miR-96-5p在肝细胞癌根治术后早期复发患者中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-96-5p在肝细胞癌根治术后复发患者中的表达及其临床意义。方法:从我院肝癌标本库中选取61例冻存的原发性肝细胞癌组织标本,根据筛选标准将其中33例归为早期复发组(根治术后1年内出现肝内复发病灶),28例为非早期复发组(术后超过2年未出现肝内复发病灶);运用实时荧光定量PCR验证miR-96-5p在两组肝细胞癌组织的表达水平。结果:miR-96-5p在早期复发组肝癌组织中表达明显下调[(0.634±0.783)vs.(5.182±11.321),P=0.043],其在肝癌组织中的表达与肝癌术后早期复发及肿瘤直径、脉管癌栓有关(P<0.05)。结论:miR-96-5p与肝癌根治术后早期复发密切相关,并极有可能成为肝癌早期复发的分子标记物,以及为未来肝癌靶向治疗提供有效的靶点。

低温处理下东农冬麦1号小麦根组织EXPA基因的表达分析

寒地冬小麦膨胀素(Expansin)基因的表达特性同根系建成密切相关,而形成发达的根系是高寒地区冬小麦成功越冬返青的关键。为明确低温对高寒地区冬小麦膨胀素基因表达特性的影响,进而提高冬小麦对寒冷的适应性,以高抗寒冬小麦东农冬麦1号为试验材料,以正常冬小麦济麦22号为对照材料,运用实时荧光定量PCR技术对经不同低温处理的小麦幼苗根组织中编码α-expansin(EXPA)的基因TaEXPA5、TaEXPA6和TaEXPA7的表达特性进行分析。结果表明,在4℃、-10℃和-20℃低温处理下,高抗寒冬小麦东农冬麦1号中TaEXPA5、TaEXPA6和TaEXPA7基因的相对表达量与对照相比呈现显著性上升,其中,4℃处理条件下,TaEXPA6和TaEXPA7基因的相对表达量变化幅度较明显,-10℃处理条件下,TaEXPA5基因的相对表达量变化幅度较明显,-20℃处理条件下,TaEXPA5和TaEXPA7基因的相对表达量变化幅度较明显。说明低温影响小麦根组织中TaEXPA5、TaEXPA6和TaEXPA7基因的表达,三个基因与抗御低温胁迫具有相关性,并且各基因表达存在一定的协作性。

丁香苦苷固体脂质纳米粒抗鸭乙肝病毒的实验研究

目的:研究丁香苦苷固体脂质纳米粒在鸭体内抗鸭乙肝病毒的作用。方法:采用实时荧光定量PCR方法筛选出先天感染DHBV阳性2日龄浙江麻鸭30只。将阳性鸭随机分成5组,分别是空白对照组、拉米夫定组、丁香苦苷固体脂质纳米粒低、中、高剂量组,每组6只,连续给药15天以后停药观察5天。在用药前、用药第51、0、15天及停药后第5天从腿胫静脉抽血,检测血清DHBV-DNA的含量,并检测血清的ALT、AST水平,停药5天后取肝脏组织进行病理学观察。结果:与空白对照组相比,丁香苦苷固体脂质纳米粒高、中剂量组的DHBV-DNA含量都明显下降,有显著性差异(P<0.05),ALT、AST水平也明显降低,并有减轻肝脏炎症反应的作用,作用的强弱与用药剂量相关。而丁香苦苷固体脂质纳米粒低剂量组未表现出明显的上述作用。结论:丁香苦苷固体脂质纳米粒在鸭体内具有抗鸭乙肝病毒的作用以及对DHBV引起的肝损伤具有保护作用。

高产脂思茅松牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及表达

以高产脂思茅松为材料,基于转录组数据分析,采用RT-PCR方法获得思茅松牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(GGPS)基因的c DNA序列,Gen Bank登录号为KM382173.1.序列分析显示,思茅松GGPS基因c DNA全长1 152 bp,编码383个氨基酸,属于GGPS家族.序列比对分析显示,思茅松GGPS拥有GGPS家族特有的两个功能保守结构域FARM(DDLPSMDND)、SARM(DDILD),其与马尾松GGPS的同源性为78.07%.系统进化树分析显示,思茅松GGPS与马尾松GGPS的亲缘关系最近.荧光定量PCR分析表明,在思茅松的树皮中,GGPS基因的表达明显受到割脂物理伤害的诱导,在高产脂思茅松个体幼枝中的表达量远远高于在低产脂思茅松个体的表达量.

