血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4预测子宫内膜癌患者淋巴结转移及预后的临床价值

目的探讨血清蛋白激酶N1(PKN1)、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)、DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)预测子宫内膜癌患者淋巴结转移和预后的临床价值。方法选取2019年10月至2021年10月于唐山市妇幼保健院治疗的180例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组。另选取同期在该院治疗的子宫良性疾病患者180例作为良性疾病组,以及在该院体检的180例健康者作为健康组。子宫内膜癌组根据是否发生淋巴结转移分为淋巴结转移组42例和无淋巴结转移组138例,按照随访结果将患者分为预后不良组和预后良好组。比较各组血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4水平,Logistic模型分析患者预后的影响因素,以及绘制受试者工作特征曲线分析血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4对患者预后的预测价值。结果与健康组比较,子宫内膜癌组、良性疾病组血清PKN1、DDIT4水平升高,血清TNFRSF4水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移组血清PKN1、DDIT4水平高于无淋巴结转移组,TNFRSF4水平低于无淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组低分化程度、淋巴脉管间隙浸润阳性、肌层浸润≥1/2的占比高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清PKN1、DDIT4水平高于预后良好组,TNFRSF4水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清PKN1、DDIT4、LVSI、肌层浸润是子宫内膜癌预后的危险因素,血清TNFRSF4为子宫内膜癌预后的保护因素(P<0.05)。血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4联合对子宫内膜癌患者预后状况的预测效能高于各血清指标单独预测(P<0.05)。结论血清PKN1、TNFRSF4、DDIT4与子宫内膜癌患者淋巴结转移及预后有关,且对患者预后的预测效能较高。

脑胶质瘤组织PLEKHA4表达变化及其影响因素分析

目的探讨脑胶质瘤组织Pleckstrin同源域A族成员4(PLEKHA4)表达变化及其影响因素。方法选取胶质瘤手术切除患者癌组织及相应癌旁组织标本52例,其中WHO分级Ⅰ~Ⅱ级21例、Ⅲ~Ⅳ级31例,p53分型野生型23例、突变型29例。采用免疫组化和免疫印迹两种方法检测脑胶质瘤患者癌旁组织、胶质瘤组织中的PLEKHA4表达,观察PLEKHA4不同表达水平胶质瘤患者的临床特点及临床预后情况,分析影响胶质瘤组织中PLEKHA4表达的相关因素。结果52例患者胶质瘤组织PLEKHA4均为阳性表达,表达部位主要在胶质瘤组织细胞质和细胞膜中;癌旁组织未见PLEKHA4阳性表达。癌旁组织、Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤、Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤PLEKHA4相对表达量分别为0.419±0.101、0.968±0.061、1.366±0.096;PLEKHA4在胶质瘤组织中的相对表达量高于癌旁组织,Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织PLEKHA4相对表达量高于Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤组织(P均<0.05)。胶质瘤组织不同PLEKHA4表达水平患者WHO分级、p53分型比较差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析显示,胶质瘤WHO分级、p53分型是PLEKHA4表达的独立影响因素(P均<0.05)。术后随访2年,PLEKHA4高表达患者生存率为28.6%,PLEKHA4低表达患者生存率为70.8%,二者生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论胶质瘤组织PLEKHA4高表达,患者WHO分型、p53分型是胶质瘤组织PLEKHA4表达的影响因素,PLEKHA4表达与患者临床预后相关。

肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4的表达与患者免疫功能、炎症反应因子及预后的关系

目的探究肺癌组织中内质网氧化物蛋白(ERO1L)、肿瘤坏死因子受体4(TNFRSF4)的表达与肺癌患者免疫功能、炎症反应因子及其预后的关系。方法选取2018年7月~2020年7月于本院进行手术治疗的108例肺癌患者,收集术中留取的癌组织和癌旁组织标本。采用qRT-PCR检测ERO1L和TNFRSF4的mRNA相对表达量;使用免疫组织化学法检测ERO1L和TNFRSF4蛋白表达情况,分析二者表达水平与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier法分析ERO1L、TNFRSF4蛋白表达水平与患者预后的关系。肺癌患者预后生存率的影响因素采用Cox多因素分析。结果肺癌患者癌组织中ERO1L mRNA表达水平显著高于癌旁组织,TNFRSF4 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);肺癌组织中ERO1L蛋白高表达率显著高于癌旁组织,TNFRSF4蛋白高表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。ERO1L蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著低于低表达组(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α显著高于低表达组(P<0.05);TNFRSF4蛋白高表达组患者CD3^(+)、CD4^(+)显著高于低表达组,IL-1β、IL-6、TNF-α显著低于低表达组(P<0.05)。ERO1L高表达组患者3年累积生存率显著低于低表达组(Log rankχ^(2)=6.100,P=0.014),TNFRSF4高表达组患者3年累积生存率显著高于低表达组(Log rankχ^(2)=11.296,P=0.001)。肺癌组织的低分化、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、ERO1L高表达、TNFRSF4低表达是影响患者生存率的危险因素。结论肺癌组织中ERO1L、TNFRSF4表达与患者免疫功能、炎症因子以及预后具有一定关系。

鼻咽癌组织中GPX4和SLC7A11的表达及临床意义

目的探讨鼻咽癌(NPC)组织中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的表达及临床意义。方法将2016年3月至2017年3月于本院诊治的98例NPC患者纳入研究作为NPC组,同期因鼻中隔偏曲接受手术治疗的患者作为对照组。采用免疫组化检测NPC组织和正常鼻黏膜组织中GPX4、SLC7A11的表达情况。采用Spearman秩相关分析癌组织中GPX4、SLC7A11表达的相关性。比较不同NPC临床参数患者之间GPX4、SLC7A11表达阳性率。采用Kaplan-Meier法分析GPX4、SLC7A11表达对NPC患者生存预后的影响。采用单因素及多因素Cox回归分析NPC患者生存预后的影响因素。结果NPC组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率分别为75.51%(74/98)、73.47%(72/98),分别高于正常鼻黏膜组织中的11.67%(7/60)、13.33%(8/60),差异均有统计学意义(P<0.001)。NPC组织中GPX4与SLC7A11表达呈正相关(r=0.724,P<0.001)。不同临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及放疗敏感性NPC患者癌组织中GPX4、SLC7A11表达阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。GPX4阳性及阴性表达组的5年总体生存率分别为66.22%(49/74)、91.67%(22/24);GPX4阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.822,P<0.001)。SLC7A11阳性及阴性表达组5年总体生存率分别为66.67%(48/72)、88.46%(23/26);SLC7A11阳性表达组累积生存明显低于阴性表达组(Log-rankχ^(2)=5.041,P=0.012)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.608,95%CI:1.225~2.112)、淋巴结转移(HR=1.917,95%CI:1.319~2.799)、GPX4阳性(HR=1.839,95%CI:1.228~2.753)、SLC7A11阳性(HR=1.738,95%CI:1.246~2.426)是影响NPC患者生存预后的独立危险因素。结论NPC中GPX4、SLC7A11表达水平升高,两者与不良临床病理特征有关,是NPC患者预后评估的潜在标志物。

