HSV-1即刻早期基因的5′UTR对报告基因mRNA翻译的影响

mRNA疫苗的5′非翻译区(5’untranslated regions,5′UTR)对其表达起着重要作用,报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)用于检测5′UTR调控mRNA表达已经是一个较为成熟的实验方法.为研究单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)即刻早期基因的5′UTR作为报告基因EGFP mRNA的5′UTR对其翻译的影响,本研究将4个即刻早期基因的5’UTR以及表达能力较强的人β珠蛋白基因(humanβGlobin,hBg)5′UTR插入报告基因EGFP 5’端,通过观察绿色荧光强度研究不同即刻早期基因5′UTR对mRNA翻译的影响.结果表明:经mRNA转染试剂和纳米脂质体颗粒分别递送进293T细胞和小鼠体内;RL2的5′UTR作为报告基因EGFP 5′UTR的表达水平与hBg 5′UTR相近,RS1、US1、US12表达水平明显弱于hBg 5′UTR.因此,RL2基因的5′UTR有潜力作为mRNA疫苗的5′UTR.

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

椎管内麻醉后CD老年患者S100β、H-FABP、NLRP3mRNA、Caspase-1 mRNA表达意义

目的分析老年髋关节置换术(THA)患者椎管内麻醉后认知功能障碍(CD)发生的危险因素及中枢神经特异蛋白(S100-β)、核苷酸结合寡聚化域受体蛋白3信使核糖核酸(NLRP3 mRNA)、中心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、天冬氨酸蛋白水解酶1信使核糖核酸(Caspase-1 mRNA)对其预测价值。方法将椎管内麻醉后发生CD的40例老年THA术患者纳入A组,另选取未发生CD的68例老年THA术患者纳入B组。比较两组临床资料、S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA,危险因素采用多因素Logistic回归分析法进行分析,S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA对老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果A组年龄大于B组,差异有统计学意义(t=13.674,P<0.05);有糖尿病、术中低血压的患者占比均高于B组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.643、17.767,P<0.05)。A组血清S100-β、NLRP3 mRNA、H-FABP、Caspase-1mRNA表达均高于B组,差异有统计学意义(t=14.571、21.691、80.159、23.572,P<0.05)。老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素包括年龄大、糖尿病、术中低血压、血清S100-β、H-FABP、水平、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA高,差异有统计学意义(P<0.05)。S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA联合检查预测老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的曲线下面积(AUC)为0.915高于单一检测(P<0.05)。结论年龄大、糖尿病、术中低血压均为老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素,且S100-β、H-FABP、NLRP3 m RNA、Caspase-1 mRNA联合检测对CD的预测价值较高。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

一种新型1型单纯疱疹病毒mRNA疫苗的制备

制备用于防治1型单纯疱疹病毒感染的新型mRNA疫苗,并检测其免疫效果。利用同源重组技术构建HSV1糖蛋白gD胞外域(HSV1-gD^(Ectodomain))重组质粒,经PCR反应扩增HSV1-gD^(Ectodomain)基因模板,体外转录反应得到HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA,利用LNP包封HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA得到mRNA-LNP疫苗复合物,小鼠大腿肌肉接种mRNA-LNP疫苗复合物。ELISA法检测小鼠血清HSV1-gD抗体效价;TCID50法检测HSV1-gD血清中和效价。结果显示:经HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA疫苗接种后,小鼠血清抗体滴度达到1∶12800,中和实验表明抗体可保护Vero细胞不受HSV1病毒感染。成功制备一种新型HSV1 mRNA疫苗,用其接种小鼠可诱导产生特异性免疫应答,并具有良好的保护作用。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。

牙周组织再生术联合替硝唑对慢性牙周炎患者Notch1 mRNA表达影响及疗效观察

目的分析牙周组织再生术与替硝唑联合治疗慢性牙周炎(CP)对患者Notch1 mRNA表达的影响。方法选取丽水市人民医院CP患者130例,根据随机数字表法将其分为对照组(n=65)和观察组(n=65),两组均接受常规治疗,对照组开展牙周组织再生术治疗,观察组开展牙周组织再生术和替硝唑联合治疗,比较两组牙周袋深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、临床附着水平(CAL)、菌斑指数(PLI)的变化,Notch1 mRNA表达、Th17细胞、IL-17水平的变化,以及视觉模拟评分(VAS)、临床疗效、不良反应等。结果治疗后,两组患者PD、SBI、CAL、PLI指数均降低,与对照组相比,观察组PD、SBI、CAL、PLI指数降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平均降低,与对照组相比,观察组治疗后Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组VAS均有所降低,与对照组相比,观察组VAS降低(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗后总有效率高,具有统计学差异(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗不良反应略高,但无统计学差异(P>0.05)。结论对CP患者开展牙周组织再生术与替硝唑联合治疗,可降低Notch1 mRNA表达以及疼痛程度,对临床症状治疗效果显著,可以推广使用。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠Raf-1mRNA和蛋白表达的影响

