细胞共培养条件下的食管癌细胞对顺铂敏感性变化及启膈散干预作用。方法建立食管癌细胞和成纤维细胞共培养方法,MTT法检测顺铂、启膈散、或两者联合应用对细胞生长的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果在顺铂相同浓度作用下,共培养条件下食管癌EC9706组OD值明显高于单独培养食管癌EC9706组(P<0.05);共培养条件下顺铂的IC50值明显高于单独培养食管癌EC9706组(P<0.05);不同浓度启膈散乙酸乙酯提取物对共培养条件下食管癌EC9706细胞有明显的抑制作用,呈浓度剂量依赖性,与顺铂组比较,联合用药组OD值明显减少,联合用药有协同作用趋势(P<0.05);与单独培养EC9706组比较,共培养条件组总凋亡率下降,S期比例增加(P<0.05);与共培养组比较,顺铂组明显使EC9706早期凋亡率增加,而启膈散组,联合用药组均使EC9706晚期凋亡率增加(P<0.05);顺铂组、启膈散组及联合用药组明显降低了EC9706细胞G0/G1期的比例,而增加了EC9706细胞S期的比例(P<0.05),其中以联合用药组作用最明显(P<0.05)。结论启膈散可抑制与成纤维细胞共培养条件下的食管癌细胞增殖、诱导凋亡,干预细胞周期,与顺铂联合应用具有一定增效作用。

启膈散治疗反流性食管炎的效果及对细胞因子的影响

目的:观察启膈散治疗反流性食管炎的效果分析及对细胞因子的影响。方法:选取2016年1月~2016年6月我院消化科门诊及病房收治的92例反流性食管炎患者,根据随机数字表,将92例患者分为观察组(n=46)和对照组(n=46)。对照组奥美拉唑肠溶胶囊治疗,观察组采用启膈散联合奥美拉唑肠溶胶囊治疗。比较两组患者临床疗效、胃镜检查总积分、细胞因子、胃肠激素、不良反应发生率及复发率。结果:观察组的总有效率(91.3%)显著高于对照组(80.4%)(P<0.05)。治疗后观察组胃镜检查总积分显著低于对照组(P<0.05)。观察组P16阳性表达率及NO水平显著低于对照组(P<0.05)。观察组血清GAS、MTL水平显著高于对照组(P<0.05)。两组患者各不良反应发生率差异无显著性(P>0.05),观察组复发率显著低于对照组(P<0.05)。结论:启膈散联合奥美拉唑肠溶片治疗反流性食管炎的效果确切,可显著改善患者临床症状,提高胃肠激素水平,值得推广。

启膈散的研究

启膈散出自《医学心悟》一书,该方组方严谨,配伍得当,多用于治疗食管类疾病且疗效确切。近年来,围绕此方的研究不断深化,临床和药理研究都取得了新进展。根据搜集的文献可以看出,启膈散的临床研究多与治疗食管相关疾病为主,尤其是对于食管癌的治疗应用相对成熟。对其他疗效确切疾病的治疗也多是与“噎膈”症状或病机相近的疾病,这对启膈散在临床应用提供了新思路。启膈散的药理学研究多以食管癌为着手点,不断发现对疾病产生作用的多条信号通路,并以此阐明作用机制。启膈散的治疗作用不单局限于食管癌,但对于治疗有效其他疾病的药理学研究却少之又少,值得进一步探索。笔者将从临床研究、药理学研究两方面对启膈散的研究进展作简要概述。

启膈散加减治疗早期贲门失弛缓症临床研究

目的应用定时吞钡试验(TBE)评价启膈散对早期贲门失弛缓症(EA)的临床疗效。方法 40例早期EA患者随机分为观察组20例,对照组20例,观察组给予启膈散加减治疗,对照组给予硝苯地平治疗,分别记录两组入组时、治疗1月、治疗3月后症状积分、最大贲门扩张宽度、1 min食管存钡高度、1 min食管存钡宽度、5 min食管存钡高度、5 min食管存钡宽度,评价两种治疗方法对EA症状及客观评价指标的改善情况。结果两组患者治疗后较治疗前症状积分、TBE客观指标均有明显改善,治疗3月后比较,观察组总有效率、症状积分、TBE客观指标(1 min存钡高度,5 min存钡高度)优于对照组。结论 TBE可作为EA诊断、治疗评估客观方法。启膈散加减治疗早期EA安全、有效、长期预后较好。