Nr4a1激动剂胞孢子酮B挽救小鼠噪声性听力损失

目的:探究核受体亚家族4A组成员1(nuclear receptor subfamily 4 group A member 1,Nr4a1)Nr4a1激动剂胞孢子酮B(cytosporone B,Csn-B)对小鼠噪声暴露后听力损失的治疗作用。方法:采用双氧水刺激HEI-OC1毛细胞系的方法构建氧化应激细胞模型;通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)检测细胞中Nr4a1的mRNA表达水平;分别通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)及流式细胞术的方法检测细胞活力和细胞凋亡水平以评估Csn-B预处理后经双氧水刺激的细胞状态。构建小鼠噪声性听力损失模型,运用qPCR和免疫荧光技术检测噪声暴露后Nr4a1在小鼠耳蜗中的表达;通过检测听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)评估噪声暴露后以及Csn-B连续治疗13 d后小鼠听力情况。结果:双氧水刺激后HEI-OC1毛细胞中Nr4a1表达上升,细胞活力显著下降,凋亡水平显著升高;Csn-B预处理HEI-OC1毛细胞经双氧水刺激,细胞活力显著高于对照组而凋亡水平则显著低于对照组。在体研究结果显示,噪声暴露后小鼠听力显著降低,Nr4a1在小鼠耳蜗中的表达水平显著升高。噪声暴露后经Csn-B治疗小鼠听力得到改善,主要表现为Click-ABR以及Tone Burst-ABR(4000、8000Hz处)阈值下降。结论:Nr4a1激动剂Csn-B增强内耳毛细胞对氧化应激损伤的抵御能力,部分改善噪声暴露后的小鼠听力。

金盏花苷E通过自噬途径下调GPX4和SLC7A11抑制肝癌细胞的增殖和迁移

目的探讨金盏花苷E抑制肝癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法金盏花苷E处理肝癌细胞,CCK-8检测细胞活力;Western blotting检测GPX4、SLC7A11、LC3、P62的表达以及Akt/mTOR的磷酸化。自噬抑制剂LY294002和激活剂Rapamycin与金盏花苷E联合处理肝癌细胞,EdU和Transwell实验分别检测肝癌细胞的增殖和迁移能力。TCGA数据库分析GPX4和SLC7A11在肝癌及正常肝组织中的表达水平,以及与肝癌患者存活之间的关系。Western blotting和qPCR分别检测GPX4和SLC7A11在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平。结果金盏花苷E能够显著抑制肝癌细胞的存活(P<0.05);GPX4和SLC7A11在肝癌组织和肝癌细胞中均显著高表达;GPX4和SLC7A11的表达与肝癌患者存活呈显著负相关(P<0.001);金盏花苷E显著抑制GPX4和SLC7A11蛋白的表达,激活Akt-mTOR通路,增强LC3Ⅱ的表达(P<0.01);自噬激活剂Rapamycin显著增强金盏花苷E对GPX4和SLC7A11的抑制作用,而自噬抑制剂LY294002则明显逆转了金盏花苷E对GPX4和SLC7A11的抑制作用(P<0.05);抑制自噬途径能够逆转金盏花苷E对肝癌细胞增殖和迁移的抑制作用,增强自噬途径则发生相反的变化(P<0.01)。结论金盏花苷E经自噬途径下调GPX4和SLC7A11抑制肝癌细胞的增殖和迁移。

结肠癌组织中miR-183-5p和THEM4的表达水平及临床意义

目的:研究结肠癌组织中微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和硫酯酶超家族成员4(THEM4)的表达水平及其临床意义。方法:收集河北中石油中心医院96例结肠癌患者为研究对象,在进行根治切除术过程中收集患者结肠癌组织及癌旁正常组织。检测结肠癌组织及癌旁正常组织中miR-183-5p和THEM4 m RNA的相对表达水平。分析两者的相关性及其与预后的关系。Cox回归分析影响结肠癌患者预后的危险因素。结果:与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中miR-183-5p表达水平升高(P<0.05),THEM4 m RNA表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织中miR-183-5p与THEM4 m RNA表达呈负相关(r=-0.529,P<0.05)。miR-183-5p高表达组生存率低于低表达组(P<0.05),THEM4高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05)。TNM分期(Ⅲ~Ⅳ)、miR-183-5p高表达、THEM4低表达是结肠癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:结肠癌织中miR-183-5p表达水平升高,THEM4表达水平降低,两者均与患者临床病理特征及预后密切相关。

