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In Vitro Evaluation of Cytotoxicity and Oxidative Stress Induced by Multiwalled Carbon Nanotubes in Murine RAW 264.7 Macrophages and Human A549 Lung Cells 被引量:4
1
作者 CHEN Bo LIU Ying +3 位作者 SONG Wei Ming HAYASHI Yasuhiko DING Xun Cheng LI Wei Hua 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2011年第6期593-601,共9页
Objective To investigate in vitro cytotoxicity and oxidative stress response induced by multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs). Methods Cultured macrophages (murine RAW264.7 cells) and alveolar epithelium cells typ... Objective To investigate in vitro cytotoxicity and oxidative stress response induced by multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs). Methods Cultured macrophages (murine RAW264.7 cells) and alveolar epithelium cells type II (human A549 lung cells) were exposed to the blank control, DNA salt control, and the MWCNTs suspensions at 2.5, 10, 25, and 100 ug/mL for 24 h. Each treatment was evaluated by cell viability, cytotoxicity and oxidative stress. Results Overall, both cell lines had similar patterns in response to the cytotoxicity and oxidative stress of MWCNTs. DNA salt treatment showed no change compared to the blank control. In both cell lines, significant changes at the doses of 25 and 100 ug/mL treatments were found in cell viabilities, cytotoxicity, and oxidative stress indexes. The reactive oxygen species (ROS) generation was also found to be significantly higher at the dose of 10 ug/mL treatment, whereas no change was seen in most of the indexes. The ROS generation in both cell lines went up in minutes, reached the climax within an hour and faded down after several hours. Conclusion Exposure to MWCNTs resulted in a dose-dependent cytotoxicity in cultured RAW264.7 cells and A549 cells, that was closely correlated to the increased oxidative stress. 展开更多
关键词 Multi-wall carbon nanotubes CYTOTOXICITY Oxidative stress raw 264.7 cells A549 cells
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野菊花水提物对RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用及其机制 被引量:1
2
作者 熊鑫 黄传奇 程璐 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第8期1192-1198,共7页
目的建立以脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型,探讨野菊花提取液(CID)通过核转录因子(NF-κB)信号通路发挥抗炎活性的作用及其分子机制。方法以噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度CID对RAW 264.7巨噬细胞活性的影响以筛选适宜的实验浓度... 目的建立以脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型,探讨野菊花提取液(CID)通过核转录因子(NF-κB)信号通路发挥抗炎活性的作用及其分子机制。方法以噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度CID对RAW 264.7巨噬细胞活性的影响以筛选适宜的实验浓度;分别采用Griess法和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定50、100、200μg·mL^(-1) CID干预后各组细胞中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析各组中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的相对表达水平;免疫印迹实验(WB)观察各组中nuclear factor-kappa B p65(NF-κB p65)、inhibitor kappa B(IκB-α)和磷酸化IκB-α(p-IκB-α)的蛋白表达。结果50~200μg·mL^(-1)的CID可显著降低LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中NO、TNF-α和IL-6的生成量(P<0.01),并能下调COX-2和iNOX mRNA的相对表达(P<0.01)、下调p-IκB-α、总的NF-κB p65、细胞核NF-κB p65的蛋白相对含量(P<0.01),并上调IκB-α、细胞质NF-κB p65的相对含量(P<0.01)。结论CID可有效降低LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞的炎症因子释放,其机制可能与通过减少TNF-α等关键蛋白表达以及通过抑制NF-κB等炎症信号通路激活来抑制炎症发生有关。 展开更多
