High glucose reduces Nrf2-dependent cRAGE release and enhances inflammasome-dependent IL-1βproduction in monocytes:the modulatory effects of EGCG

Soluble receptor for advanced glycation end products(sRAGE)acts as a decoy sequestering of RAGE ligands,thus preventing the activation of the ligand-RAGE axis linking human diseases.However,the molecular mechanisms underlying sRAGE remain unclear.In this study,THP-1 monocytes were cultured in normal glucose(NG,5.5 mmol/L)and high glucose(HG,15 mmol/L)to investigate the effects of diabetesrelevant glucose concentrations on sRAGE and interleukin-1β(IL-1β)secretion.The modulatory effects of epigallocatechin gallate(EGCG)in response to HG challenge were also evaluated.HG enhanced intracellular reactive oxygen species(ROS)generation and RAGE expression.The secretion of sRAGE,including esRAGE and cRAGE,was reduced under HG conditions,together with the downregulation of a disintegrin and metallopeptidase 10(ADAM10)and nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)nuclear translocation.Mechanistically,the HG effects were counteracted by siRAGE and exacerbated by siNrf2.Chromatin immunoprecipitation results showed that Nrf2 binding to the ADAM10 promoter and HG interfered with this binding.Our data reinforce the notion that RAGE and Nrf2 might be sRAGE-regulating factors.Under HG conditions,the treatment of EGCG reduced ROS generation and RAGE activation.EGCG-stimulated cRAGE release was likely caused by the upregulation of the Nrf2-ADAM10 pathway.EGCG inhibited HG-mediated NLRP3 inflammasome activation at least partly by stimulating sRAGE,thereby reducing IL-1βrelease.

六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法使用不同浓度(0~400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移植瘤生长的影响。结果25~400μmol/L的绞股蓝皂苷能降低MG63细胞活力。与Control组相比,Gyp-L组、Gyp-M组和Gyp-H组细胞Edu阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、TGF-β、MMP-9和IL-6水平及Bcl-2、HMGB1、RAGE、N-cadherin和VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞凋亡率及Bax和E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性。过表达HMGB1可部分逆转绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果表明,绞股蓝皂苷可显著抑制小鼠骨肉瘤移植瘤的生长(P<0.05)。结论绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路有关。

RAGE受体阻断剂对癫痫幼鼠脑电图、神经元损伤及S100B蛋白表达的影响

目的探究晚期糖基化终末产物(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE)受体阻断剂对癫痫幼鼠脑电图、神经元损伤及S100B蛋白表达的影响。方法选取40只无特定病原体级SD雄性幼鼠,随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、苯妥英钠组(P组)、RAGE受体阻断剂组(R组),每组10只。M组、P组、R组腹腔注射戊四氮建立癫痫模型,N组不建立该模型,建模成功后,对P组腹腔注射20 mg/kg苯妥英钠,对R组腹腔注射1 mg/kg RAGE受体阻断剂FPS-ZM,N组、M组同期腹腔注射同体积0.9%氯化钠溶液。观察各组幼鼠模型行为学,记录脑电图,采用FJB染色和尼氏染色检测神经元损伤情况,免疫酶标法检测S100B蛋白表达。结果与N组比较,M组、P组、R组幼鼠Racine评分、发作持续时间、发作次数明显升高(P<0.05);与M组比较,P组、R组幼鼠Racine评分、发作持续时间、发作次数明显降低(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标显著降低(P<0.05)。与N组比较,M组、P组、R组幼鼠波幅明显升高(P<0.05);频率明显降低(P<0.05);与M组比较,P组、R组幼鼠波幅明显降低(P<0.05),频率明显升高(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标变化显著(P<0.05)。与M组相比,P组、R组神经元损伤明显减轻,神经元数量有所增加,神经元形态有所改善,神经元细胞及尼氏小体数目明显增加。与N组比较,M组、P组、R组海马、中脑、额叶皮层S100B蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,P组、R组海马、中脑、额叶皮层S100B蛋白表达显著降低(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标显著降低(P<0.05)。结论RAGE受体阻断剂可显著改善癫痫幼鼠脑电图和神经元损伤,并抑制S100B蛋白表达。