淫羊藿苷通过上调SLC7A11/GPX4轴减轻铁死亡改善心力衰竭

目的 基于脂质过氧化研究淫羊藿苷抗异丙肾上腺素所致小鼠心力衰竭的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为空白组、异丙肾上腺素模型组(ISO,15 mg/kg)、氯沙坦阳性药组(Los, 9 mg/kg),以及淫羊藿苷低剂量组(ICA-L组,15 mg/kg)、淫羊藿苷高剂量组(ICA-H组,60 mg/kg)。采用小动物超声检测仪检测小鼠心功能(EF%、FS%)的变化,计算小鼠心脏指数。采用HE染色观察小鼠左心室组织病理变化,采用布鲁士蓝染色观察小鼠左心室组织铁离子的积累。采用Western blot检测小鼠左心室组织中铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4、4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1的表达。结果 ICA和Los可以改善ISO引起的小鼠左心室射血分数和短轴缩短率的降低,减轻ISO所致的左心室组织病理损伤以及铁离子过度积累,抑制ISO所致左心室组织中SLC7A11、GPX4蛋白的下调,4-HNE、ACSL4、LPCAT3、TFR1、DMT1蛋白的上调(P<0.05)。结论 ICA可能通过上调SLC7A11/GPX4轴抗脂质过氧化,减轻铁死亡,改善ISO所诱导的小鼠心力衰竭。

鼻咽癌患者血清SMAD家族成员4、组织多肽特异性抗原表达水平及与临床特征和预后的关系

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者血清SMAD家族成员4(SMAD4)、组织多肽特异性抗原(TPS)表达水平及与临床特征和预后的关系。方法选取43例NPC患者作为NPC组,40例健康体检者作为健康组,比较两组受试者血清SMAD4、TPS水平,分析SMAD4、TPS与NPC患者临床特征的关系。采用Cox回归模型分析NPC患者预后的影响因素。结果NPC组患者血清SMAD4水平明显低于健康组,TPS水平明显高于健康组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同临床分期、颈淋巴结转移情况、颅神经侵犯情况NPC患者血清SMAD4、TPS水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Cox回归分析结果显示,有颅神经侵犯、血清SMAD4水平﹤97.43 ng/L、血清TPS水平≥164.44 U/L均为NPC患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论NPC患者血清SMAD4呈异常低表达,TPS呈异常高表达,其水平与NPC患者的临床特征有关,且与预后相关。

LILRB4在肿瘤微环境中的作用及其在肿瘤治疗中的应用进展

人类白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)是一种免疫抑制性受体,正常生理情况下,其在单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞上表达。LILRB4在多种肿瘤组织中的肿瘤细胞及巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞中的表达高于相应正常组织,能够影响肿瘤细胞的生物学行为及肿瘤免疫微环境,显著促进肿瘤进展,且LILRB4的肿瘤免疫治疗显示出良好的疗效。该文对LILRB4在血液系统肿瘤、实体肿瘤中的表达与作用,以及靶向LILRB4治疗肿瘤的策略进行综述。

茯苓酸通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞铁死亡

目的:探究茯苓酸通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路抑制氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的心肌细胞铁死亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,诱导建立细胞OGD/R模型后以0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L茯苓酸处理24 h,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各处理组细胞活力后筛选出合适的茯苓酸作用浓度。将H9c2细胞随机分为对照组、模型组、茯苓酸组、ML385组(Nrf2抑制剂组)、茯苓酸+ML385组,除对照组外其余各组建立细胞OGD/R模型后以茯苓酸、ML385分组处理,采用CCK-8法与流式细胞实验分别检测各组H9c2细胞活力、凋亡率;采用试剂盒检测各组H9c2细胞培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、促炎因子[前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、抗炎因子白细胞介素(IL)-10水平及细胞抗氧化因子[过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)]、铁死亡相关指标[铁含量、丙二醛(MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组H9c2细胞凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,茯苓酸组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05);ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。与茯苓酸组比较,茯苓酸+ML385组细胞凋亡率、LDH释放量、细胞培养基上清中PGE2及TNF-α水平、细胞铁含量、MDA水平及Bax、Caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05),细胞活力、细胞培养基上清中IL-10水平、细胞CAT及GSH水平、Bcl-2及Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:茯苓酸可通过激活Nrf2/SLC7A11/GPX4信号而抑制OGD/R诱导的心肌细胞炎症、脂质过氧化与铁死亡,增强其抗氧化活性及细胞活力,最终减轻其细胞凋亡损伤。

