PPP2R5C对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响

目的探讨蛋白磷酸酶2调节亚基B′γ(protein phosphatase 2 regulatory subunit B′gamma,PPP2R5C)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞增殖、凋亡和药物敏感性的影响。方法利用qRT-PCR和Western blot检测PPP2R5C在人MM细胞系(MM1S、RPMI-8226细胞系)和正常外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的表达水平。在MM1S细胞中分别转染PPP2R5C干扰siRNA(si-PPP2R5C组)及其阴性对照-siRNA(si-CTRL组)、PPP2R5C过表达质粒(OE-PPP2R5C组)及其阴性对照(OE-CTRL组),利用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。用不同浓度硼替佐米(bortezomib,BTZ)处理si-PPP2R5C组和si-CTRL组细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。用1 nmol/L的BTZ干预si-PPP2R5C组和si-CTRL组细胞24 h后,采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中BCL-2和BAX的表达水平,Caspase 3/7活性检测试剂盒检测Caspase 3/7活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果相较于PBMC细胞,MM1S、RPMI-8226细胞在mRNA和蛋白水平上均高表达PPP2R5C(均P<0.001)。与si-CTRL组相比,si-PPP2R5C组在培养48 h、72 h后细胞增殖活力均受到抑制(均P<0.001),凋亡率明显增加(5.97%vs 14.39%,P<0.001)。与OE-CTRL组相比,OE-PPP2R5C组在培养48 h、72 h后细胞增殖活力均增强(均P<0.01)。si-PPP2R5C组BTZ的IC50值相比si-CTRL组显著下降(3.40 nmol/L vs 10.37 nmol/L,P<0.001)。si-PPP2R5C+BTZ组相比于Control组和si-CTRL+BTZ组,BCL-2的mRNA和蛋白水平均下降,而BAX的mRNA及蛋白水平、Caspase3/7活性和细胞凋亡率则增加(均P<0.05)。结论PPP2R5C在MM细胞系中显著高表达,敲低PPP2R5C表达后可抑制MM细胞增殖并促进凋亡,以及增强BTZ的药物敏感性。

1961-2007年三峡库区极端降水指数R5d的变化规律及其未来情景预估

利用1961-2007年三峡库区17个气象站的日降水资料,研究了近47a来三峡库区极端降水指数——最大连续5d降水(R5d)的变化规律,通过评估用于政府间气候变化委员会第四次评估报告的9个新一代气候系统模式产品对三峡库区最大连续5d降水的模拟能力,筛选出5个模拟较好的模式(GFDL-CM2.1、INM-CM3.0、IPSL-CM4、MIROC3-H和NCAR-PCM1)进行组合,并考虑模式的偏差,预估3种排放情景(高排放SRESA2、中等排放SRESA1B和低排放SRESB1)下21世纪三峡库区最大连续5d降水的可能变化。结果表明,近47a来,三峡库区最大连续5d降水量的线性变化趋势不显著,但有显著的2a和5a左右的年际变化周期;从逐年代变化来看,20世纪60年代和2001-2007年偏少,70年代、80年代和90年代偏多。与目前气候(1980-1999年)相比,21世纪3种不同排放情景下三峡库区最大连续5d降水量均可能增加,尤其是21世纪后期比前、中期增加更显著;21世纪前期,3种情景下将增加0.5～5.4mm,中期将增加9.3～14.8mm,后期将增加12.7～26.4mm,整个21世纪将增加9.5～14.7mm。

胃腺癌细胞中miR-23a靶基因PPP2R5E的鉴定

目的利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证mi R-23a的靶基因PPP2R5E。方法选取表达绿色荧光蛋白的质粒pc DNA3/EGFP,将PPP2R5E-3’UTR的特异性序列插入其中,并与红色荧光蛋白表达质粒p Ds Red2-N1及表达mi R-23a的质粒共同稳定转染胃腺癌细胞MGC803,稳定转染后提取细胞蛋白,荧光分光光度计进行定量检测。并通过半定量RT-PCR、实时定量PCR检测mi R-23a功能受抑制或过表达mi R-23a的MGC803细胞或胃腺癌组织中PPP2R5E基因m RNA的表达情况,验证mi R-23a对其调控作用。表达si RNA抑制MGC803中PPP2R5E m RNA的表达后,通过MTT和平板克隆形成实验观察其对胃腺癌细胞系MGC803细胞活性和克隆形成能力的影响。结果绿色荧光蛋白的表达量,稳定转染pc DNA3/EGFPPPP2R5E-3’UTR质粒和mi R-23a质粒组明显低于pc DNA3/EGFP-PPP2R5E-3’UTR和pc DNA3共同稳定转染组。mi R-23a功能受抑制的胃腺癌细胞MGC803中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平升高;相反,过表达mi R-23a的胃腺癌细胞MGC803及胃腺癌组织中靶基因PPP2R5E的m RNA表达水平下降。沉默MGC803细胞中的PPP2R5E后,细胞活性和克隆形成能力均加强。结论 PPP2R5E可能是mi R-23a的直接靶基因。