颅脑损伤后HMGB1-RAGE介导血管周细胞脱离血管和血脑屏障损伤的机制研究

目的观察颅脑损伤后皮层血管周细胞的反应性变化并探讨其机制。方法使用可控性皮层撞击动物模型模拟颅脑损伤,通过蛋白免疫印迹检测外伤后不同时间点皮层周细胞标记物表达情况,并通过透射电镜确定颅脑损伤后血管周细胞的生物学行为。通过Western blotting检测外伤后高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupbox 1,HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达水平,并将实验动物分为FPS-ZM1(一种特异性RAGE受体阻滞剂)注射组和野生型组,利用干湿脑重和透射电镜的方法检测外伤后HMGB1-RAGE对周细胞的影响。培养原代小鼠脑微血管周细胞,添加HMGB1重组蛋白并以同时添加FPS-ZM1的培养周细胞作为对照,离体水平探索HMGB1-RAGE通路对血管周细胞的影响。结果外伤后早期皮层周细胞标记物血小板源性生长因子受体B(platelet-derived growth factor receptor beta,PDGFR-β)、NG2蛋白聚糖(NG2 proteoglycan,NG2)表达水平降低(PDGFR-β,Control vs.CCI 3D P<0.05;NG2,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05),并发现周细胞脱离血管,同时伴有局部血脑屏障开放。外伤后早期皮层HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路表达升高(HMGB1,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05;RAGE,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05,Control vs.CCI 3D P<0.05,Control vs.CCI 5D P<0.05,Control vs.CCI 7D P<0.05;NF-κB,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05),阻断RAGE与配体结合后皮层水肿减轻(CCI 6H、CCI 1D均P<0.05)、神经血管单元损伤降低。HMGB1重组蛋白可增加培养周细胞的迁移能力(Control vs.HMGB1 P<0.05,Control vs.HMGB1+FPS-ZM1 P<0.05),且能被FPS-ZM1逆转(HMGB1 vs.HMGB1+FPS-ZM1 P<0.05)。结论颅脑损伤后高水平的HMGB1通过周细胞上RAGE受体介导周细胞脱离血管,并导致局部脑水肿的发生。

实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

目的建立实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）检测人晚期糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达。方法根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物，应用SYBR GreenⅠ荧光染料，建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法，并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价；根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量，并以RAGE mRNA和18SrRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标。结果线性范围为5．0×10^3～5．0×10^9copies／ml，相关系数为-0．98，批内变异系数（CV）为0．63％～8．71％，批间CV为1．52％～12．38％。食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18SrRNA浓度的对数比值（^-x±s）分别为0．638±0．068和0．334±0．329（P〈0．005），提示食管癌组织RAGE表达上调。结论RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点，RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性。

组蛋白激活晚期糖基化终末产物受体并引发炎症反应

晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是免疫球蛋白受体,能够与多种配体结合,研究发现RAGE参与了非专职吞噬细胞对组蛋白修饰的微米颗粒的吞噬过程,但目前没有研究证明组蛋白是RAGE的配体。该研究对组蛋白分子能否直接激活RAGE及其下游信号通路进行探究。使用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测哺乳动物细胞对可溶性组蛋白分子的内化;采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶染色法检测细胞活性;通过荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯检测胞内活性氧水平;利用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定炎症因子的释放。结果表明,组蛋白分子能够被野生型HEK293T细胞内化并于胞内溶酶体中聚集,RAGE-敲除细胞则无法内化组蛋白;培养基组蛋白质量浓度在100μg/mL时对细胞无明显毒性,细胞活性正常;组蛋白能够通过RAGE刺激细胞活性氧水平升高,并释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);组蛋白与DNA结合能够增强对RAGE的刺激。以上结果表明,组蛋白能够激活RAGE及其下游炎症通路。

芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜AGEs及RAGE mRNA表达的影响

目的观察芪参益气滴丸对糖尿病大鼠视网膜内晚期糖基化终末产物(advanced glycation endproducts,AGEs)及其受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)mRNA表达的影响。方法 70只SD大鼠以链脲佐菌素(65 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,随机分成模型组、阳性对照组(羟苯磺酸钙胶囊)和芪参益气滴丸组,另设正常对照组12只。10个月后用免疫组织化学方法检测各组视网膜AGEs表达水平,反转录聚合酶链反应检测RAGE mRNA表达水平。结果糖尿病大鼠视网膜AGEs和RAGE mRNA表达较正常组增强(P<0.01);阳性对照组和芪参益气滴丸组视网膜AGEs和RAGE mRNA表达较模型组降低(P<0.01)。结论芪参益气滴丸可降低视网膜AGEs和RAGE mRNA的表达,从而减轻视网膜微血管损伤。

