黑木耳不同交配型的单倍体菌株RAPD/BSA分析(英文)

从黑木耳(Auricularia auricula)种内杂交子H2J3的子实体上单孢分离培养得到F1代52个单核体菌株,将F1子代及亲本(H2,J3)等所有供试单核体菌株的菌丝体两两配对培养,采用核荧光染色观察核相,和光学显微镜观察锁状联合,鉴别菌丝交配反应是否形成双核体菌丝,同时测定了亲本菌株所有F1子代的交配型。根据交配型表型将F1子代菌株分成两群(F1-A1,F1-A2),将每群内各自菌株的DNA等量混合,构建交配型基因的等基因池,通过64个随机引物的RAPD分析,发现引物S126在2个等基因池间扩增出差异带S1261021,且在属于同一交配型的亲本及F1子代之间扩增结果基本一致,表明S1261021是与交配型基因连锁的分子标记。

利用RAPD-BSA分子标记技术筛选金针菇色泽基因研究

色泽是金针菇的重要性状之一,受一对等位基因的控制。以FL19(黄色)、8801(白色)及其后代(F1代、F2代)菌株和相应单核菌株为材料,采用分离群体分组分析(BulkedSegregantAnalysis,BSA)方法,对金针菇基因组DNA进行RAPD分析,通过对200个引物的筛选,获得了一个与白色性状基因紧密连锁的RAPD标记S3751800,并在亲本及其后代菌株进行了验证,具有较好的重复性和稳定性。可用于白色金针菇新品种的辅助选育。

利用RAPD-BSA法筛选亚麻耐渍基因的分子标记

本研究以耐渍型亚麻品种Y4F082和非耐渍型品种Agatha及其杂交F2代为材料,采用分离群体分组分析(Bulked Segregate Analysis,BSA)法,对亚麻耐渍基因进行RAPD分析。在500个随机引物中筛选出一个引物S1377在两亲本及抗、感基因池中均能扩增出一条大小为800bp稳定的差异条带,命名为S1377-800,通过F2代个体验证,耐渍型个体均能扩增出此差异条带而非耐渍型个体中不能扩增出此差异条带,证明S1377-800是与亚麻耐渍基因紧密连锁的RAPD标记。

甘蓝型油菜白花基因的RAPD标记

以甘蓝型白花油菜及其分离群体为材料,对甘蓝型油菜白花性状的遗传规律进行了研究。结果表明,白花对黄花是一对由不完全显性基因(WW)控制的不完全显性遗传性状;利用集群分离法(BSA)对该白花基因进行RAPD分析,在1 200个随机引物中,获得了引物S1092(5-CCC AGG CTA C-3),在白花基因库和黄花基因库间扩增出多态性产物S-10921250;对该分离群体及其姊妹系和其他白花油菜进行的单株验证表明,S-10921250与甘蓝型油菜白花基因相连锁,遗传距离为0.84 cM。

与棱果沙棘性别相关的RAPD标记

应用RAPD技术筛选与棱果沙棘性别相关的分子标记,对棱果沙棘雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析(BSA),在194条随机引物中有50条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这50条引物分别对棱果沙棘雌雄个体(雌雄个体各选取5个)进行RAPD分析,其中引物S10扩增得到1个约为1030bp的与雌性相关的RAPD标记。该标记的获得进一步表明棱果沙棘雌雄株间存在基因水平的差异,为棱果沙棘的性别研究提供分子依据。进一步利用该雌性特异位点设计出更加稳定的SCAR标记,可望用于棱果沙棘的早期性别的准确鉴别。

油菜单显性核不育及其不育基因的RAPD标记

以陕西省杂交油菜研究中心选育的单显性核不育油菜分离群体为材料,对单显性核不育油菜的育性特征、花器形态进行了多代跟踪调查;对其遗传规律进行了探讨,确定该不育性状受一对显性核基因控制;利用集群分离法 BSA 对该油菜单显性核不育基因进行了RAPD分析.在所选用的300个随机引物中,获得引物S243 5'CTATGCCGAC3' 在可育集团与不育集团间扩增出多态性产物S-2431500.通过对该分离群体及其姐妹系分离群体进行单株验证,均获得相同的扩增结果,表明S-2431500与单显性核不育基因相连锁,

桃花粉可育基因连锁的RAPD标记与SCAR标记的转化

桃品种以重阳红(花粉不育)×大久保(花粉可育)的52株F1代群体为试材,应用RAPD技术,结合集群分组分析法(Bulked Segregate Analysis,BSA)构建花粉可育/不育基因池,利用180个随机引物,筛选在花粉可育基因池中稳定扩增的一个RAPD标记OPW03-900。经过重复性验证和群体单株验证,该标记仅在花粉可育个体(重组型除去)中出现,与桃花粉可育/不育位点的连锁距离为5.80cM。将该特异性片段回收、克隆、测序,并设计一对特异SCAR引物,再对F1代个体进行PCR扩增,发现该特异带的位点及重组型个体的数目与RAPD扩增结果一致,片段大小为906bp,命名为SCW03-906,表明RAPD标记已成功转化为与桃花粉可育基因连锁的SCAR标记。该序列已被GenBank收录,登录号为DQ659676。

