辣椒素与槲皮苷通过EGFR/PI3K/Akt信号通路调节HepG2细胞脂质代谢作用机制

为探究辣椒素与槲皮苷协同调节肝脏脂质代谢的分子机制,本实验利用油酸诱导的HepG2高脂细胞模型,研究辣椒素单独处理及辣椒素与槲皮苷联合处理对HepG2细胞存活率的影响,采用油红O染色法观察HepG2细胞脂质积累情况,同时测定细胞内总甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、总胆汁酸的含量水平,采用免疫印迹法测定表面生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)及法尼醇X受体1(farnesoid X receptor 1,FXR1)、胆固醇7α羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)、成纤维细胞生长因子19(fibroblast growth factor 19,FGF19)的表达量。结果显示,各处理组HepG2细胞的增殖率均大于75%,表明药物对细胞没有明显毒性,可进行后续实验。油红O染色结果表明,加药处理组细胞内脂质积累减少。辣椒素与槲皮苷处理可降低细胞内总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,提高高密度脂蛋白胆固醇和胆汁酸含量;同时各实验组上调了EGFR、PI3K、Akt及FXR1、FGF19蛋白的表达水平。综合来看,辣椒素与槲皮苷在调节肝脏脂质代谢方面具有协同效应,二者在高剂量水平以3∶1比例混合效果最佳。

基于标准汤剂的地耳草配方颗粒质量标准研究

目的以地耳草标准汤剂为基础建立其配方颗粒的质量标准,为地耳草配方颗粒质量评价提供参考。方法采用高效液相色谱法测定饮片、标准汤剂及配方颗粒中槲皮苷、异槲皮苷的质量分数,计算2种成分转移率,并且采用高效液相色谱建立了标准汤剂及配方颗粒特征分析方法。结果15批标准汤剂样品中槲皮苷、异槲皮苷的质量分数为13.66~32.11 mg/g,4.00~16.81 mg/g,转移率为45.7%~63.5%,37.8%~56.9%,3批配方颗粒槲皮苷的质量分数为16.16、17.02、16.52 mg/g,转移率为55.2%、58.2%、55.3%,异槲皮苷的质量分数为7.61、7.93、7.56 mg/g,转移率为45.0%、48.8%、44.7%;各样品特征图谱与对照图谱的相似度均大于0.90,所建立的特征图谱标定共有峰7个,其中指认了4个,峰3为异槲皮苷、峰5为槲皮苷、峰6为白前苷B、峰7为槲皮素;聚为2类,2种主成分的累积方差贡献率达84.85%。结论所创建的质量分数测定及特征图谱HPLC方法的专属性强、重复性好、合理准确,得到的地耳草标准汤剂、配方颗粒一致性良好,可以对地耳草配方颗粒的质量进行控制和整体性评价提供参考。

桑寄生配方颗粒中槲皮苷近红外定量分析模型的建立

建立桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量测定的近红外定量分析模型。采集桑寄生配方颗粒的近红外光谱,将剔除异常光谱后的样本,采用X-Y联合距离的样本集划分法划分校正集和验证集。结合高效液相色谱法测定的槲皮苷的含量值,应用偏最小二乘法,建立测定桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量的定量分析模型。采用矢量归一化法对近红外光谱进行预处理,选7502~4597.6 cm^(-1)光谱区,主因子数为11,建立的定量分析模型性能良好,交叉检验均方根误差为0.199,决定系数为96.99%。用验证集样本进行验证,预测均方根误差为0.132,决定系数为98.68%,剩余预测偏差为8.98。将预测值与参考值进行配对t检验,两种方法测得的槲皮苷的含量值无显著差异。该模型准确度高,可作为测定桑寄生配方颗粒中槲皮苷含量的快速检验方法。

龙眼叶黄酮类有效组分配伍体外降糖作用的研究

基于体外降糖活性优选龙眼(Dimocarpus longan Lour.)叶黄酮有效成分山柰酚、槲皮素、槲皮苷的配伍比例。建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,分别考察不同浓度的胰岛素及不同诱导时间对胰岛素抵抗模型的诱导情况,并以山柰酚、槲皮素、槲皮苷三者用量为考察因素,以对胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗率为指标,运用星点设计-效应面法(CCD-RSM)优化三者配伍比例。结果表明,建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型的最佳条件为1×10^(-7)mol/L胰岛素诱导24 h;山柰酚、槲皮素、槲皮苷体外降糖最佳配伍比例为山柰酚105.0μmol/L、槲皮素78.9μmol/L、槲皮苷194.0μmol/L,配伍比例优化试验拟合方程为Y=20.94+1.55×A-0.44×B-2.05×C-0.66×AB+1.68×AC-1.53×A^(2)-3.2×B^(2)-2.68×C^(2)。山柰酚、槲皮素、槲皮苷3种单体的联合使用对HepG2细胞的葡萄糖消耗率预测值是21.52%,实验值是(21.05±0.52)%。优选出的最佳配伍比例的龙眼叶黄酮类有效组分,对HepG2细胞的葡萄糖消耗率最高,降糖活性较好,可为龙眼叶治疗糖尿病的有效性提供科学方法与实验依据。