启膈散加减治疗反流性食管炎40例

目的:观察启膈散加减治疗反流性食管炎的临床疗效。方法:选取反流性食管炎患者80例,采取随机平行分组法分为观察组和对照组各40例。对照组给予雷贝拉唑钠肠溶片治疗,观察组给予启膈散加减治疗。结果:治疗后观察组GERD-HRQL症状评分降低明显,且观察组优于对照组(P<0.05);观察组总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论:启膈散加减治疗反流性食管炎疗效显著,可明显改善临床症状,提高临床疗效。

自拟健脾散结方联合化疗治疗晚期食管癌

目的:观察自拟健脾散结方联合化疗治疗晚期食管癌的临床疗效。方法:分别使用单纯PCF方案化疗(对照组28例)、自拟健脾散结方联合PCF方案化疗(治疗组32例)治疗晚期食管癌。以WHO实体瘤近期客观疗效标准与毒副反应评价标准评价。结果:治疗组有效率高于对照组,但统计学上无意义。治疗组III-IV不良反应的发生率明显低于对照组。结论:自拟健脾散结方与化疗联合应用可以减轻化疗反应,提高临床疗效。

加减启膈散治疗反流性食管炎36例观察

目的:观察加减启膈散治疗反流性食管炎的疗效。方法:72例随机分为两组各36例,治疗组口服加减启膈散,对照组口服雷贝拉唑,两组均4周为一疗程,共2个疗程。结果:治疗组治愈率72.2%、总有效率88.9%,对照组治愈率75.0%、总有效率91.7%,两组比较无统计学意义(P>0.05)。停药后6个月,复发率治疗组22.2%、对照组80.6%,两组比较有统计学意义(P<0.01)。结论:加减启膈散治疗反流性食管炎临床疗效好、复发率低。

食管癌根治术后加味启膈散的实施效果及对生存质量的影响

目的探讨食管癌根治术后加用加味启膈散的实施效果及对生存质量的影响。方法选取2017年5月—2018年9月104例食管癌患者,按照随机数字表法分成观察组(52例)与对照组(52例)。对照组采取食管癌根治术治疗,观察组采取食管癌根治术后加用加味启膈散治疗。观察2组患者生活质量评分及卡氏评分(KPS)、体质量变化。结果治疗后,观察组躯体功能、物质生活、心理功能、情感智能评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者KPS改善率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组体质量变化改善率与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论食管癌根治术后加用加味启膈散治疗具有明显效果,可促进患者康复,提高生活质量,临床应用价值高。

启膈散增加食管癌对顺铂的敏感性与LncRNA MEG3的关系研究

目的:探讨启膈散增加食管癌对化疗药物顺铂敏感性的机制及与LncRNA MEG3的关系。方法:选用人食管癌细胞株EC9706,培养后加入不同剂量的启膈散及相应浓度的启膈散联合2 mg·L^(-1)顺铂,MTT法筛选启膈散的用药剂量并考察启膈散对EC9706细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphates and tensin homologue deleted on chromosome ten gene,PTEN)蛋白表达水平;RT-PCR检测MEG3 mRNA、PTEN mRNA表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移。结果:与对照组比较,启膈散可剂量依赖性抑制EC9706细胞的增殖(P<0.05),选取50 mg·L^(-1)启膈散及50 mg·L^(-1)启膈散与2 mg·L^(-1)顺铂联用进行后续研究。与对照组及顺铂组比较,启膈散组、启膈散联合顺铂组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),PTEN蛋白表达量均显著升高(P<0.05),MEG3 mRNA表达量显著升高(P<0.01)。与对照组比较,启膈散组、顺铂组及启膈散联合顺铂组PTEN mRNA表达量显著升高(P<0.01),细胞迁移率显著降低(P<0.01)。与顺铂组比较,启膈散联合顺铂组PTEN mRNA表达量显著升高(P<0.05),细胞迁移率显著降低(P<0.01)。结论:启膈散干预EC9706细胞的增殖和迁移,促进凋亡,增加食管癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与其上调MEG3进而影响PTEN信号通路有关。

启膈散对食管癌EC9706细胞株抑制树突状细胞成熟的影响

目的观察启膈散对食管癌细胞干预树突状细胞成熟的影响。方法制备条件培养基,用Fieoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,体外诱导培养树突状细胞(Dendritic Cells,DCs),流式细胞术检测DCs表面标志物,MTT法检测淋巴细胞细胞增殖;LDH释放法检测细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)杀伤力;ELISA检测细胞因子分泌,Western blot检测STAT3蛋白表达。结果食管癌EC9706细胞条件培养基可以减少外周血单核细胞诱导的树突状细胞表达CD80、CD86、CD1a,抑制DCs刺激淋巴细胞增殖和减弱CTL的杀伤力,减少IL^(-1)2分泌,增加STAT3蛋白表达和磷酸化;与肿瘤条件培养基相比,启膈散条件培养基组DCs CD80、CD86、CD1a增加,淋巴细胞的增殖能力、CTL杀伤作用增强,IL^(-1)2分泌增加,STAT3蛋白表达和磷酸化减少。结论启膈散可以通过STAT3信号通路减弱食管癌细胞上清对树突状细胞成熟的影响。