胆汁酸衍生物INT-767激活FXR及TGR5降低小鼠动脉粥样硬化风险

目的探讨胆汁酸衍生物INT-767激活FXR及TGR5及其对小鼠动脉粥样硬化风险的影响。方法选取8周龄载脂蛋白(Apo)E-/-和低密度脂蛋白(LDL)R-/-的C57BL/6J小鼠分别用含INT-767(30 mg/kg)高纯度饲料(D12079B)喂养12 w和16 w,收集样本后进行组织生化分析(主动脉窦组织生化分析),对CD68和MCP1进行免疫荧光检测,血清样本进行快速蛋白液相色谱分析;血清胆汁酸水平通过q TRAP LC-MS/MS法检测。血清炎性细胞因子水平通过酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测。采用电泳迁移率实验(EMSA)测定核转录因子(NF)-κB与DNA的结合活性。结果 INT-767可降低Apo E-/-和LDLR-/-小鼠血清胆固醇和甘油三酯水平,抑制肝CYPB1表达下调血清胆酸和去氧胆酸水平,从而抑制LDLR-/-和APOE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成、降低Apo E-/-小鼠巨噬细胞浸润和炎症水平;INT-767主要是通过激活TGR5降低巨噬细胞细胞因子表达水平。结论胆汁酸的类似物INT-767可通过双激活TGR5和FXR调控靶基因,降低和减缓动脉粥样硬化的风险。

PPP2R5C基因结构特点和生物学功能

PPP2R5C是蛋白磷酸酶2A的调节性亚单位中一个家族成员,它在调节细胞增殖、分化和转化等方面具有重要作用,其作用主要通过对P53蛋白某些位点氨基酸的去磷酸化而实现。近期研究提示,PPP2R5C基因表达模式的改变与细胞恶性转化相关;此外,有研究发现PPP2R5C可以作为B-CLL病情进展的相关标记。本文就PPP2R5C基因结构、生物学功能及PPP2R5C基因与肿瘤发生发展的关系进行了探讨。

PPP2R5C转录本在正常人和血液肿瘤病人中的分布情况

目的:建立分析不同PPP2R5C转录本检测方法,分析正常人和血液肿瘤病人中5种PPP2R5C基因转录本的表达特点。方法:根据PPP2R5C基因的结构特点,设计4对引物,利用RT-PCR方法分析9例正常人、7例T细胞-非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)、11例B细胞-急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和8例急性髓细胞白血病(AML)病人外周血单个核细胞(PBMC)中PPP2R5C基因的表达情况。结果:所设计的4对引物,均可在样本中扩增到预期PCR产物,其中第1对引物可扩增两个不同大小PCR产物(包含12+13+14外显子的大片段及仅含12+14外显子的小片段),而另3对对引物所扩增的产物分别为10+11+12+12 a外显子,Ⅲ+2外显子和Ⅳ+2外显子的基因片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。结果显示所有样本均表达全部PPP2R5C转录本。结论:初步建立区分不同PPP2R5C转录本的方法,各转录本在正常人和不同血液肿瘤病人中的分布情况基本一致。

藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的影响

目的研究藁本内酯抑制AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移的有效浓度及时间。方法采用MTT比色法测定藁本内酯对细胞的毒性;将A7r5细胞铺在6孔板并进行培养,待密度达到70%~80%后,用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验评估藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移能力的变化,不同浓度（0、2.5、5、10μg/m L）的藁本内酯作用于A7r5细胞,于0、6、12、24 h观察细胞迁移情况,拍照记录,计算细胞迁移速度。结果藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移有明显的抑制作用,在0~10μg/m L浓度范围内呈剂量依赖关系,浓度越高其抑制细胞迁移越明显。同一浓度不同作用时间藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）;同一时间不同浓度的藁本内酯对AngⅡ诱导的A7r5细胞迁移抑制作用差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论藁本内酯能抑制A7r5细胞的迁移,终质量浓度为10μg/m L藁本内酯作用于1μg/m L AngⅡ诱导的A7r5细胞12 h,其对A7r5细胞迁移抑制作用最明显。