肠淋巴再灌注对SMAO休克大鼠多器官ICAM-1、RAGE的作用

目的:观察肠淋巴再灌注(MLR)对肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克大鼠肺、心肌、肾、肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)含量的影响,探讨MLR加剧SMAO休克大鼠器官损伤的作用机制。方法:Wistar大鼠24只,随机均分为假手术组(Sham组)、MLR组、SMAO组和SMAO+MLR组,后三组大鼠分别夹闭肠系膜淋巴管和/或肠系膜动脉1h、再灌注2h。Sham组不夹闭。各组于相应时间点留取固定位置的肺、心肌、肾、肝组织,制备组织匀浆;应用酶联免疫方法检测各组织匀浆ICAM-1、RAGE含量。结果:Sham组和MLR组各指标无统计学差异;SMAO组和SMAO+MLR组肺、肾、心肌、肝组织ICAM-1、RAGE的含量均显著高于MLR组和Sham组(P均<0.01);SMAO+MLR组肺、肾、心肌、肝组织ICAM-1与RAGE含量显著高于SMAO组(P均<0.01)。结论:MLR加剧SMAO休克大鼠多器官损伤的作用机制与各器官组织ICAM-1、RAGE水平升高有关。

氧糖剥夺条件下PC12细胞RAGE的表达及对其损伤的影响

目的探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞在氧糖剥夺(OGD)的条件下,晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达及其对PC12细胞损伤的影响。方法PC12细胞随机分为3组:OGD培养组(PC12细胞在无血清无糖的DMEM培养液中厌氧培养);封闭RAGE的OGD培养组(PC12细胞在加5μg/mlRAGE抗体的无血清无糖DMEM培养液中厌氧培养);对照组(PC12细胞在无血清无糖DMEM培养液中培养)。免疫组化法检测RAGE表达。收集细胞上清液,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)含量,并对细胞死亡率进行检测。结果在OGD条件下PC12细胞培养8、11、20h均有RAGE表达,与对照组相比表达均明显增加,OGD培养组与封闭RAGEOGD培养组相比,LDH活性差异显著。随着厌氧时间的延长,PC12细胞死亡率明显增高,封闭RAGEOGD培养组与OGD培养组相比,PC12细胞死亡率明显降低。NO含量差异无显著意义,但与对照组相比差异显著。结论在OGD条件下,PC12细胞RAGE表达增高。RAGE的表达对细胞的损伤起促进作用。

益气活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织RAGE/NOX4/ROS信号通路及氧化应激的影响

目的:观察益气活血通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠模型晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)/活性氧(ROS)信号通路以及氧化应激的影响,探讨其治疗DKD的可能作用机制。方法:雄性SD大鼠40只随机分为正常对照组(CON)和造模组。造模组大鼠通过为期6周的高糖高脂饲料饲养,联合链脲佐菌素(每kg大鼠体质量注射35 mg链脲佐菌素)建立DKD大鼠模型,成模大鼠随机分为模型组(MOD)、益气活血通络方低剂量组(DL)、益气活血通络方高剂量组(DH)、厄贝沙坦组(IRB)进行灌胃,给药组分别灌胃给药20周,期间CON组及MOD组予等量生理盐水。给药结束后全自动分析仪检测各组大鼠尿微量白蛋白与尿肌酐比值(UACR),羟胺法检测血清锰超氧化物歧化酶(SOD2)活性,TBA法检测血清丙二醛(MDA)浓度;HE染色法、Masson染色法、PAS染色法观察各组大鼠肾组织病理形态学变化;二氢乙锭(DHE)荧光探针检测大鼠肾组织ROS表达;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织RAGE、NOX4蛋白表达;Western blot法检测SOD2、RAGE、NOX4蛋白表达;Real-time PCR检测大鼠肾组织NOX4 mRNA表达;结果:与CON组比较,MOD组大鼠UACR值显著升高,SOD2活性显著降低,MDA浓度明显升高(P<0.01),有明显肾脏病理损伤表现,肾小球肥大,基底膜明显增厚,系膜基质增生,部分出现K-W结节,肾小管上皮细胞泡沫样变,提示模型制备成功;另外,ROS表达增多(P<0.05),NOX4、RAGE蛋白在肾小球系膜细胞表达显著升高(P<0.01),NOX4的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),SOD2蛋白表达水平显著降低,NOX4、RAGE蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与MOD组比较,DH组及IRB组UACR、MDA含量水平明显降低,SOD2活性升高(P<0.05,P<0.01),DL组差异无统计学意义;肾组织病理学明显改善;DL组、DH组、IRB组RAGE、NOX4的蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);DH组ROS表达减少(P<0.05);DH组、IRB组SOD2蛋白表达升高,NOX4 mRNA,RAGE、NOX4蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血通络方可能通过RAGE/NOX4/ROS通路减少了DKD大鼠ROS的生成,缓解氧化应激,减少蛋白尿,从而起到明显的减轻肾脏损害及延缓病程进展作用。