低氧条件下启膈散与顺铂抑制食管癌细胞EC9706增殖的协同效应

目的观察低氧下启膈散和顺铂的抑制食管癌细胞增殖的协同效应,从细胞周期和凋亡探讨其机制。方法制备含药血清,MTT法检测启膈散和顺铂单用或联合应用对食管癌细胞EC9706增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果 8%、10%浓度的启膈散含药血清与1μg·ml-1顺铂联合抑制EC9706细胞增殖具有明显协同效应,Q值分别为1.18,1.25。用药各浓度与对照组相比细胞G1、G2期比率显著降低,S期显著升高(P<0.01),顺铂高浓度组、启膈散组、联合低浓度组细胞G1期比率高于顺铂低浓度组,S期比率显著低于顺铂低浓度组(P<0.05),联合高浓度组细胞G1期比率明显低于高浓度顺铂组(P<0.05)。除启膈散组外,其他用药各组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),联合高浓度组细胞凋亡率高于顺铂高、低浓度组(P<0.05),顺铂组、联合组高浓度组细胞凋亡率明显高于低浓度组(P<0.05)。结论启膈散含药血清和顺铂在抑制食管癌细胞EC9706增殖方面具有协同作用,其机理和诱导细胞凋亡有关。

食管癌EC9706细胞启膈散与六君子汤条件培养基对脐静脉内皮细胞的影响

目的:比较研究启膈散与六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法:制备药物条件培养基,MTT法检测启膈散和六君子汤条件培养基对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)增殖、迁移和小管形成的影响。ELISA法检测HUVECS培养基上清液血管内皮生长因子(VEGF)和白细胞介素-6(IL-6)含量。结果:启膈散和六君子汤可明显抑制肿瘤条件培养基引起的内皮细胞的增殖(P<0.05);抑制HUVECS小管形成(P<0.05);六君子汤组HUVECS迁移较肿瘤条件培养基组有抑制作用(P<0.05)。启膈散和六君子汤可明显抑制HUVECS细胞分泌VEGF和IL-6(P<0.01),六君子汤组优于启膈散组(P<0.05)。结论:六君子汤和启膈散均可显著抑制内皮细胞增殖、内皮细胞迁移和小管形成,但六君子汤抑制细胞分泌VEGF和IL-6作用更强。

基于网络药理学探讨启膈散治疗食管癌的作用机制

目的:基于网络药理学方法探讨启膈散治疗食管癌的可能作用机制。方法:在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及中药成分数据库(TCMID)筛选并收集启膈散的活性成分及其对应靶标。利用Uniprot数据库获取药物活性成分对应靶标的基因,并与通过人类基因组注释数据库(GeneCards)所获得的人食管癌相关基因做对比,获得启膈散与食管癌重合的潜在作用靶标基因。使用Cytoscape3.6.1软件绘制启膈散的"活性成分-作用靶标"网络图。通过String数据库获取潜在作用靶标之间的互作关系,并导入Cytoscape3.6.1软件构建靶蛋白互相作用网络图。利用DAVID数据库对启膈散治疗食管癌的潜在作用靶标进行Go分类富集分析和KEGG通路富集分析,并运行R语言得到其高级气泡图。结果:从启膈散中共得到88个候选活性成分,包括槲皮素(quercetin)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、木犀草素(luteolin)、丹参酮ⅡA(tanshinone iia)、柚皮素(naringenin)等,142个潜在作用靶标,包括RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、肿瘤抑制因子(TP53)、白细胞介素-6(IL-6)、重组人半胱天冬酶-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)等,主要通路有蛋白酪氨酸激酶/信号转导转录激活因子(Jak-STAT)、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核转录因子(NF-kappa B)、肿瘤抑制基因p53等信号通路。结论:启膈散治疗食管癌的作用机制可能与AKT1、TP53、IL-6、CASP3、VEGFA等靶标以及调节Jak-STAT、PI3K-Akt、MAPK、NF-kappa B、p53等信号通路有关。