中华按蚊气味结合蛋白基因AsinOBP1的克隆和表达分析

【目的】蚊虫的行为在很大程度上依赖于嗅觉系统,例如寻找宿主和产卵场所等。中华按蚊Anopheles sinensis是我国最重要的传疟媒介之一,但有关中华按蚊嗅觉信号传递过程的研究甚少。本研究旨在克隆和表达分析中华按蚊的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)基因,为进一步研究中华按蚊嗅觉传递的分子机制奠定基础。【方法】通过分析中华按蚊的转录组数据克隆气味结合蛋白基因,采用RT-PCR和实时定量PCR技术分析该基因在成虫不同组织和在吸血前后的表达模式。【结果】克隆到一个气味结合蛋白基因,命名为Asin OBP1(Gen Bank登录号为KJ958382)。Asin OBP1基因开放阅读框长435 bp,编码144个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点。RT-PCR组织表达谱分析发现,Asin OBP1在检测的所有成虫触角、下颚须、喙和头部组织中都有表达,而在足和去掉头部以外的躯体组织中不表达。定量分析发现Asin OBP1在雌蚊触角中的表达水平最高,吸食血液后,Asin OBP1的表达水平显著下降;仅用小鼠气味处理后,Asin OBP1的表达水平也显著下降。【结论】研究结果说明Asin OBP1可能是嗅觉组织特异性表达的基因,与雌蚊寻找宿主等行为有关,其功能还需深入研究。

长叶红砂液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及表达特性

为研究长叶红砂(Reaumuria trigyna)离子转运分子机制,利用RT-PCR和RACE技术,克隆到其液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHX1)的全长cDNA片段,命名为RtNHX1(NCBI序列号为KR919802)。结果表明:RtNHX1的cDNA片段全长2 622bp,开放阅读框1 662bp,5′非编码区509bp,3′非编码区451bp,编码553个氨基酸,推测分子量为60.91kD。该蛋白含有12个跨膜结构域,为疏水蛋白,与其他植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白NHX1的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR对其在NaCl胁迫下的表达检测显示,不同时间和不同浓度NaCl胁迫下,RtNHX1表达量变化均呈先升高后降低趋势,在100mmol/L NaCl胁迫6h和200mmol/L NaCl胁迫后达到最高,表达量分别超过或约是对照的3倍,一定程度反应出RtNHX1参与长叶红砂的盐胁迫应答,是该植物离子转运体系的重要元件。

芹菜非特异性脂转移蛋白基因的克隆与表达分析

以芹菜(Apium graveolens)‘六合黄心芹’、‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,采用RT-PCR技术分别获得其cDNA序列。序列分析表明:来源于3个芹菜品种的非特异性脂转移蛋白(Non-specific lipid transfer protein,nsLTP)基因核苷酸序列高度保守,全长357bp,编码118个氨基酸,起始密码子ATG之后含有27个氨基酸残基的信号肽序列,推测其成熟的蛋白含91个氨基酸残基,预测其蛋白质分子量为11.75kD,pI值为9.36。芹菜的nsLTP蛋白主要由α-螺旋和随机卷曲组成。空间结构上分析显示,芹菜nsLTP蛋白中H1区域明显分为H1a和H1b两个亚区域,而模板碧桃中H1区域为一个连续的螺旋结构,存在明显的差异。进化分析显示,芹菜nsLTP与香石竹、大洋洲滨藜等植物的nsLTP相似性较高,在保守位置具有8个半胱氨酸残基。实时定量PCR表达分析表明,该基因主要在芹菜的茎以及茎尖生长活跃中心表达,具有明显的组织特异性。

人非小细胞肺癌组织中检测表皮生长因子受体突变两种方法的比较

目的:通过免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测表皮生长因子受体(EGFR)突变的比较,探讨两种检测方法的一致性及在非小细胞肺癌(NSCLC)临床检测中的应用价值。方法:随机选择36例NSCLC存档石蜡组织,采用特异性突变抗体(E746-A750del和L858R)的免疫组织化学染色方法和Roche商品化的cobas?EGFR PCR检测试剂盒检测EGFR的突变状态。结果:EGFR突变蛋白阳性定位于肿瘤细胞质和或胞膜。免疫组织化学检测显示NSCLC中EGFR突变阳性率为47.22%(17/36),其中鳞癌的突变率为9.09%(1/11),腺癌的突变率为64.00%(16/25),二者的差异有显著性(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测NSCLC中EGFR突变阳性率为50.00%(18/36),其中鳞癌的突变率为18.18%(2/11),而腺癌的突变率为64%(16/25),二者的差异有显著性(P<0.05)。免疫组织化学染色与实时荧光定量PCR检测EGFR突变具有极好的一致性(κ=0.833,P<0.01),并且检测到的主要突变位点都是19号外显子的缺失突变(E746-A750del)和21号外显子的点突变(L858R)。结论:EGFR突变特异性抗体的免疫组织化学检测是一种可在NSCLC中进行EGFR突变筛查并对EGFR-TKI治疗快速反应的方法,具有检测费用较低、检测时间较短且结果易于判读,是一种可以在临床进行广泛推广的检测方法。EGFR突变在肺腺癌中更为常见。