与甘蔗抗黑穗病基因连锁的RAPD标记筛选(英文)

为了寻找与由黑粉菌 (UstilagosictamineaSyd .)引起的甘蔗黑穗病抗病基因连锁的分子标记 ,从而借助分子标记辅助选择 (MAS)手段提高抗病育种效率 ,用甘蔗抗病亲本Co10 0 1为母本 ,用感病亲本Ya71- 374为父本 ,配置杂交组合创制抗病性分离群体为材料 ,采用人工接种新植蔗 ,田间种植方法鉴定分离个体新植和宿根的抗病性 ,借助RAPD和集群分离分析法 (BSA) ,筛选出一个与抗病基因连锁的多态性片段 ,并在抗、感池中的个体和池外部分个体上得到验证 ,该片段大小约 5 2 0bp.对该片段的进一步克隆、测序和转换研究还在进行中 ,研究结果为抗病育种的MAS奠定了基础 .图 2表 3参

美洲黑杨抗黑斑病基因的RAPD标记筛选和连锁分析

以美洲黑杨（Populus deltoides Bartr.cv.“Lux”:I-69/55））为母本,欧美杨（P.euramericana cv.I-45）为父本得到的F1为材料,其中I-69对黑斑病表现为高度抗病,I-45为高度感病。利用分离群体混合分析（bulkedsegregrants analysis,BSA）技术建立两个DNA池（感病池和抗病池）,筛选出了与抗黑斑病性状基因相连锁的RAPD标记:OPAI17-1550、OPAI13-900。利用选择性基因型分析法进行标记-抗黑斑病基因连锁分析,两标记与抗黑斑病基因遗传距离分别为29.9cM和37.4cM。

小麦矮秆新基因的RAPD标记

以矮秆易位系山农31504-1和高秆种质系山农298为材料,利用BSA法对矮秆基因进行了RAPD标记。从300个十碱基随机引物中筛选出引物S152可在矮秆DNA池中扩增出特征带。利用100株F_2单株进行连锁分析表明,引物S152扩增的RAPD标记与矮秆基因连锁,遗传距离为10．73±3．31cM。该标记可用于分子标记辅助选择,并为矮秆基因的深入研究奠定基础。

西瓜黄皮性状RAPD标记的研究

为了加速培育出人们青睐的优质黄皮西瓜,以西瓜黑皮母本(H97)和黄皮父本(2605)构建BC1分离群体单株,利用RAPD技术结合分离群体分组分析法(BSA),从该群体单株中筛选与黄皮性状连锁基因的分子标记,结果获得1个与黄皮性状连锁的RAPD标记AI09-1500,重组率为17.2%。

大豆灰斑病1号生理小种抗性基因的RAPD标记

以高抗品种东农９６７４ 为父本， 以高感品种东农８７－１０４ 为母本， 杂交得到Ｆ２ 代群体。该群体经人工接种灰斑病１号生理小种后， 分别从抗、感材料中取１５ 株的叶片提取ＤＮＡ组成抗、感池， 用８２０ 个１０ｍ ｅｒ随机引物进行ＲＡＰＤ多态性分析， 其中３个引物在抗、感池间出现稳定的多态性标记ＯＰＫ０３８４０， ＯＰＭ１７１７００， ＯＰＯ１０９５０， 并在Ｆ２ 代个体中表现出抗性与多态性标记协同分离的趋势， 这三个标记与抗性基因Ｒｆ１ 的连锁顺序为ＯＰＫ０３８４０－Ｒｆ１－ＯＰＭ１７１７００－ＯＰＯ１０９５０， 连锁距离分别为１０．４ｃＭ－Ｒｆ１－１３．８ｃＭ－２６．１ｃＭ。

高粱抗蚜基因的RAPD分析

应用RAPD技术BSA法 ,对高粱抗蚜基因进行分析 ,筛选了 50 0个随机引物 ,共扩增出 1 6 1 4条谱带 ,得到了 1 0个具有稳定多态性标记的引物 ,分别为OPA - 0 1、OPP - 0 9、OPP - 1 4、OPH - 1 9、OPN - 0 8、OPN - 0 7、OPN - 2 0、OPY - 1 4、OPS - 2