RAGE在ARDS修复过程中的作用研究进展

晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end product，RAGE）是细胞表面分子免疫球蛋白超家族的成员之一，在肺部的I型上皮细胞有较高水平的基础表达。肺组织的损伤和修复是一个交叉而持续的过程，RAGE参与了急性呼吸窘迫综合征（ARDS）早期的修复与重建，影响ARDS的发生发展过程。研究RAGE在ARDS修复过程中的作用及机制，有利于进一步认识ARDS早期修复的调控机制，为ARDS早期、有效的干预治疗提供新的思路和策略。

五味子醇甲对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞的RAGE-ROS-凋亡通路的影响

目的探讨五味子醇甲(Schisandrin,SCH)对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE/ROS/凋亡通路的影响。方法MTT法检测control组、SCH高中低剂量组的细胞活力,探讨SCH高中低剂量组对SH-SY5Y细胞的保护作用。MTT法检测control组、Aβ组、Vitamin E组及SCH高中低剂量组细胞活力、双染法观察细胞凋亡和DHE染色法检测ROS含量,探讨SCH对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y的细胞损伤的保护作用。Western-blot法检测control组、Aβ组、SCH组RAGE蛋白,探讨SCH对Aβ1-42诱导SH-SY5Y的RAGE影响。结果与control组比较,SCH各剂量组细胞活力均显著增强(P<0.01)。与Aβ组比较,各给药组细胞活力均明显增强(P<0.01)和细胞凋亡率均明显下降(P<0.01);各给药组检测ROS的荧光强度均减弱(P<0.01),SCH(5.0μg/mL)组RAGE蛋白表达降低,有显著性差异(P<0.05)。结论SCH防治阿尔茨海默病的抗氧化作用机制可能与降低ROS含量、细胞凋亡率和下调RAGE蛋白表达有关。

RAGE在人胃癌组织的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)在胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织中的表达差异及RAGE表达与胃癌临床病理学特征的关系。方法收集胃癌组织和癌旁组织各180例,及正常胃组织30例,应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色方法检测RAGE表达情况,并分析RAGE与胃癌临床病理学特征的关系。结果胃癌组织、癌旁组织正常胃组织中RAGE表达阳性率分别为70.0%(126/180)、45.0%(81/180)、40%(12/30),胃癌组织中RAGE表达比癌旁组织及正常胃组织中的表达显著增强(P<0.05),而癌旁组织及正常胃组织中RAGE表达差异无统计学意义(P>0.05)。RAGE表达在年龄、性别、肿瘤的原发部位方面差异无统计学意义(P>0.05);随着高、中、低分化程度的降低,RAGE阳性表达率逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05);按胃癌TNM分期,随着T1至T4期浸润深度增加,其阳性表达率逐渐增高,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移胃癌组织中RAGE阳性表达率(78.0%,103/132)明显高于无淋巴结转移胃癌组织中RAGE阳性表达率(47.9%,23/48),差异有统计学意义(P<0.05);无远处转移143例,其RAGE阳性表达率为65.7%(94/143),有远处转移37例,其RAGE阳性表达率为86.5%(32/37),有远处转移者RAGE阳性表达率(86.5%,32/37)高于无远处转移者RAGE阳性表达率(65.7%,94/143),二者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RAGE在胃癌组织中高表达,而在癌旁组织和正常胃组织中低表达;RAGE的高表达与胃癌的分化程度、侵润深度、是否有淋巴结转移、是否有远处转移相关,是胃癌治疗的潜在靶点。