Molecular mechanism of quercitrin on osteogenic differentiation and adipogenic differentiation of rat bone marrow stromal stem cells(rBMSCs)

Objective：The study was designed to investigate the molecular mechanism of quercitrin on osteogenic differentiation and adipogenic differentiation of r BMSCs.Methods：r BMSCs were harvested from SD rats,and determination of alkaline phosphatase（ALP）activity,quantification of mineralization by Alizarin Red S staining,and the m RNA expression of osteogenic differentiation markers（Runx2,BMP-2,and OSX）by RT-PCR after r BMSCs stimulated by osteogenic induction with（0.1–10）μg/m L of quercitrin,quantification of Lipid droplet by Oil Red O staining and the m RNA expression of adipogenic differentiation marker（,and a P2）by RT-PCR after r BMSCs stimulated by adipogenic induction with（0.1-10）μg/m L of quercitrin.Results：Quercitrin can up-regulate the m RNA expression of osteogenic differentiation markers（Runx2,BMP-2,and OSX）and increase ALP activity and mineralization after osteogenic induction,on the other hand quercitrin can suppress the m RNA expression of adipogenic differentiation markers（,and a P2）and decrease lipid droplet after adipogenic induction.Conclusion：This study suggested that quercitrin not only stimulated osteogenic differentiation but also inhibited adipogenic differentiation of r BMSCs,which was associated with the up-regulation of Runx2,BMP-2,and OSX m RNA expression and the down-regulation of,and a P2 m RNA expression.

红禾麻入血成分治疗类风湿性关节炎的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接的方法探究红禾麻入血成分治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法 在数据库中预测入血成分和疾病相关靶点,获取两者的共有靶点并运用String数据库分析蛋白-蛋白相互作用关系。利用Metascape数据库对共有靶点进行基因功能注释(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析;建立红禾麻入血成分-靶点网络和入血成分-靶点-信号通路网络图,综合筛选关键靶点;运用AutoDock vina软件对入血成分与关键靶点进行分子对接验证。结果 红禾麻入22个血移行成分和代谢产物作用于292个疾病靶点;INS、IL-6、MAPK3及TNF等可能是红禾麻治疗RA的关键靶点,涉及对细胞氮化合物反应、激素刺激反应和有机氮化合物反应等生物过程,主要涉及的传导途径是TNF信号通路与Th17细胞分化等。分子对接结果显示,黄酮类和酚酸类可能是红禾麻治疗RA的主要活性成分,与关键靶点产生较强的亲和力。结论 红禾麻治疗RA具有“多成分、多靶点、多途径”的特点,可能的机制是红禾麻的黄酮类和酚酸类成分作用于MAPK3、PTGS2、TNF及IL-6等蛋白,并通过调节Th17和TNF等相关信号通路起治疗RA的作用。本研究可为红禾麻的深入开发和利用提供一定的参考数据。

HPLC一测多评法测定猴耳环消炎颗粒中没食子酸等3个活性成分的含量

目的:建立高效液相色谱一测多评(HPLC-QAMS)法同时测定猴耳环消炎颗粒中没食子酸等3个活性成分的含量。方法:采用HPLC法,以没食子酸为内参物,建立了杨梅苷、槲皮苷的相对校正因子,并考察相对校正因子的耐用性和重现性。结果:与外标法对猴耳环消炎颗粒中3个成分的测定结果比较发现,QAMS法各相对校正因子重复性良好,测定结果无显著差异。结论:所建立的QAMS法可用于猴耳环消炎颗粒的质量控制。

槲皮苷对PCV2感染猪肺泡巨噬细胞吞噬活性的影响

试验旨在研究槲皮苷(QUE)对正常3D4/2细胞吞噬活性及对感染猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的3D4/2细胞吞噬活性的影响。试验设置细胞对照组、0.05%DMSO对照组和不同浓度的槲皮苷药物QUE组(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0、400.0μmol/L),采用中性红法测定QUE在36 h内对3D4/2细胞吞噬活性及对感染PCV2的3D4/2细胞吞噬活性的影响。结果表明,与对照组相比,25.0μmol/L和50.0μmol/L的QUE处理后显著提高了3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.05);100.0~400.0μmol/L的QUE处理后极显著提高3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.01)。与PCV2阳性对照组相比,不同浓度的QUE (12.5~400.0μmol/L)处理36 h后均能够极显著提高PCV2感染3D4/2细胞的吞噬指数(P<0.01)。与对照组相比,100.0、200.0、400.0μmol/L的QUE极显著提高了细胞吞噬指数(P<0.01)。研究表明,QUE对3D4/2细胞具有一定的保护作用与免疫调节作用,对其吞噬活性具有良好的促进作用。