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关调控基因表达谱的影响

目的利用基因芯片技术研究RNA干扰下调PPP2R5C对Jurkat细胞中GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关基因表达的影响。方法利用核转染技术将PPP2R5C-si RNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化m RNA后反转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3’IVT杂交,以Affymetrix Gene Chip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene Spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果基因芯片分析GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53信号通路相关的47个基因,发现全部基因发生了差异表达,其中上调基因有22个,下调基因有25个。明显上调的基因有SNAI1、APC、CDKN1A、ATM、MDM2和pTEN,而明显下调的基因只有GSK-3β。结论下调Jurkat细胞PPP2R5C基因时,在一定程度上选择性调节涉及细胞增殖和凋亡相关的GSK-3β、MDM2、pTEN和TP53信号通路基因的表达,从而抑制Jurkat细胞增殖。

IL-10对AngⅡ诱导的A7r5细胞增殖的抑制作用

目的探讨IL-10对A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及其与p53、bcl-2的变化关系。方法用MTT法测定细胞抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;细胞免疫组化法和Western bolt观察细胞内p53、bcl-2基因的表达。结果 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,但不呈剂量依赖关系;可逆转p53、bcl-2的表达。结论 IL-10对AngⅡ诱导的A7r5平滑肌细胞增殖有明显防治作用,与细胞凋亡基因p53、bcl-2相关。

Lotus Domino/Notes R5与Web技术的集成

本文介绍了 L otus Domino/ Notes R5的应用技术、Web应用结构、新的 domino Web特性以及与 Web技术的集成。

高温结构完整性评定规程R5的现状与技术进展

为了保证高温气冷堆的长期连续可靠运行及电站延寿的需要,英国能源公司从20世纪80年代的中央电力局(CEGB)时期开始一直致力于高温部件结构完整性评定技术的研究与发展,其成果均反映在该公司的内部规程——结构高温响应评定规程(R5)中。本文扼要介绍R5规程的发展历史与现状,包括所采用的基本技术以及目前的研究动向和发展规划。

高温结构完整性评定规程R5的最新进展和发展趋势

R5规程是一种评定高温部件结构完整性的方法,其主要用于避免无缺陷部件和含缺陷部件的蠕变断裂失效,R5规程常用于蠕变范围运行的先进气冷堆(AGR)组件的结构完整性评定,也用于其他领域高温装置的结构完整性评定。R5的最新版本为2014年修订的R5第3版修订版002。主要介绍2016~2020年已经和即将开展的R5研发工作,涉及R5评定技术在近5年内要改进的所有领域,主要包括对现有评定方法的改进、细化、验证及发展新的评定方法,这些工作完成后现有版本将更新为第4版。

WCDMA R5核心网络体系结构的改进

软交换是WCDMAR4、R5核心网络的重要技术特征。本文针对现有软交换体系结构的某些不足提出了一些改进措施 ,采用这种方案能够使基于软交换体系结构的核心网络具有更好的模块性 ,便于网络的实现和演进。

基于单片机R5F212A7SNFA和HT1650的液晶显示系统设计

根据液晶驱动模块HT1650的性能及结构,结合瑞萨单片机R5F212A7SNFA,论述一种家电液晶显示系统的设计,重点阐述了该系统的硬件构成和软件设计过程,并给出了硬件接口框图和软件流程图。该液晶显示系统具有硬件电路简单可靠、显示稳定、功耗低、界面友好、程序编写简单等优良性能,在实践中已取得很好的应用效果。

同型半胱氨酸对A7r5细胞增殖及MMP-9表达的影响

观察同型半胱氨酸(Hcy)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。0.25、0.50和1.00 mmol/LHcy分别作用A7r5细胞48 h,倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;RT-PCR检测MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-9蛋白的表达。随着Hcy浓度的升高,细胞数目逐渐增多,体积增大,生长旺盛,呈增殖表现。不同浓度Hcy处理组MMP-9 mRNA及蛋白的表达均逐渐增加,各实验组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。同时显示正常对照组中MMP-9表达相对较少,为(3.60±1.42)%、(1.60±0.82)%。Hcy能促进A7r5细胞增殖,正常A7r5细胞中MMP-9表达较少;Hcy可诱导A7r5细胞MMP-9的表达,这一效应可能是Hcy致心血管疾病的分子机制之一。提示MMP-9可能成为干预心血管疾病的靶点。

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞TAL1相关调控基因表达谱影响的初步分析

目的:前期研究显示,下调PPP2R5C表达能抑制T细胞白血病细胞株Jurkat细胞增殖。本研究利用基因芯片技术分析RNA干扰下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞中TAL1通路相关基因的影响。方法:利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix Gene Chip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果:基因芯片分析的TAL1信号通路相关的26个基因全部发生了差异表达,其中上调表达的基因有15个,下调表达的基因有11个;明显上调表达的基因有GATA1、TCF4、XRCC6和TCF3,而明显下调表达的基因有SIN3A和RUNX1。结论:下调Jurkat细胞PPP2R5C基因表达,在一定程度上能抑制TAL1信号通路基因,从而抑制Jurkat细胞增殖。

