策勒黑羊X染色体多胎性状的关联分析

为促进多胎性状策勒黑羊品种的培育,以策勒黑羊多胎性状和X染色体分子标记为对象,探究策勒黑羊多胎性状在X染色体上的遗传解析。选择100只策勒黑羊进行基因分型,利用PLINKv1.90进行质量控制,同时对X染色体上的SNP位点和策勒黑羊的多胎性状进行关联分析,选取P<0.01的SNP位点进行标记,将筛选出的SNP位点附近的基因进行注释和分析,获得X染色体多胎性的候选基因。结果表明,有14个SNPs与策勒黑羊X染色体多胎性状在全基因组范围内显著相关。共筛选出20个候选基因,对20个候选基因进行生物学功能分析,多胎性状相关联的候选基因6个,其中,FTH1基因已有文献报道是多胎性状的候选基因。

策勒黑羊FecB 突变与卵泡发育相关基因的表达水平

选择策勒黑羊BMPR-1B基因FecB突变的15只母羊,含3种基因型(基因型BB 6只,Bb 4只,bb 5只),摘取诱导发情24 h后的卵巢,提取总mRNA,采用Real-time PCR分析与卵泡发育相关的LHR、FSHR、PTGS2、GDF9、GDF5、BMP4和BMP15基因mRNA在3种基因型个体间的表达水平,以揭示策勒黑羊发生FecB突变后内在的分子作用机制。BMP4、BMP15、FSHR、LHR和PTGS2基因mRNA表达水平在FecB突变3种基因型个体间差异不显著(P>0.05);而GDF9基因mRNA在FecB突变纯合子与杂合子个体间的表达水平差异显著(P<0.05);GDF5基因mRNA在FecB突变纯合子与野生型个体间的表达水平差异显著(P<0.05),突变杂合子与野生型之间表达差异不显著,但3种基因型bb、Bb、BB个体的GDF5基因mRNA表达量呈依次下降趋势。以上结论说明,BMPR-1B基因突变后,GDF5基因的mRNA表达量下降,使得GDF5蛋白对卵母细胞颗粒细胞的抑制作用减弱,颗粒细胞分化和成熟比正常条件下要早,导致大量的卵母细胞发育成熟,表现为BMPR-1B基因FecB突变个体产羔数比野生型个体增加。

利用Solexa测序技术鉴定策勒黑羊microRNA

试验旨在挖掘、分析策勒黑羊卵巢组织microRNA（miRNA）,为进一步研究特定miRNA参与策勒黑羊卵泡发育及激素分泌等相关生殖活动的机制奠定理论基础。从策勒黑羊卵巢组织中提取总RNA,分离、构建小片段RNA文库,进行Solexa测序和生物信息学分析。结果表明,共获得9 527 311条干净序列读数,小RNA序列长度主要分布在21~23nt;共鉴定出434个策勒黑羊卵巢组织表达的保守miRNA,其中表达量在100以上有167个;鉴定出57个候选miRNA,其中表达量在100以上有8个。测序成功获取了策勒黑羊卵巢组织miRNA序列及表达谱,卵巢组织miRNA表达丰富且表达量各异。

策勒黑羊的品种特性与保护利用

本文对策勒黑羊的品种特性进行了调查分析,提出了保护利用策略,以求提高策勒黑羊的品质和保护利用该品种。

策勒黑羊血清乳酸脱氢酶同工酶与产羔数的相关研究

利用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法,测定策勒黑羊(单羔、多羔成年母羊各60只)血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的多态性。测定发现,血清淀粉酶均表现为单态,LDH同工酶出现多态性。LDH同工酶共有5种基因型,经过生物图像处理系统扫描定量分析,得出其基因频率和杂合度,其百分含量的排列顺序为:LDH1>LDH3>LDH2>LDH5>LDH4;多羔成年母羊组与单羔成年母羊组2种LDH的基因型频率有显著差异(P<0.05),富含有LDH4和LDHy基因型的策勒黑成年母羊具有较高的多羔性能。

利用血液蛋白多态性分析策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊遗传距离

本实验采用垂直板高pH不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究了策勒黑羊、和田羊、卡拉库尔羊血清转铁蛋白(Tf)、前白蛋白(Pr)、血清白蛋白(A lb)三个基因座的遗传多态性。研究表明:策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊的血清转铁蛋白(Tf)、血清白蛋白(A lb)位点基因型有差别,前白蛋白(Pr)位点基因型相同。计算了三种绵羊的基因型频率、基因频率,策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊之间的遗传距离,并进行了分析。结果表明:策勒黑羊与和田羊遗传距离最近,其次为卡拉库尔羊。