香卿止痛喷雾剂指纹图谱建立及指标成分含量测定研究

目的建立香卿止痛喷雾剂UPLC指纹图谱和HPLC含量测定方法,结合化学模式识别分析,为其质量评价提供依据。方法采用Waters CORTECS T3色谱柱(4.6 mm×50 mm,2.7μm),以0.1%磷酸水溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,检测波长220 nm,流速1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,建立10批香卿止痛喷雾剂指纹图谱并计算相似度,采用SIMCA软件进行主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析。采用Agilent 5 TC-C18(2)色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),以1%冰醋酸水溶液-甲醇为流动相,梯度洗脱,检测波长274 nm,流速1.0m L·min^(-1),柱温25℃,建立丹皮酚、槲皮苷含量测定方法。结果建立了香卿止痛喷雾剂的共有模式指纹图谱,标定19个共有峰,指认了丹皮酚、槲皮苷2个成分,10批样品相似度均大于0.99,化学模式识别分析得到丹皮酚等3个质量差异标志物,含量测定结果显示槲皮苷为3.932~4.168 mg·mL^(-1),丹皮酚为1.973~2.403 mg·mL^(-1),批次间差异趋势与化学模式识别分析结果一致。结论所建指纹图谱和含量测定方法简便可靠,可为香卿止痛喷雾剂的全面质量评价和生产过程质量控制提供参考。

鱼腥草配方颗粒提取工艺研究

目的优选鱼腥草配方颗粒提取工艺方法,生产出符合国家药品标准的鱼腥草配方颗粒。方法以槲皮苷含量、出膏率为检测指标,用正交试验设计法对鱼腥草配方颗粒的提取工艺技术进行研究。结果鱼腥草配方颗粒的最佳工艺为:温度控制80℃,提取时间2 h,提取2次,第1次加入11倍量水,第2次加入9倍量水。结论优选的提取工艺方法可行,产品质量稳定,产品符合质量标准要求,可为规范生产鱼腥草配方颗粒提供一定的参考依据。

侧柏叶标准汤剂制备及质量标准研究

目的:参照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,对15批侧柏叶饮片进行标准汤剂制备,建立特征图谱,并测定其槲皮苷含量,提供一种可靠的评价侧柏叶标准汤剂质量的方法。方法:以槲皮苷为含量指标成分,分别对15批不同产地的侧柏叶饮片标准汤剂进行测定,计算转移率和出膏率,建立高效液相特征图谱方法,同时采用液质联用技术对共有峰进行指认。结果:15批侧柏叶标准汤剂出膏范围为10.51%~20.35%,平均值为16.08%;槲皮苷含量范围为0.69%~1.12%,平均值为0.91%;槲皮苷转移率的分布范围为51.11%~67.16%,平均值为57.67%。特征图谱呈现13个特征峰,其中10个共有峰被指认,与对照特征图谱相比,侧柏叶标准汤剂的相似度均大于0.90。结论:侧柏叶饮片标准汤剂制备规范,槲皮苷含量测定与特征图谱方法可靠、准确性和重现性好,可评价侧柏叶标准汤剂的质量,也可以评价侧柏叶配方颗粒的质量。

Content Determination of Five Kinds of Flavonoids in Trichosanthes Peel

[Objectives]The purpose of this study was to establish a method for the determination of five kinds of flavonoids in trichosanthes peel.[Methods]The contents of rutin,isoquercitrin,quercitrin,quercetin and kaempferol in trichosanthes peel samples collected from different sites were determined by high-performance liquid chromatography.With each component as an index,principal component analysis and cluster analysis were performed.[Results]The contents of flavonoids in the trichosanthes peel samples from different sites were different.The cumulative variance contribution rate of isoquercitrin was 95.514%.The results of cluster analysis show that the quality of trichosanthes peel from Anhui was the best.[Conclusions]Taking isoquercitrin as a common factor to carry out content determination will help to better control the quality of trichosanthes peel.