关键词 野菊花 抗炎作用 raw264.7炎症细胞模型 脂多糖 核转录因子-ΚB
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次苷酸查尔酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达的影响
3
作者 王萌 高盼微 +4 位作者 罗子娟 常惠琳 张玥 袁庆 柴丽娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期397-399,共3页
补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoraleacorylifolia L.)果实,具有温肾助阳、温脾止泻的功效[1],临床上被用于治疗皮肤病、肾炎、骨折等[2-3]。次苷酸查尔酮(corylifol A,CYA)是中药补骨脂的活性成分之一,是一种异黄酮类化合物,具有抗炎、抗... 补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoraleacorylifolia L.)果实,具有温肾助阳、温脾止泻的功效[1],临床上被用于治疗皮肤病、肾炎、骨折等[2-3]。次苷酸查尔酮(corylifol A,CYA)是中药补骨脂的活性成分之一,是一种异黄酮类化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗骨质疏松的特性[4-5]。有研究表明,CYA能明显抑制破骨细胞的分化,且能明显降低LPS诱导的巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成[6-7]。 展开更多
关键词 次苷酸查尔酮 raw264.7 脂多糖 INOS COX-2 NO
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TRIB3靶向AKT磷酸化调控高糖条件下小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的机制研究
4
作者 罗维 周越 +2 位作者 王俐颖 李显 艾磊 《免疫学杂志》 CAS CSCD 2024年第2期138-144,共7页
目的探讨TRIB3介导高糖条件下巨噬细胞促炎性M1型极化的下游机制。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象:1)细胞分为对照(CON)组和高糖(HG)组,Western blot检测TRIB3、p-AKT和AKT蛋白;在各组内分为DMSO组和SC79组/MK2206组,使用AKT激动... 目的探讨TRIB3介导高糖条件下巨噬细胞促炎性M1型极化的下游机制。方法以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象:1)细胞分为对照(CON)组和高糖(HG)组,Western blot检测TRIB3、p-AKT和AKT蛋白;在各组内分为DMSO组和SC79组/MK2206组,使用AKT激动剂SC79或抑制剂MK2206处理细胞,Western blot检测p-AKT和AKT蛋白。2)细胞随机分为Control vector-DMSO组、TRIB3 overexpress-DMSO组、Control vector-SC79组、TRIB3 overexpress-SC79组、Control vector-MK2206组和TRIB3 overexpress-MK2206组,CCK8检测细胞活性,相差显微镜观察细胞形态并采集图像,Western blot检测TRIB3、pAKT、AKT、iNOS和Arg-1蛋白,ELISA检测细胞培养液中IL-1β和IL-10分泌。结果1)与CON组相比,HG组TRIB3显著增加、p-AKT/AKT显著下降。HG-SC79组p-AKT/AKT显著高于HG-DMSO组且与CON-SC79组无显著差异;HG-MK2206组pAKT/AKT显著低于HG-DMSO组。2)与对应的Control vector组相比,TRIB3 overexpress组TRIB3均显著增加、p-AKT/AKT均显著下降;与对应的DMSO组相比,SC79组p-AKT/AKT均显著增加、MK2206组p-AKT/AKT均显著下降。与Control vector-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-DMSO组出现较多长梭形和不规则形细胞,iNOS和IL-1β显著增加,IL-10显著减少。与TRIB3overexpress-DMSO组相比,TRIB3 overexpress-SC79组长梭形和不规则形细胞明显减少,iNSO和IL-1β显著下降,IL-10显著增加;TRIB3 overexpress-MK2206组长梭形和不规则形细胞进一步增加,Arg-1和IL-10显著下降,IL-1β显著增加。结论高糖环境下巨噬细胞中激活的TRIB3蛋白通过靶向负调控AKT磷酸化水平发挥诱导巨噬细胞M1型极化、抑制M2型极化的促炎作用。 展开更多
关键词 小鼠raw264.7细胞 巨噬细胞极化 TRIB3蛋白 AKT磷酸化 高糖条件
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融合魏斯氏菌P2胞外多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖及免疫调节活性的影响
5
作者 赵丹 赵守祺 +2 位作者 王烁 陈曦 杜仁鹏 《黑龙江大学自然科学学报》 CAS 2024年第2期200-206,共7页
以乳酸菌融合魏斯氏菌(Weissella confusa,W.confusa)P2为出发菌株,通过去菌体、去蛋白、乙醇沉淀和凝胶过滤层析等步骤从发酵液中获得纯胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS),并以巨噬细胞RAW264.7为模型,采用CCK-8(Cell counting kit-8)... 以乳酸菌融合魏斯氏菌(Weissella confusa,W.confusa)P2为出发菌株,通过去菌体、去蛋白、乙醇沉淀和凝胶过滤层析等步骤从发酵液中获得纯胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS),并以巨噬细胞RAW264.7为模型,采用CCK-8(Cell counting kit-8)法、中性红实验和细胞因子试剂盒探究W.confusa P2 EPS的体外免疫调节活性。结果表明,W.confusa P2 EPS可以显著促进巨噬细胞的增殖,提升巨噬细胞的吞噬能力和释放NO的能力,并在生物量水平上提高巨噬细胞中白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)和白介素-10(Interleukin-10,IL-10)细胞因子的含量,但不能提高单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和白介素-6(Interleukin-6,IL-6)细胞因子的含量,说明W.confusa P2 EPS具有良好的免疫调节能力。本研究结果可为W.confusa P2 EPS的构效关系研究和免疫产品开发提供理论基础。 展开更多