策勒黑羊GDF9和BMP15基因多态性与产羔数关联分析

为了鉴定策勒黑羊BMP15和GDF9中的多态位点,并与产羔数性状进行关联分析,对相同饲养条件下81只具有产羔记录的策勒黑羊BMP15和GDF9基因完整ORF区进行测序。结果显示,在两个重要候选基因中共存在16个多态位点。GDF9基因有7个SNPs(分别为g.41769976G>A、g.41769833G>A、g.41769898G>A、g.41769246A>G、g.41769008T>C、g.41769002A>G)和g.41769723TCAA缺失,其中:g.41769833G>A位点AA型比GG型平均多0.22只(P<0.05),其余6个突变位点均与产羔数不存在显著相关(P>0.05)。BMP15基因存在9个突变位点:g.50986052C>A、g.50985229A>G、g.50985162T>C、g.50985071C>T、g.50983056C>G、g.50982538T>C、g.50981129A>G、g.50980656T>C和g.50981170T>A,且这9个SNP位点与产羔数均不存在显著相关(P>0.05)。结果可为策勒黑羊种群的保种育种提供理论参考。

利用同期发情技术对和田羊繁殖效果的试验研究

本试验采用阴道埋置孕酮海绵栓+肌肉注射PMSG法和肌肉注射PG法对处于正常发情周期内的策勒黑羊进行同期发情处理,再进行人工授精技术后直至产羔,对母羊的发情率进行分析。结果表明,经过处理后的母羊发情时间集中,周岁母羊发情率提高了23.5%,成年母羊发情率提高了13.6%.周岁母羊受胎率提高了51.5%,成年母羊受胎率提高了27.4%,极显著提高(P<0.01)。本试验针对和田策勒县专业户,采用同期发情、人工授精等技术处理方法,为提高策勒黑羊产羔率和优化生产提供试验依据。

策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢LNC-010801和LNC-008562表达规律的研究

为研究策勒黑羊卵巢组织发情周期LNC-010801和LNC-008562 LncRNA表达规律,以策勒黑羊为实验材料,采集发情周期不同阶段卵巢组织并提取总RNA,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,分别对LNC-010801和LNC-008562进行检测。结果表明:LNC-010801和LNC-008562在策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢组织中均有表达,呈现动态变化趋势。LNC-010801在发情前期表达量最高,显著高于发情期(P<0.05)和发情后期(P<0.05);LNC-008562在发情期表达量最高,显著高于发情前期(P<0.05)和发情后期(P<0.05),极显著高于发情间期(P<0.01)。这一研究结果可为后续策勒黑羊多胎性状的分子调控机理研究奠定基础。

基于ovine SNP 50K芯片对策勒黑羊繁殖和抗逆性状的遗传性分析

为筛选出策勒黑羊种质资源繁殖和抗逆性状分子标记和相关基因,本研究以100只无亲缘关系的策勒黑羊为研究对象,基于Illumina ovine SNP 50 K bead chip进行基因分型;用Plink1.90对基因组数据进行质量控制;对有效SNPs计算哈代-温伯格值,选择从小到大排列后前1%的分子标记,参考绵羊基因组(Oar_v4.0)进行注释,对注释到的基因进行GO和KEGG分析。结果表明:1)共获得480个SNPs,417个候选基因,其中,繁殖性状基因13个、抗逆性状相关基因30个;2)繁殖性状相关的基因有SOX9、GTF2A1、GNAQ等,抗逆性相关的基因有TMEM154、ZNF70、CREB3L2等。综上,本研究解析了策勒黑羊繁殖和抗逆性状基因的遗传规律,特别是对抗逆性相关候选基因研究,发现策勒黑羊群体携带抗肺炎相关的分子标记,为策勒黑羊保种和改良提供了分子水平的参考。

策勒黑羊卵巢总RNA的提取

策勒黑羊具有全年发情、多胎的特点,是新疆策勒县特有的优良绵羊品种。为研究与保护策勒黑羊遗传资源,为后续开展逆转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）、斑点杂交试验和构建c DNA文库试验等提供条件,试验采用经典异硫氰酸胍（Trizol）法提取策勒黑羊卵巢总RNA,通过核酸蛋白仪测定所提取RNA在不同波长下的吸光度值,计算RNA的提取量与纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳显示提取结果和验证RNA的完整性。结果表明：采用Trizol法提取得到的策勒黑羊卵巢RNA的浓度、纯度与完整性均可达到后续试验的要求,可为后续策勒黑羊种质资源保护和利用等生物学试验的开展提供参考依据。