中药砂仁中的黄酮苷化合物

目的 :研究阳春砂仁水溶性成分。方法 :各种色谱法分离纯化 ,光谱方法鉴定结构。结果 :从阳春砂仁水溶性成分中分得槲皮素的 2种黄酮苷 ,槲皮苷和异槲皮苷。结论

HPLC测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量

目的用HPLC测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量。方法采用ShimadzuC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%H3PO4水溶液(45∶55),流速1.0ml·min-1,检测波长350nm,柱温为室温,用外标法定量,测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量。结果金丝桃苷的线性范围0.50～2.50μg(r=0.9998),回收率95.90%,RSD=0.93%;槲皮苷的线性范围0.40～2.00μg(r=0.9996),回收率99.19%,RSD=2.39%。结论所建方法简便,快速,线性关系良好。

银杏叶中槲皮素黄酮苷类抗紫外线作用的研究

小鼠肝细胞接受不同剂量的紫外线照射后，线粒体的结构和功能受到不同程度的损伤，而且具有明显的剂量效应，这种损伤主要表现在脂质过氧化程度增大以及由此导致的线粒体膜流动性下降和细胞色素Ｃ氧化酶（ＣＣＯ）活力的降低。从银杏叶中提取的槲皮素黄酮苷类可以显著抑制线粒体的这种变化，从而保护紫外线引起的线粒体的结构和功能的损伤。

HPLC/DAD/MS法同时测定苗药头花蓼中3种有效成分的含量

目的:建立HPLC法测定头花蓼中没食子酸、davidiin和槲皮苷的含量。方法:采用 Alltima C_(18)色谱柱(150 mnm×4.6mm,5μm),以A:2.5%醋酸水溶液,B:水-四氢呋喃-甲醇(40:10:50)为流动相进行梯度洗脱,梯度条件如下:0 min,80:20;15 min,10:90;20 min,10:90;25 min,80:20;30 min,80:20。流速为0.6 mL·min^(-1),紫外检测波长为270 nm。离子源APCI,扫描模式负离子。结果:没食子酸、davidiin和槲皮苷的线性范围(n=6)分别为0.017～2.28 μg(r=0.9999),0.05～2.50μg(r=0.9999),0.16～5.10 μg(r=0.9999);平均回收率(n=9)分别为98.0%,99.6%,98.5%。提取方法为80%乙醇冷浸12 h后超声30 min。结论:本方法简便、准确,可为评价不同产地的头花蓼质量提供依据。

桑叶中黄酮类成分的含量测定

目的:建立了不同产地桑叶药材中黄酮类成分(芦丁,槲皮苷)的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为 Merck RP-C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),流动相采用甲醇-0.5%的磷酸溶液梯度洗脱,检测波长358nm,流速1mL·min^(-1),柱温:25℃。结果:芦丁在0.10～1.01μg之间、槲皮苷在0.06～0.60μg之间有良好的线性关系。结论:本法操作简便,检测灵敏,有很好的重复性和稳定性,能一次性测定桑叶中2种有效成分的含量,为桑叶的质量控制提供了很好的依据。

高效液相色谱法测定萹蓄中金丝桃苷等3种有效成分的含量

目的 用高效液相色谱法测定萹蓄中金丝桃苷、槲度苷与木樨草素的含量。方法 采用Shimadzu C18柱（150mm×4．6mm，51μm），流动相为甲醇-0．2％H3PO4溶液（45：55），流速1．0ml·min^-1，检测波长350nm，柱温室温，用外标法定量，同时测定萹蓄中金丝桃苷与槲皮苷的含量；再采用Shimadzu C18柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．2％H3PO4溶液（50：50），流速1．0ml·min^-1，检测波长254nm，柱温室温，用外标法定量，测定萹蓄中木樨草素的含量。结果 金丝桃苷的线性范围0．50-2．50μg，r=0．9998，回收率为95．13％，RSD为2．9l％；槲皮苷的线性范围0．40-2．00μg，r=0．9996，回收率为96．49％，RSD为2．77％；木樨草素的线性范围0．0325-0．39μg，r=0．9999，回收率为95．75％．RSD为2．49％。结论 该方法简便，快速，线性关系良好，可作为萹蓄的含量测定。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与槲皮苷的含量

目的用高效液相色谱法测定水红花子中芦丁与槲皮苷的含量。方法芦丁的含量采用ShimadzuC_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.05%H_3PO_4溶液(42:58),流速1.0mL·min^(-1),检测波长254nm,柱温25℃,用外标法定量;采用ShimadzuC_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%H_3PO_4溶液(45:55),流速1.0mL·min^(-1),检测波长350nm,柱温室温,用外标法定量,测定槲皮苷的含量。结果芦丁的线性范围0.053～0.53μg,r=0.9999;槲皮苷的线性范围0.40～2.00μg,r=0.9996。结论该方法简便,快速,线性关系良好。