目的研究不同剂量镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)心血管组织Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达的影响。方法将50只24周龄SHR随机分为模型对照组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组、阳性对照组,每组10只,同源雄性魏-凯二氏大鼠(WKY)10只作为正常对照组。灌胃给药5周后,Western Blot法测定心血管组织Raf-1蛋白表达,实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定大鼠Raf-1 mRNA基因表达。结果与模型对照组比较,其他各组大鼠Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达均明显升高(F=1 139.282,sig=0.000,P<0.01)。结论镇肝熄风汤可促进SHR心血管细胞Raf-1蛋白和Raf-1 mRNA表达,刺激细胞增殖和分化,抑制细胞凋亡。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

食管鳞癌外周血细胞PD-L1、PD-1及TCF-1 mRNA表达与预后的关系

目的探讨外周血细胞中程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体(PD-1)及TCF-1 mRNA变化及其在食管鳞癌(ESCC)诊断和预后中的价值。方法回顾性分析2019年1月至2019年12月间河南科技大学第一附属医院临床医学院肿瘤医院病理确诊的91例ESCC患者和63例非癌对照外周血细胞中PD-L1、PD-1和TCF-1的mRNA表达变化,并通过ROC曲线分析诊断ESCC效能。Log-rank检验确定不同组别生存曲线差异,确定PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA表达与总生存期相关性。结果ESCC患者外周血细胞中PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA显著高于非癌对照者(P<0.05),其诊断ESCC的敏感性和特异性分别为0.58/0.68、0.92/0.64和0.95/0.58,AUC分别为0.66、0.84和0.78,且这3个mRNA分子表达呈正相关。PD-L1、PD-1、TCF-1 mRNA高表达的ESCC患者总生存期明显高于低表达者(P<0.05)。结论PD-L1、PD-1和TCF-1是ESCC潜在的诊断和预后生物标志物分子。

Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值

目的探讨Fascin⁃1 mRNA联合肿瘤标志物对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后的评估价值。方法选取2018年2月至2021年7月于淮南东方医院集团总院接受手术治疗患者97例作为研究对象,术后检测患者血清Fascin⁃1 mRNA、糖类抗原199(CA199)、肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)水平,术后随访12个月。根据是否发生淋巴结转移分为淋巴结转移组(n=34)与无淋巴结转移组(n=63),比较两组血清Fascin⁃1 mRNA、CA199与CEA表达水平;根据随访12个月患者生存情况分为死亡组(n=37)与生存组(n=60),比较两组临床资料与Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA水平,进行单、多因素分析,绘制ROC曲线检验Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移与生存预后的诊断效能。结果淋巴结转移患者血清CA199、CEA与Fascin⁃1 mRNA表达水平均高于无淋巴结转移患者,差异具有统计学意义(t=4.299、4.271、4.492,P<0.05);死亡组与生存组患者肿瘤大小、TNM分期、术后是否接受化疗、有无淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA水平比较差异具有统计学意义(χ^(2)=5.167、5.167、2.428、9.488,t=4.360、4.497、6.993,P<0.05);多因素logistic回归分析结果显示淋巴结转移、CA19⁃9、CEA、Fascin⁃1 mRNA表达水平为结直肠腺癌患者术后12月生存预后独立影响因素(P<0.05);ROC曲线结果显示Fascin⁃1 mRNA联合CA199、CEA检测均对术后淋巴结转移和生存预后的AUC分别为0.940、0.989,敏感度分别为0.882、0.946,特异度分别为0.857、0.983。结论Fascin⁃1 mRNA、CA199、CEA对结直肠腺癌患者术后淋巴结转移和生存预后具有良好的预测价值,三项指标联合可提高预测价值。