关键词 融合魏斯氏菌 胞外多糖 raw264.7 增殖 免疫活性
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匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制
6
作者 刘佳 《河南医学研究》 CAS 2024年第7期1175-1180,共6页
目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2&... 目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。 展开更多
关键词 匹莫齐特 脂多糖 raw264.7细胞 信号传导及转录激活因子通路 诱导型一氧化氮合成酶
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异荭草苷通过MAPK/FoxO信号通路减轻LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应 被引量:2
7
作者 杨兰珠 李诗怡 +2 位作者 孙雨伟 王勇 杨靖亚 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第1期132-137,共6页
为了研究异荭草苷(Isoorientin,ISO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制,将对数生长期的RAW264.7细胞随机分为对照组、模型组(LPS 1μg·mL^(-1))和异荭草苷(ISO 2.5~40μg·mL^(-1)+L... 为了研究异荭草苷(Isoorientin,ISO)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制,将对数生长期的RAW264.7细胞随机分为对照组、模型组(LPS 1μg·mL^(-1))和异荭草苷(ISO 2.5~40μg·mL^(-1)+LPS)给药组。各组细胞培养24 h后,MTT法检测ISO对RAW 264.7细胞毒性,Griess法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量,q RT-PCR方法检测环氧合酶2(COX-2)m RNA的表达水平,蛋白质印迹分析法测定细胞中COX-2、JNK、p-JNK、p38、p-p38、FoxO1和FoxO3蛋白的表达。结果表明,与LPS模型组比较,ISO显著抑制LPS诱导的TNF-α(P<0.001)和NO(P<0.01)的产生,且未见其细胞毒性。此外,ISO以剂量依赖的方式显著抑制RAW 264.7细胞COX-2基因(P<0.001)和蛋白(P<0.05)的表达。蛋白质印迹分析显示,ISO显著抑制MAPK信号通路中p-JNK和p-p38的磷酸化,并减少Fox O1/3的核转位。综上所述,ISO可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其作用机制可能与其在MAPK/FoxO信号通路中发挥调节作用有关。 展开更多
关键词 异荭草苷 炎症 raw264.7巨噬细胞 MAPK信号通路 FoxO信号通路
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人参皂苷F2对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的改善作用 被引量:2
8
作者 牛志强 李琦 +5 位作者 刘亚男 胡烨烨 何姿良 胡卫成 陶永霞 张迹 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第1期27-33,共7页
作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗... 作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗炎作用。细胞活力实验表明人参皂苷F2在100μmol/L内对细胞无毒性作用,为安全浓度范围。人参皂苷F2可以显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞NO释放,且呈剂量依赖性抑制(0~100μmol/L)。人参皂苷F2(50、100μmol/L)也呈剂量依赖性抑制一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,100μmol/L时显著抑制iNOS和TNF-α的mRNA表达。经人参皂苷F2处理可显著下调iNOS蛋白表达,但对COX2蛋白表达无显著促进作用(P>0.05)。此外,经扫描电镜(SEM)观察,100μmol/L人参皂苷F2处理可以显著改善LPS刺激RAW264.7细胞的细胞形态改变。蛋白印迹表明,人参皂苷F2提高了PDK1、AKT、IκB-α蛋白的表达,降低了AKT蛋白磷酸化、NF-κB的核易位。该文研究结果表明人参皂苷F2具有较好的抗炎作用,并可能通过AKT/IκB-α/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用,可为相关天然抗炎药物的开发提供理论支撑。 展开更多
关键词 人参皂苷F2 抗炎作用 raw264.7细胞
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桉柠蒎油抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及其机制研究 被引量:1
9
作者 邱新宇 颜丽珊 +8 位作者 康建英 顾春宇 王亦巍 聂红梅 孔静 王晶 肖莉 段兴华 张翼 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2024年第4期48-54,共7页