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞A7r5基因表达谱的影响

目的探讨去甲肾上腺素刺激后A7r5血管平滑肌细胞基因表达谱的改变。方法应用放射配体结合实验明确A7r5细胞上肾上腺素受体(AR)的表达。采用基因芯片技术观察去甲肾上腺素引起的血管平滑肌细胞基因表达谱的变化。用荧光实时定量PCR验证α1A-AR,α1B-AR的mRNA表达变化。结果A7r5细胞中有α1-AR和β-AR表达,其最大结合容量(Bmax)分别为(450±118)fmol/mg蛋白和(174±25)fmol/mg蛋白。去甲肾上腺素刺激细胞24h后,有75个基因表达发生明显改变,其中涉及细胞结构、防御、代谢及信号转导等多方面的基因。荧光实时定量PCR结果显示去甲肾上腺素刺激细胞24h后α1A-AR和α1B-AR的mRNA表达增加,与基因芯片的结果一致。结论去甲肾上腺素激动AR引起A7r5血管平滑肌细胞多种不同功能的基因表达发生改变,提示在血管平滑肌中AR可能通过基因水平的调控而介导多种生物学功能。

PPP2R5C与儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞活性及Hsp90-GR信号关系的研究

目的:探讨PPP2R5C对儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞活性的影响及其相关机制。方法:通过靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(si RNA)技术下调Molt-4细胞中PPP2R5C的表达,同时设置空白对照组、阴性对照组及17-DMAG组,其中阴性对照组转染si RNA-NC,17-DMAG组使用终浓度为6.4μmol/L的热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-DMAG处理细胞48 h,采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测转染效率;CCK-8法检测各组细胞增殖活性,Ed U检测各组细胞增殖水平,流式细胞术检测各组细胞周期分布比例,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,RT-q PCR和Western blot检测各组细胞中HSP90和糖皮质激素受体(GR)的表达变化。结果:Molt-4细胞转染si RNA-PPP2R5C后,细胞中PPP2R5C m RNA与蛋白表达均明显下调,与空白对照组和si-NC组相比有显著性差异(P<0.05);相比空白对照组和si-NC组,si RNA-PPP2R5C组和17-DMAG组细胞的增殖活性明显降低(P<0.05),Ed U阳性细胞率明显减少(P<0.05),G1期细胞比例减少而G2期细胞比例增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增加(P<0.05);此外,si RNA-PPP2R5C组细胞中,PPP2R5C m RNA与蛋白表达较空白对照组和si-NC组明显下调(P<0.05),17-DMAG组细胞中PPP2R5C m RNA与蛋白表达较空白对照组和si-NC组也明显下调(P<0.05)。结论:下调PPP2R5C基因表达可抑制儿童急性T淋巴细胞白血病Molt-4细胞的活性,使细胞发生G2期阻滞,并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Hsp90-GR信号途径相关。

子宫内膜癌PPP2R5A及c-Myc表达与预后的临床关系

目的探讨PPP2R5A与c-Myc在子宫内膜癌(EC)中的表达,确定两者表达强度及其与患者预后的临床关系。方法运用免疫组织化学法检Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常增生期各12例中子宫内膜组织PPP2R5A与C-myc的表达,分析PPP2R5A、c-Myc蛋白的表达强度与子宫内膜癌临床指标的关系及对子宫内膜癌预后的影响。结果PPP2R5A在Ⅱ型子宫内膜癌表达强度较其他3组高,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ型及不典型增生表达强度较正常增生期子宫内膜组织中表达稍强,差异无统计学意义(P>0.05);c-Myc在Ⅱ型EC表达强度较其他3组强高,与正常增生组和不典型增生组相比,差异有统计学意义(P<0.05),与Ⅰ型EC相比,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ型EC较正常增生组、不典型增生组表达高,差异有统计学意义(P<0.05);PPP2R5A及c-Myc在Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜癌组织中,PPP2R5A表达与年龄、FIGO分期、淋巴脉管间隙受侵、淋巴结转移情况比较,差异无统计学意义(P>0.05),与组织学分级比较,差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc的表达与年龄、FIGO分期比较,差异无统计学意义(P>0.05),与组织学分级、淋巴脉管间隙受侵、淋巴结转移情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPP2R5A高表达和c-Myc高表达是影响子宫内膜癌临床进展和预后的独立因素,PPP2R5A对子宫内膜癌特别是Ⅱ型EC的预后和发展过程有一定的提示意义,c-Myc在肿瘤细胞的发生发展过程中发挥着重要作用,通过检测PPP2R5A和c-Myc的表达能够更加有效地评估子宫内膜癌患者的预后。