前列地尔对冠脉粥样硬化患者血流动力学及其血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平的影响研究

目的探究前列地尔对冠脉粥样硬化患者血流动力学及其血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平的影响。方法将2009年7月～2011年7月于笔者医院就诊并选择内科保守治疗的76例冠脉粥样硬化患者平均随机分入前列地尔治疗组和对照组。对照组采用冠脉粥样硬化常规内科保守治疗,前列地尔治疗组患者在常规内科保守治疗基础上每天采用20μg前列地尔静脉滴注治疗2周。比较两组患者的临床疗效,血流动力学指标,血脂指标和血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平。结果前列地尔治疗组临床疗效显著优于对照组(P<0.05),血小板3min聚集率和血小板最大聚集率显著优于对照组(P<0.05),血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平显著低于对照组(P<0.05)。前列地尔治疗组患者其余指标与对照组患者无统计学差异(P>0.05)。结论前列地尔能够显著改善冠脉粥样硬化患者的血流动力学指标和血浆内源性sRAGE、esRAGE和cRAGE水平。

心阳片通过调节RAGE介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片通过调节晚期糖基化终产物受体(RAGE)介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、3-甲基腺嘌呤组(自噬抑制剂,15 mg·kg^(-1))以及心阳片低、中、高剂量组(455、910、1 820 mg·kg^(-1)),每组10只;另将10只经基因型鉴定确认为RAGE-/-的小鼠作为RAGE敲除组。采用主动脉弓缩窄术(TAC)建立压力负荷性心力衰竭小鼠模型。模型复制成功后,按上述剂量对心阳片各剂量组小鼠进行灌胃给药,3-甲基腺嘌呤组进行腹腔注射给药,其余组别灌胃等容积生理盐水,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能,采集小鼠左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);使用Masson染色观察小鼠心肌组织纤维化程度;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠心脏左室心肌组织中的RAGE蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ的表达情况。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF及LVFS明显降低(P<0.05),心肌纤维化面积明显增加(P<0.05),RAGE蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ的表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,RAGE敲除组、3-甲基腺嘌呤组及心阳片低、中、高剂量组小鼠的LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),心肌纤维化面积明显减少(P<0.05),RAGE、Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过调节RAGE介导的自噬,从而改善心力衰竭小鼠的心功能。

S100A12和RAGE在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达

目的探讨S100钙结合蛋白A12（S100A12）及晚期糖基化终末产物受体（RAGE）基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中的表达及意义。方法选取2014年2月至2015年3月在中国医科大学第四医院和昌乐县人民医院产科分娩的87例子痫前期孕妇分为非重度组（n=46）和重度组（n=41），同期选取正常孕妇40例作为对照组。利用实时荧光定量PCR技术检测外周血及胎盘组织中S100A12 mRNA及RAGE mRNA的表达。结果子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组（t值分别为12．341和10．517，均P〈0．05），重度组子痫前期孕妇外周血中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组均高于对照组，差异均有统计学意义（t=1．980—8．191，均P〈0．05）。子痫前期孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于对照组孕妇（t值分男11为9．747和8．625，均P〈0．05），重度组孕妇胎盘组织中S100A12 mRNA和RAGE mRNA相对表达量均高于非重度组和对照组，且非重度组高于对照组，差异均有统计学意义（t=2．235～7．286，均P〈0．05）。经Pearson相关分析显示，子痫前期孕妇外周血和胎盘组织中S100A12 mRNA相对表达量均与RAGE mRNA相对表达量呈正相关（r值分别为0．603和0．552，均P〈0．05）。结论S100A12及RAGE基因在子痫前期孕妇外周血及胎盘组织中呈高表达，可能共同参与了子痫前期孕妇机体炎性反应的发生。