膀胱癌组织miR-20a-5p、NR4A3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的分析膀胱癌(BC)组织miR-20a-5p、核受体亚家族4成员3(NR4A3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2016年12月—2019年1月曲靖市第一人民医院泌尿外科行手术治疗BC患者30例,收集其膀胱癌组织及相应的癌旁组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BC癌组织中miR-20a-5p、NR4A3的表达水平,并分析miR-20a-5p、NR4A3表达与BC临床病理特征的关系;Kaplan-Meier曲线分析miR-20a-5p、NR4A3与BC患者预后的关系;Cox风险比例回归模型评估BC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,BC癌组织中miR-20a-5p表达上升(t/P=7.013/<0.001),NR4A3表达下降(t/P=9.658/<0.001)。TargetScan网站显示,miR-20a-5p与NR4A3存在靶向关系,且Pearson相关性分析显示,BC癌组织中miR-20a-5p与NR4A3表达呈负相关(r/P=-0.599/<0.001)。病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者miR-20a-5p高于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(t/P=2.159/0.040、2.157/0.040、2.403/0.023),病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者NR4A3表达显著低于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(t/P=3.421/0.002、5.445/<0.001、2.849/0.008)。BC患者3年总生存率为63.33%,miR-20a-5p高表达组3年生存率低于低表达组(χ^(2)/P=4.474/0.034),而NR4A3低表达组低于高表达组(χ^(2)/P=9.853/0.002);miR-20a-5p高表达是影响BC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.028(1.764~2.895)]。结论BC癌组织中miR-20a-5p表达上升,NR4A3表达下降,与BC病理分级、淋巴结转移、TNM分期及预后有关,且miR-20a-5p高表达为BC患者预后的独立危险因素。

TRPV4在心血管疾病中作用的研究进展

瞬时受体电位阳离子通道V亚家族成员4(transient receptor potential cation channel subfamily V member4,TRPV4)是瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential cation channel, TRP)家族成员,是一种非选择性阳离子通道,对Ca^(2+)离子具有适中通透性,对Na^(+)和Mg^(2+)少量通透(PCa/PNa约为6~10,PCa/PMg约为2~3)。TRPV4在心血管系统表达广泛,主要表达于血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞和成纤维细胞等,可调节血管张力和血管通透性,参与机械信号传导等。

Cathepsin L, transmembrane peptidase/serine subfamily member 2/4, and other host proteases in COVID-19 pathogenesis – with impact on gastrointestinal tract

Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2(SARS-CoV-2)seems to employ two routes of entrance to the host cell;via membrane fusion(with the cells expressing both angiotensin converting enzyme 2(ACE2)and transmembrane peptidase/serine subfamily member 2/4(TMPRSS2/4))or via receptor-mediated endocytosis(to the target cells expressing only ACE2).The second mode is associated with cysteine cathepsins(probably cathepsin L)involvement in the virus spike protein(S protein)proteolytic activation.Also furin might activate the virus S protein enabling it to enter cells.Gastrointestinal tract(GIT)involvement in SARS-CoV-2 infection is evident in a subset of coronavirus disease 2019(COVID-19)patients exhibiting GIT symptoms,such as diarrhea,and presenting viral-shedding in feces.Considering the abundance and co-localization of ACE2 and TMPRSS2 in the lower GIT(especially brush-border enterocytes),these two receptors seem to be mainly involved in SARS-CoV-2 invasion of the digestive tract.Additionally,in vitro studies have demonstrated the virions capability of infection and replication in the human epithelial cells lining GIT.However,also furin and cysteine cathepsins(cathepsin L)might participate in the activation of SARS-CoV-2 spike protein contributing to the virus invasiveness within GIT.Moreover,cathepsin L(due to its involvement in extracellular matrix components degradation and remodeling,the processes enhanced during SARS-CoV-2-induced inflammation)might be responsible for the dysregulation of absorption/digestion functions of GIT,thus adding to the observed in some COVID-19 patients symptoms such as diarrhea.

