清络通痹方调控miRNA网络干预类风湿关节炎的研究

目的:观察清络通痹方(QLT)对胶原性关节炎(CIA)小鼠miRNA网络的调控作用,探讨其干预类风湿关节炎的机制。方法:DBA/1小鼠,复制CIA模型,随机分为空白对照、CIA、QLT组,采用miRCURYTM LNA Array芯片技术筛选外周血miRNA异常表达谱,以Realtime PCR对异常变化的miRNAs进行验证,并利用多种生物信息学软件进行分析。结果:与空白对照组比较,CIA小鼠具有差异表达的miRNAs有221个;与CIA比较,QLT差异表达的miRNAs有169个。RT-PCR验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。PCR结果显示CIA中miR-143下调明显,而QLT干预可明显上调miR-143的表达水平。miR-143靶基因显著富集在VEGF、T细胞受体、MAPK信号通路等信号通路中。结论:多种miRNA的异常表达参与CIA的病理过程,QLT可能通过干预miRNA调控网络,多环节、多途径干预RA免疫、炎症、疼痛等多种病理过程,miR-143可能作为QLT治疗RA的重要环节。

清络通痹方对小鼠疼痛行为及DRG中COX-2表达和血PGE_2的影响

目的观察清络通痹方对疼痛模型和胶原关节炎(CIA)小鼠模型的疼痛行为的影响,及背根神经节(DRG)环氧合酶(COX)-2mRNA及血前列腺素E2(PGE2)含量的影响,初步探讨清络通痹方干预类风湿关节炎疼痛的作用及可能机制。方法采用热板和醋酸扭体致痛模型,分为空白对照组、塞来昔布组(30mg/kg)、清络通痹低剂量组(4.35g/kg)、中剂量组(8.70g/kg)、高剂量组(17.4g/kg),观察各组痛阈值和扭体次数的改变。DBA/1小鼠,复制CIA模型,随机分为空白对照组、模型组、清络通痹方组(8.7g/kg)及塞来昔布组(30mg/kg),观察一般情况及关节肿胀,各组机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射阈值(TWL)的变化,灌胃给药4周后,检测DRG COX-2mRNA及血清PGE2含量。结果清络通痹方使小鼠热板法致痛模型痛阈值提高、醋酸扭体法致痛模型扭体次数减少(P<0.01);可显著减轻CIA小鼠足肿胀(P<0.05),提高其MWT(P<0.01)和PWL(P<0.05)阈值,降低DRG中COX-2mRNA的表达(P<0.05)和血PGE2的含量(P<0.05)。结论清络通痹方具有一定的镇痛作用,其镇痛机制可能与抑制DRG中COX-2mRNA表达和血清中PGE2含量相关。

清络通痹方对佐剂性关节炎大鼠破骨细胞分化相关miRNA表达的影响

目的观察清络通痹方(Qingluo Tongbi Compound,QTC)对佐剂性关节炎(adjuvant induced arthritis,AIA)大鼠骨破坏相关miRNA表达的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法建立AIA大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型,应用miRNA芯片的方法初步筛选破骨细胞分化后期miRNA的异常表达谱,并采用实时定量PCR(RT-PCR)对芯片结果进行验证。制备QTC含药血清和空白血清,将破骨细胞随机分为空白组、空白血清组及QTC组,采用RT-PCR检测QTC对差异表达miRNA的影响,并应用生物信息学软件对关键性miRNA进行分析。结果与单核细胞比较,破骨样细胞分化过程中存在明显差异表达的miRNAs共211个,其中表达上调88个,表达下调123个。RT-PCR验证结果与芯片检测结果表达趋势一致。RT-PCR结果显示,QTC干预后miR-140-5p表达明显上调,生物信息学分析结果显示miR-140-5p靶基因显著富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、Ras信号通路、c AMP信号通路和Rap1信号通路等信号通路上。结论破骨样细胞分化后期存在多种miRNAs失调,QTC可能通过影响miR-140-5p的表达参与调控破骨细胞的分化。