太空诱变玉米细胞核雄性不育基因与RAPD标记的连锁分析

以姊妹交多代的太空诱变玉米雄性不育材料RP3195(A)×S37(自交系)得到的F2代分离群体(138株)为材料,利用集团分离法(BSA)对太空诱变玉米细胞核雄性不育基因进行了RAPD分析,在152个随机引物中,引物SB SK-14(CCCGCTACAC)和SBSR-3(ACACAGAGGG)分别在可育集团与不育集团之间扩增出多态性产物SBSK-14850、SBSK-14475和SBSR-3400。通过对F2代分离群体中的单株进行连锁分析,初步认为SBSK-14850、SBSK-14475和SBSR-3400与太空诱变玉米细胞核雄性不育基因相连锁,遗传距离分别为49.6,26.6和31.7cM。

地被菊匍匐性的遗传分析与RAPD标记研究

【目的】探讨地被菊株型匍匐性的遗传控制,并寻找与匍匐性连锁的RAPD标记,为匍匐型地被菊新品种选育、分子标记辅助育种和匍匐性相关基因的克隆奠定基础。【方法】以盆栽小菊品种‘早意大利红’为母本,地被菊品种‘03(6)-12’为父本构建F1群体,从F1中选取株型表现为匍匐、直立和中间型的单株各1株,分别自交,构建F2群体,并以选取的3个类型F1单株为母本与‘03(6)-12’回交,构建BC1群体。以主枝分枝角度作为株型划分依据,统计每个群体中不同株型分离比,推测地被菊株型控制相关基因特点。此外,以F1分离群体为试材,采用集团分离分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA)构建株型匍匐/直立基因池,利用200个RAPD随机引物筛选与地被菊匍匐基因相连锁的分子标记。【结果】通过遗传分析和χ2检验表明,地被菊匍匐/直立特性由1对不完全显性主效基因控制,同时存在微效修饰基因。筛选出1个与地被菊匍匐性状控制基因相连锁的分子标记A-10555。经过重复性验证和群体单株验证,该标记与地被菊株型匍匐/直立位点遗传距离为7.96cM。【结论】以主枝分枝角度作为株型的划分标准是可行的,通过F1、F2和BC1分离群体能对地被菊株型控制位点进行有效分析。获得的分子标记与株型匍匐/直立位点的遗传距离小,能用于辅助育种。

牛血清白蛋白在锁阳RAPD分析中的作用

[目的]为了研究牛血清白蛋白(BSA)在RAPD分析技术中的作用。[方法]通过锁阳RAPD分析中添加BSA,观察其对RAPD扩增的改善情况。[结果]结果表明,在锁阳RAPD分析过程中,添加BSA可显著改善锁阳的PCR扩增效果,并降低Taq酶的用量,BSA最佳使用浓度为2μg/μl。[结论]添加BSA以改善植物RAPD分析的方法是可行的;该研究为BSA在RAPD分析技术中的应用提供依据。

与毛白杨性别相关的RAPD标记

应用RAPD技术筛选与毛白杨性别相关的分子标记,对毛白杨雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析(BSA).结果表明:在88条随机引物中有12条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这12条引物分别对毛白杨雌雄个体(雌雄个体各选取5个)进行RAPD分析,其中引物S60扩增得到1个约为1 800 bp的与雄性相关的RAPD标记.该标记的获得进一步表明毛白杨雌雄株间存在基因水平的差异,为毛白杨的性别研究提供了分子依据.

与核桃早实性相关的RAPD标记筛选及其SCAR标记转换

利用构建的早实核桃和晚实核桃近等基因池DNA,筛选了180个10-mer随机引物,获得1个稳定的RAPD标记OPG15759。根据OPG15759的测序结果,将该RAPD标记成功转化为显性的SCAR标记SCG15759。PCR结果显示,G15759是与核桃早实性相关的分子标记,该标记对核桃的分子标记辅助育种具有重要意义。

番木瓜抗病突变抗PRSV基因的RAPD标记分析

利用随机扩增多态性DNA(Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)分子标记和集团分离分析法(Bulked segregation analysis,BSA)分析技术,对番木瓜(Carica papaya L.)F_2代分离群体和抗番木瓜环斑型花叶病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)突变体LK-1的抗PRSV基因进行连锁分析,从250个随机引物中筛选出了与抗PRSV基因相连锁的3个RAPD标记,连锁分析表明,S1366、S7058和S7125与抗PRSV基因(rys)的遗传距离分别为1.9 cM、2.4 cM和12.2 cM,其中S1366和S7058两个标记在抗PRSV基因的一侧,S7125在另一侧。

与大白菜质地品质连锁的RAPD标记

利用F2分离世代和BSA法对与大白菜易嚼烂程度连锁的分子标记进行了研究,筛选到了与大白菜易嚼烂程度连锁的RAPD标记OPA061400,其遗传距离为24.8cM。