鸦胆子苦醇调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路对皮肤鳞癌细胞铁死亡的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对皮肤鳞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,cSCC)细胞铁死亡的影响。方法:CCK-8法检测0、100、250、500、700、900 nmol/L鸦胆子苦醇处理后人cSCC细胞系A431细胞增殖率,筛选出合适的鸦胆子苦醇作用浓度。体外培养的A431细胞随机分为对照组、鸦胆子苦醇低剂量组、鸦胆子苦醇高剂量组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,TBHQ;Nrf2激活剂)组、鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组,以鸦胆子苦醇和TBHQ分组处理后,采用CCK-8法、Hoechst 33342染色法检测各组A431细胞增殖与凋亡;采用试剂盒检测各组A431细胞抗氧化因子[谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)]水平及铁死亡指标[铁含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)]水平;采用免疫印迹实验检测各组A431细胞增殖、凋亡及Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,鸦胆子苦醇低、高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达均降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达均升高(P<0.05);鸦胆子苦醇高剂量组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达相比鸦胆子苦醇低剂量组进一步降低(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达进一步升高(P<0.05);TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。与鸦胆子苦醇高剂量组相比,鸦胆子苦醇高剂量+TBHQ组细胞增殖率、GSH及CAT、SOD水平,以及PCNA及Bcl-2、Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率、铁含量、ROS及MDA水平和Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇通过下调Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路而促进铁死亡,诱导cSCC细胞凋亡,并抑制其增殖。

VGLL4基因多态性与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨残留样蛋白质家族成员4(VGLL4)基因单核苷酸多态性(SNP)与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系。方法选取450例体检者的血液样本,采用ELISA法将样本分为幽门螺杆菌阴性组(n=220)和幽门螺杆菌阳性组(n=230)。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对VGLL4 SNP rs1803489、rs7617620、rs13078528位点进行基因分型。结果内蒙古包头地区汉族人群中VGLL4基因SNP rs1803489、rs7617620、rs13078528与幽门螺杆菌感染没有关联。结论在内蒙古包头地区的汉族人群中VGLL4基因SNP rs1803489、rs7617620、rs13078528在幽门螺杆菌感染中不起主要作用。

尼罗罗非鱼高迁移率族蛋白4(TOX4)基因克隆及其在细菌感染过程中的表达特征

为了解析与胸腺细胞选择相关的高迁移率族蛋白4(tox high mobility group box family member 4,TOX4)在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)响应无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的功能,利用聚合酶链式反应(PCR)克隆和鉴定尼罗罗非鱼TOX4基因(GenBank登录号:XP003458812)的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,对推导的TOX4氨基酸序列进行生物信息学分析,分析其亚细胞定位特征,以及在尼罗罗非鱼头肾淋巴细胞亚群的分布特征,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析TOX4基因在健康鱼各组织及响应无乳链球菌感染过程中的表达模式。结果表明:尼罗罗非鱼TOX4基因的ORF全长为2004 bp,编码667个氨基酸,预测TOX4蛋白的相对分子质量为69060,理论等电点为4.69,无信号肽序列及跨膜结构,具有一个HMG保守结构域;亚细胞定位结果显示,TOX4蛋白主要表达于细胞核中;多序列比对及系统进化分析均显示,尼罗罗非鱼与斑马拟丽鱼(Maylandia zebra)TOX4氨基酸序列的同源性最高;qRT-PCR分析显示,TOX4基因在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,且在血液中表达量最高;单细胞转录组数据分析显示,TOX4基因主要在尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(nonspecific cytotoxic cell,NCC)和巨噬细胞(macrophage,Mφ)中表达;经无乳链球菌感染后,尼罗罗非鱼脑、头肾、肠道和脾脏中TOX4基因的表达量显著上调,并在感染后12 h(脑、头肾、肠道)和48 h(脾脏)达到峰值。研究表明,TOX4可能参与尼罗罗非鱼响应细菌感染的免疫应答过程。