六味地黄丸和通络救脑滴丸对2种痴呆模型小鼠脑组织Aβ降解的影响

目的:分析六味地黄丸和通络救脑滴丸对“肾精不足”和“毒损脑络”2种不同痴呆症模型动物脑组织Aβ降解的影响。方法:通过SAMP8小鼠和在SAMR1小鼠双侧海马区注射Aβ_(1-40)分别复制痴呆动物模型,采用水迷宫测定行为功能学,免疫组织化学染色(IHC)法检测海马和皮层中Aβ的表达,Western Blotting法检测海马和皮层中胰岛素降解酶(IDE)、低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达。结果:2种痴呆模型在游速、避暗错误次数、错误区时间、脑组织海马和皮层中IDE、RAGE和海马中LRP1等蛋白的表达,差异均有统计学意义(均P<0.05);与双侧海马区注射Aβ_(1-40)模型小鼠比较,SAMP8模型小鼠的游速和避暗错误次数下降,脑组织中RAGE表达升高,IDE和LRP1表达降低;通络救脑滴丸对改善双侧海马注射Aβ_(1-40)模型小鼠的避暗潜伏期、脑组织海马区IDE和RAGE的表达水平作用明显;六味地黄丸对改善SAMP8模型小鼠水迷宫寻台成功率、避暗潜伏期、脑组织皮层和海马区IDE表达和海马Aβ的表达水平作用明显。结论:六味地黄丸可改善“肾精不足”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍,通络救脑滴丸可改善“毒损脑络”证痴呆模型小鼠脑组织Aβ清除障碍。

大黄糖络丸调控AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路改善糖尿病肾病小鼠肾脏炎症损伤的机制

目的:探讨大黄糖络丸对db/db小鼠早期糖尿病肾病(DKD)的保护作用。方法:取8只db/m小鼠作为空白组,取40只雄性db/db小鼠通过尾静脉取血,检测空腹血糖(FBG),FBG≥16.7 mmol·L^(-1),尿量增多,且持续出现白蛋白尿提示造模成功。造模成功后随机分为模型组、达格列净组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、大黄糖络丸高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只。各给药组均采用灌胃给药,空白组和模型组每日给予等体积蒸馏水灌胃,连续给药10周,观察小鼠生存状态并测定小鼠体质量、FBG及肾功能相关指标;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肾组织中炎症相关指标;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、电镜观察各组肾脏组织病理学改变;免疫荧光观察晚期糖基化终末产物(AGEs)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中AGEs、RAGE、核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IKK)、NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量、FBG、血清肌酐(SCr)、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均明显增高(P<0.05);肾组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)明显增加(P<0.05);肾脏病理染色、电镜显示肾组织排列疏松,出现间隙,结构紊乱,系膜增生,纤维化明显;Real-time PCR结果显示,肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显增加(P<0.05);免疫荧光结果显示,肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显增加(P<0.05);Western blot结果显示,肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05)。给药干预后,与模型组比较,达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠体质量、FBG、SCr、ACR明显降低(P<0.05);达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TC明显降低(P<0.05);大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TG明显降低(P<0.05);各给药组肾组织中ICAM-1、IL-6和TNF-α表达明显降低(P<0.05)。肾脏病理染色、电镜显示各给药组小鼠肾脏损伤减轻,胶原纤维沉积减轻,系膜增生减少;Real-time PCR结果显示达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显降低(P<0.05);Western blot结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:大黄糖络丸能够改善DKD小鼠肾脏病理结构和肾脏炎症损伤,其作用机制可能与抑制AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路有关。

中药复方益糖康颗粒通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路促进足细胞自噬的机制

目的:通过观察中药复方益糖康(YTK)颗粒对晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴介导沉默信息调节因子1(SIRT1)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路改善糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法:选取8周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠96只,使用随机数字表法分为空白组、模型组、YTK高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、西药组(氯沙坦片,20 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药8周后取材。严格按照试剂盒所示方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、肌间质蛋白(Desmin)、裂孔膜蛋白(Nephrin)的平均积分吸光度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析DKD大鼠肾组织中滑膜PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、RAGE、SIRT1、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、FoxO1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组SOD、GSH-Px、CAT表达水平明显降低,MDA显著升高(P<0.01);大鼠呈现严重肾损现象;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin阳性表达显著增多,Nephrin、足突蛋白质(Podocin)显著下降(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,SIRT1、FoxO1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,YTK各剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高,MDA显著下降(P<0.01);肾损程度均发生了不同程度减轻;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin平均积分吸光度值均明显降低,Nephrin、Podocin显著升高(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3表达水平显著降低,SIRT1、FoxO1表达水平显著提升(P<0.01)。中药组表现出明显的量效趋势。结论:YTK可能通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,改善足细胞自噬,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓DKD进展的目的。且中药组具有量效趋势。