高危型HPV阳性患者中HPVL1蛋白的表达及临床意义

探讨HPV-L1蛋白在宫颈细胞学高危型HPV阳性患者中的表达及临床意义。方法 选取187例高危型HPV阳性宫颈液基细胞学标本,其中未见上皮内瘤样病变及恶性细胞(NILM)40例,非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)68例、低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)39 例、非典型鳞状上皮细胞-不除外高度(ASC-H)13例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)24例、鳞状细胞癌(SCC)3例,用赛泰(CytoReact?)免疫组织化学染色检测 HPV L1 蛋白的表达,187例样本中同时具有宫颈细胞学和病理学诊断结果的111例。同时将细胞学诊断与病理诊断相对照。 结果 不同细胞学诊断患者HPV L1蛋白阳性表达率分别为NILM 5%、ASC-US 48.5%、LSIL 61.5%、ASC-H 8%、HSIL 0%、SCC 0%,比较差异显著,有统计学意义(χ2=36.100,P<0.01);不同病理学诊断患者HPV L1蛋白阳性率分别为:炎症66.6%、CIN 1 50%、CIN 2 10%、CIN 3 9%、SCC 0%,比较差异显著,有统计学意义(χ2=22.285,P<0.01)。随着病变级别的增加,HPV L1的表达逐渐下降。结论 HPV L1蛋白表达缺失和高危型人乳头瘤病毒感染的持续存在是ASC-US和LSIL患者进展为CIN2及以上病变的可靠预测因子。

FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变严重程度的关系研究

目的 研究线粒体分裂蛋白1(FIS1)mRNA、人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变严重程度的关系。方法 收集张家口市妇幼保健院2021年1月-2021年7月行宫颈癌筛查的5666例标本,经宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)诊断285例不典型鳞状细胞(ASC)、183例鳞状上皮内低度病变(LSIL)、98例鳞状上皮内高度病变(HSIL)、10例宫颈癌;经病理活检诊断356例未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)、218例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ级、42例CINⅡ级、24例CINⅢ级、15例宫颈鳞状细胞癌。分别参考TCT、病理活检诊断结果分析不同宫颈病变程度的FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA阳性检出率与表达量。通过Pearson分析FIS1 mRNA与HPV E6/E7 mRNA阳性表达与宫颈病变严重程度的相关性。结果 以TCT不同诊断级别为参考,FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对LSIL、HSIL、宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于ASC(P<0.05)。FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于LSIL(P<0.05)。FIS1 mRNA拷贝数:宫颈癌、HSIL<LSIL<ASC(P<0.05);HPV E6/E7 mRNA拷贝数:宫颈癌>HSIL>LSIL>ASC(P<0.05)。以病理活检结果为诊断标准,FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达对CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞状细胞癌的阳性检出率高于ASCUS、CINⅠ级(P<0.05);FIS1 mRNA拷贝数:宫颈鳞状细胞癌、CINⅢ级<CINⅡ级<CINⅠ级<ASCUS(P<0.05);HPV E6/E7 mRNA拷贝数:宫颈鳞状细胞癌>CINⅢ级>CINⅡ级>CINⅠ级、ASCUS(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,宫颈病变严重程度与FIS1 mRNA表达量呈显著负相关性(r=-0.881,P<0.05),与HPV E6/E7 mRNA表达量呈显著正相关性(r=0.903,P<0.05)。结论 FIS1 mRNA、HPV E6/E7 mRNA表达水平与宫颈病变程度存在显著相关性,宫颈病变程度越严重,FIS1mRNA表达量呈降低趋势,而HPV E6/E7 mRNA表达量呈上升趋势。

