miR-214靶向RASSF5基因调节口腔癌细胞CAL27生长活力的实验研究

目的研究miR-214靶向Ras相关区域家族5(RASSF5)基因对口腔癌细胞CAL27生长活力的调节作用。方法收集邢台市人民医院手术切除的口腔癌组织和癌旁组织,检测miR-214、RASSF5的表达水平;培养口腔癌细胞CAL27,分为转染阴性对照(NC)模拟物的NC模拟物组、转染miR-214模拟物的miR-214模拟物组,检测细胞生长活力、细胞周期分布及细胞周期基因的表达水平。结果口腔癌组织中miR-214的表达水平明显高于癌旁组织,RASSF5的mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P <0.05),且口腔癌组织中miR-214的表达水平与RASSF5的mRNA表达水平呈负相关(P <0.05); miR-214模拟物组口腔癌细胞CAL27细胞的生长活力值及S期、G2/M期比率均明显高于NC模拟物组,G0/G1期比率明显低于NC模拟物组且细胞中RASSF5、p53、p21的mRNA表达水平明显低于NC模拟物组,Cyclin D1、Cyclin E的mRNA表达水平明显高于NC模拟物组(P <0.05)。结论 miR-214通过靶向抑制RASSF5基因的表达能够增强口腔癌细胞CAL27的生长活力。

IKBKB基因敲除对胃癌细胞NLRC5、NF-κB表达以及生物学功能的影响

目的:探究IKBKB基因在胃癌细胞中的表达水平与NLRC5、NF-κB的作用关系,明确其对胃癌细胞生物学功能影响。方法:采用pLenti-IKBKB-sgRNA基因敲除质粒直接对人胃癌SGC-7901细胞系进行转染,应用免疫印迹试验(western blot,WB)检测单克隆细胞株中IKBKB基因敲除的效果,以及NLRC5、NF-κB的表达水平。划痕实验和Transwell迁移实验检测单克隆细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。成瘤实验观察单克隆细胞对瘤体生长的影响。在临床胃癌组织和癌旁组织中采用免疫组化染色评估NLRC5、NF-κB、IKBKB的表达状态。明确IKBKB与NLRC5、NF-κB的相关性以及临床诊断价值。结果:敲除IKBKB基因后人胃癌SGC-7901细胞中NLRC5、NF-κB的表达水平显著降低,细胞迁移和侵袭能力减弱。细胞发生G1期阻滞,降低了SGC-79013细胞增殖能力,细胞总凋亡率显著上升。IKBKB敲除后NLRC5、NF-κB表达水平下调影响瘤体的生长发育。NLRC5、NF-κB、IKBKB在胃癌组织中表达水平高于癌旁组织,NLRC5、NF-κB与IKBKB的表达水平呈正相关。IKBKB、NLRC5、NF-κB三者联合诊断胃癌AUC为0.921(0.876~0.967)。结论:IKBKB在胃癌细胞与NLRC5、NF-κB存在相关作用关系,协同促进胃癌的发生和发展。

NLRC5基因rs289723多态性与妊娠期牙周感染遗传易感性的关联

目的 探讨NOD样受体家族含半胱天冬酶激活和募集域结构域5(NLRC5)基因rs289723位点多态性与妊娠期牙周感染的遗传易感性。方法 选择2020年1月-2021年3月于漯河市中心医院妇产科规律接受产检孕产妇162名为研究对象,参照标准将孕产妇分为牙周感染组41例和非牙周感染组121例。分析两组NLRC5基因rs289723位点多态性,单因素及多因素Logistics回归分析规律产检孕产妇牙周感染的危险因素。结果 牙周感染组NLRC5基因rs289723位点AA基因型、A等位基因频率高于非牙周感染组,GG基因型、G等位基因低于非牙周感染组(P<0.05),多因素Logistics回归分析结果显示,每日刷牙次数、妊娠期糖尿病、NLRC5基因rs289723位点多态性是规律产检孕产妇牙周感染的独立危险因素(P<0.05),NLRC5基因rs289723位点AA基因型牙周感染孕产妇中/重度病变占比高于GG/GA型(P<0.05),AA基因型菌斑指数、出血指数高于GG/GA型(P<0.05)。结论 妊娠期牙周感染风险增加与NLRC5基因rs289723位点突变有关,AA型为易感基因型。

猪NLRC5基因启动子克隆及生物信息学分析

为了构建猪NLR家族含CARD结构域5(NOD-like receptor family caspase recruitment domain family domain-containing 5,NLRC5)基因启动子双荧光素酶报告质粒,确认其活性,进而探索其转录调控机制,试验采用PCR方法从猪睾丸细胞(swine testicular cell,ST细胞)中扩增出猪NLRC5基因启动子,将其与pGL3-Basic载体连接,测序正确后将猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒转染至ST细胞中,通过双荧光素酶报告检测试剂盒检测荧光素酶的表达活性,并使用生物信息学软件预测该基因启动子区域的CpG岛、调控元件及转录因子结合位点。结果表明:试验成功构建猪NLRC5基因启动子双荧光素酶报告质粒,该质粒的相对荧光素酶活性极显著高于pGL3-Basic载体(P<0.01)。NLRC5基因启动子区域中存在2个CpG岛,TATA box、CCAAT box和GC box等多种调控元件,以及IRF1、IRF3、STAT1、STAT3、STAT4和NF-κB转录因子结合位点。说明猪NLRC5基因的表达可能受甲基化的影响,同时也可能受顺式作用元件以及干扰素和NF-κB相关转录因子的调控。