细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-In TM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果与Flp-In^(TM)CHO-空质粒组相比,Flp-In^(TM)CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-In^(TM)CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

ABCC4基因表达对前列腺癌免疫微环境的影响

目的:探究ATP结合盒亚家族C成员4(ABCC4)基因在前列腺癌(PCa)中的表达,分析ABCC4对PCa肿瘤免疫微环境(TME)的影响。方法:使用GEO数据库中的GEO2R计算PCa与癌旁组织的差异表达基因。通过GEPIA2数据库探究ABCC4基因在PCa中的表达。将从UCSC Xena数据库下载的TCGA中的PCa数据分为ABCC4基因高、低表达组。使用clusterprofafiler R包进行GO分析和基因集富集分析(GSEA)。利用TISIDB数据库、ESTIMATE和CIBERSORT分析ABCC4基因表达与免疫指标的相关性。结果:PCa组织中ABCC4基因表达高于癌旁组织(P<0.05)。ABCC4高表达组PCa患者生存能力较差。在GSEA中,ABCC4低表达组中Th1和Th2细胞分化通路被激活,ABCC4基因可能在PCa的TME中起作用。TISIDB分析证实ABCC4基因表达与NK和T细胞丰度呈负相关关系(P<0.05)。ABCC4基因高表达与免疫检查点基因低表达有关。ESTIMATE和CIBERSORT分析表明,ABCC4基因表达可抑制PCa的免疫细胞浸润,尤其CD8 T、NK和Tregs细胞。免疫荧光实验显示,ABCC4蛋白表达低可诱导更多的CD8 T细胞浸润(P<0.05)。结论:ABCC4基因调控PCa的TME的免疫细胞浸润,尤其对T细胞和NK细胞浸润有重要作用,从而影响PCa的发生及其免疫治疗。

SLC1A5协同TM4SF1通过mTOR信号通路调控食管鳞癌细胞迁移

目的探讨氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5(SLC1A5)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其与临床病理特征的相关性,以及SLC1A5对ESCC细胞迁移的影响及潜在分子机制。方法采用TNM plot在线数据库分析SLC1A5基因在ESCC组织和正常组织中的表达情况。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测ESCC组织和癌旁组织中SLC1A5 mRNA表达情况;采用免疫组化(IHC)法检测SLC1A5蛋白表达情况,并分析其与患者临床病理资料的相关性。分别构建SLC1A5过表达(SLC1A5-OE组)、四跨膜蛋白超家族成员1过表达(TM4SF1-OE组)、SLC1A5和TM4SF1共同过表达的Eca109细胞。采用细胞增殖试验、Transwell实验检测Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力。通过免疫共沉淀(IP)实验证实SLC1A5和TM4SF1的相互作用;采用蛋白质免疫印迹(WB)法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白的表达水平。结果TNM plot数据库分析显示,ESCC组织中SLC1A5基因表达水平高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。ESCC组织中SLC1A5 mRNA表达高于成对的癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01)。IHC结果显示,SLC1A5蛋白在癌组织中高表达,并且与临床分期(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.029)显著相关。细胞增殖实验结果显示,SLC1A5-OE组和对照细胞(Con组)增殖能力比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell实验结果显示,与Con组比较,SLC1A5-OE组细胞迁移及侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.01)。IP结果表明,SLC1A5与TM4SF1存在相互作用。WB结果显示,相对于SLC1A5-OE组或TM4SF1-OE组,p-mTOR、p-S6蛋白表达水平在SLC1A5和TM4SF1共同过表达的细胞中最高。Transwell实验证实,共同过表达SLC1A5和TM4SF1的ESCC细胞迁移能力最强。结论ESCC中SLC1A5呈高表达,且与患者临床分期、淋巴结转移显著相关,SLC1A5可能通过与TM4SF1相互作用,激活mTOR信号通路,进而促进ESCC细胞迁移。