小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1介导Foxp1 mRNA降解机制初探

目的 探究小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1对Foxp1 mRNA转录后的调控作用。方法 培养3T3-L1前脂肪细胞,采用鸡尾酒法诱导其分化为成熟脂肪细胞,分别收取第0天和第4天样本进行RNA测序筛选出差异倍数(FC)>2的转录因子;提取第0、1、2、3、4天细胞总RNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验验证。RBPDB数据库预测Foxp1的RNA结合蛋白。转染空载体质粒和STAU1过表达质粒后将细胞分为对照组和STAU1过表达组,提取第0、12、24、36、48小时细胞总RNA。利用RT-qPCR及Western-Blot实验检测两组3T3-L1细胞STAU1过表达效率、分化过程中Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平。10只雄性2~3周龄C57BL/6小鼠的腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue, iWAT)分离培养的血管基质部分(Stromal vascular fraction, SVF)细胞,鸡尾酒法诱导分化,感染慢病毒,利用免疫荧光实验检测SVF细胞中Foxp1的蛋白质表达水平,用catRAPID软件进行预测。RNA免疫共沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测STAU1与Foxp1 mRNA 3′非翻译区(3′un-translated region, 3′UTR)STAU1结合位点(Staufen binding site, SBS)的结合情况。转染质粒24 h后加入放线菌素D,提取第0、1、2、4、6、8小时细胞总RNA,利用RT-qPCR实验检测两组3T3-L1细胞STAU1对Foxp1 mRNA稳定性的影响。结果 经RNA-seq筛选出5个表达上调和5个表达下调的转录因子;RT-qPCR验证结果显示,在成脂过程中Foxp1 mRNA的表达逐渐下降,Pparγ mRNA的表达逐渐上调;RBPDB数据库结果显示,STAU1是Foxp1的RNA结合蛋白;与对照组比较,STAU1过表达组STAU1的mRNA和蛋白质表达水平显著升高(P<0.05),Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,与对照组比较,STAU1过表达组中Foxp1相对荧光强度降低(P<0.05);RNA免疫沉淀实验后的PCR验证结果显示,STAU1与Foxp1 mRNA 3′UTR的6 714~7 000 bp存在结合;与对照组比较,STAU1过表达组Foxp1的mRNA稳定性显著下降(P<0.05)。结论 STAU1通过结合在Foxp1 mRNA 3′UTR上,启动STAU1介导的mRNA降解途径(Staufen-mediated decay, SMD)降解其mRNA,下调Foxp1的mRNA表达水平。

百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响

目的:观察百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效及对Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体水平的影响。方法:采用随机数字表法将80例糖尿病肾病患者分成观察组和对照组。对照组予达格列净治疗,观察组同时联合百令胶囊治疗。经连续治疗3个月,比较两组治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾功能指标[肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(Scr)、24 h尿微量白蛋白]、NLRP3炎性小体、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)mRNA、炎性因子[肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)]水平变化,统计两组治疗总有效率,评价治疗安全性。结果:治疗后,两组FPG、2 h PG、HbA1c水平,Scr、eGFR、24 h尿微量白蛋白水平,Caspase-1mRNA、NLRP3炎症小体表达水平,TNF-α、IL-1β、hs-CRP水平均明显低于治疗前(P<0.05),且观察组治疗以上指标水平均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率为92.5%,优于对照组(75.0%)(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:百令胶囊联合达格列净治疗糖尿病肾病疗效显著,能够有效控制血糖水平,减少24 h尿蛋白,改善患者肾功能,治疗机制可能与抑制炎症反应、降低NLRP3炎症小体水平有关。

烯醇化酶1通过影响mRNA定位调节人胚胎干细胞自我更新能力

目的探究烯醇化酶1(ENO1)的表达对维持人胚胎干细胞(hESCs)自我更新能力的影响,并揭示其机制。方法预测与ENO1结合的RNA和蛋白质,并进行GO富集分析。在hESCs中通过shRNA抑制ENO1内源表达,集落形成实验及碱性磷酸酶染色(AP)检测hESCs的集落形成能力,荧光定量PCR检测hESCs的多能性及分化标志基因的表达变化,RNA荧光原位杂交技术检测带有polyA尾的RNA的定位变化。结果抑制ENO1的内源表达后,hESCs的集落形成能力得到了显著抑制(P<0.05),同时分化标志基因表达水平升高(P<0.001),带polyA尾的RNA的定位由分散在细胞质中变为集中在核内(P<0.001)。结论ENO1通过影响mRNA在细胞内的定位调控hESCs自我更新能力。

从Raf-1/ERK/CREB信号通路探讨枢经推拿对慢性神经病理性疼痛大鼠的镇痛机制

分析对神经病理性疼痛大鼠Raf-1/ERK/CREB信号通路予以枢经推拿的效果。方法 对60只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、CCI组、假推拿组、推拿组,每组各12只。CCI组、假推拿组、推拿组大鼠经7天预饲养后建立坐骨神经慢性压迫(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型模拟神经病理性疼痛,正常组不予处理,假手术组模拟CCI造模但只暴露脊神经,不予接扎。在造模后第7天开始对推拿组每天进行推拿干预,假推拿组每天进行抚摸大鼠。检测造模后第3、7、14、21天这4个时间点各组大鼠的机械痛阈值和热痛阈值以明确推拿镇痛效果;分别在造模后第14、21天对各组大鼠随机各取6只大鼠进行处死取材;采用PCR检测各组大鼠脊髓背角及大脑灰质顶叶区的Raf-1、ERK、CREB的基因表达情况,采用Westernblot法检测各组大鼠Raf-1、ERK、CREB的蛋白表达情况。结果:在大鼠脊髓背角上,术后14天CCI组大鼠的Raf-1、ERK、CREB、均高于正常组和假手术组;推拿干预后推拿组的Raf-1、ERK、CREB均低于CCI组和假推拿组;但在造模后第21天,各组大鼠间的Raf-1、ERK、CREB差异无统计学意义。在大鼠大脑灰质顶叶区,造模后第14、21天的各组大鼠间的Raf-1、ERK、CREB、P38差异无统计学意义。结论 1、CCI模型可致神经病理性疼痛大鼠热痛阈、机械痛阈降低,推拿可提高CCI模型大鼠的热痛阈、机械痛阈。2、Raf-1/ERK/CREB信号通路参与了慢性神经病理性疼痛过程,推拿镇痛的机制可能与其下调脊髓背角中Raf-1/ERK/CREB信号通路基因和蛋白的表达有关。

循环细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C mRNA对女性急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后心功能的预测价值

目的分析细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1C(CDKN1C)mRNA对女性急性心肌梗死(AMI)患者行经皮冠状动脉介入(PCI)术后心功能的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月遂宁市中心医院急诊PCI的AMI患者198例,术后1 d检测N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和CDKN1C mRNA水平,术后4个月通过超声心动图检测心功能,根据左心室射血分数(LVEF)分为三组:A组(LVEF≥50%)112例;B组(40%≤LVEF<50%)54例;C组(LVEF<40%)32例。通过ROC曲线分析不同性别患者CDKN1C mRNA与NT-proBNP水平对心功能的预测价值。结果A组CDKN1C mRNA水平高于B组和C组(F=6.831,P<0.05),A组NT-proBNP水平低于B组和C组(F=3.421,P<0.05)。A组女性患者CDKN1C mRNA水平高于B组和C组女性患者(F=6.717,P<0.05)。CDKN1C mRNA的AUC为0.805(95%CI=0.732~0.864),预测价值优于NT-proBNP(Z=2.676,P<0.05),女性CDKN1C mRNA的AUC为0.887(95%CI=0.804~0.923)预测价值优于男性患者(Z=3.004,P<0.05)。结论术后1 d循环CDKN1C mRNA水平有助于预测AMI患者PCI后心功能情况,尤其适用于女性,CDKN1C mRNA可以作为预测女性AMI患者PCI后心功能的一个新的标志物。

miR-525-5p和MACC1 mRNA在结肠癌组织中的表达

目的探讨miR-525-5p和结肠癌转移关联基因1(MACC1)mRNA水平在结肠癌组织中的表达,分析二者与结肠癌患者临床病理学特征的关系,为结肠癌的诊断和治疗提供新思路.方法选取行结肠癌根治术的结肠癌患者50例为观察组,同期选取结肠良性病变患者50例为对照组.收集患者的结肠组织标本与临床资料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测两组标本中miR-525-5p和MACC1 mRNA表达水平.采用独立样本t检验比较两组间miR-525-5p与MACC1 mRNA表达;采用Pearson相关分析结肠组织中miR-525-5p与MACC1 mRNA表达的相关性;利用受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)分析miR-525-5p与MACC1 mRNA表达在结肠癌诊断中的应用价值.结果RT-PCR结果表明,观察组中miR-525-5p的表达量显著低于对照组(P<0.05),MACC1 mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05).Pearson相关分析显示,miR-525-5p与MACC1 mRNA在结肠癌组织中表达呈负相关关系(r=-0.779,P<0.05),miR-525-5p在结肠癌组织中的表达与结肠癌患者肿瘤分化程度、TNM分期有关(P<0.05),MACC1 mRNA与肿瘤分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05).ROC工作曲线结果表明,miR-525-5p诊断结肠癌的曲线下面积(AUC)为0.783(95%CI:0.693~0.873),特异度为70%,灵敏度为76%.MACC1 mRNA表达诊断结肠癌的AUC为0.706(95%CI:0.605~0.807),特异度为90%,灵敏度为66%.结论结肠癌组织中miR-525-5p低表达及MACC1 mRNA高表达可能成为结肠癌患者潜在的风险评估指标.