目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的RAW264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定... 目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的RAW264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定LPS处理后培养液中炎症因子的浓度;采用Western-blot法检测蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测LPS处理后核转录因子κB亚基(p65)、激活子蛋白1亚基(c-Jun)和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果ELP在6.25~400μg/mL的剂量范围内对LPS处理的RAW264.7细胞活力没有明显抑制作用。ELP(50~300μg/mL)能有效地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素-1β(IL-1β)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Rantes)的产生。ELP能剂量依赖性地降低Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白kappa B抑制因子激酶α/β(IKKα/β)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38、p65、核因子kappa B抑制蛋白α(IκBα)、c-Jun和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平。ELP同时能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞p65、c-Jun和IRF3的入核。结论ELP能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制与阻断TLR4/NF-κB、TLR4/AP-1和TLR4/IRF3信号通路有关。 展开更多
关键词 桉柠蒎油 脂多糖 raw264.7细胞 炎症 Toll样受体4信号通路
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模拟失重对小鼠巨噬细胞RAW264.7生物学功能的影响 被引量:1
10
作者 李萌 张舒 +4 位作者 胡泽兵 孙权 徐丽群 张正祥 石菲 《空军军医大学学报》 CAS 2024年第2期141-145,151,共6页
目的通过2D回转器回转细胞模拟失重生物学效应,探讨模拟失重对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)多种生物学功能的影响特点,为深化空间失重免疫抑制机制研究提供理论依据和数据支撑。方法将RAW264.7细胞分为对照组(NG组)、模拟失重组(SMG组),利用2... 目的通过2D回转器回转细胞模拟失重生物学效应,探讨模拟失重对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)多种生物学功能的影响特点,为深化空间失重免疫抑制机制研究提供理论依据和数据支撑。方法将RAW264.7细胞分为对照组(NG组)、模拟失重组(SMG组),利用2D回转器模拟失重72 h后,采用CCK-8法和EdU法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞的增殖能力变化;细胞划痕实验和Transwell小室法检测巨噬细胞迁移功能的变化;探针DCFH-DA标记,倒置荧光显微镜观察和拍照检测巨噬细胞分泌活性氧(ROS)的变化。结果RAW264.7巨噬细胞模拟失重72 h后增殖受到抑制,CCK-8实验结果显示,NG组的细胞增殖速率显著高于SMG组(P<0.05);EdU染色结果显示,SMG组EdU掺入RAW264.7细胞核的量较NG组减少(P<0.01)。细胞划痕、Transwell实验检测表明72 h模拟失重对巨噬细胞的迁移能力有明显影响,与NG组相比,模拟失重后RAW264.7细胞迁移能力增强(P<0.05);探针DCFH-DA标记检测提示模拟失重对巨噬细胞分泌ROS有明显抑制作用(P<0.01)。结论回转模拟失重对RAW264.7细胞的生物学功能具有影响,表现为RAW264.7迁移运动能力增强,细胞增殖与ROS分泌能力受到抑制。 展开更多
关键词 模拟失重 巨噬细胞 细胞迁移 细胞增殖速率 raw264.7 活性氧
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陈皮精油对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症的干预作用
11
作者 刘玲 史万玉 +3 位作者 李秀梅 王明华 翟向和 周炜炜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期4153-4160,共8页
基于脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞模型研究陈皮精油抗炎作用。通过Griess法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌水平,采用Real-time PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素6(in... 基于脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞模型研究陈皮精油抗炎作用。通过Griess法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌水平,采用Real-time PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)mRNA的表达水平。结果显示,陈皮精油显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的含量,抑制iNOS、COX-2、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达。综上所述,陈皮精油通过抑制炎症因子的分泌和表达,有效缓解由LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应。 展开更多
关键词 陈皮 精油 抗炎 LPS raw264.7细胞
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当归苯酞riligustilide抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应及机制研究
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作者 刘员 王欢欢 +1 位作者 吕洁丽 张来宾 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第7期140-146,I0026,共8页
目的研究当归苯酞二聚体riligustilide(DG2)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用,并探讨其作用机制。方法通过LPS诱导建立RAW 264.7细胞炎症模型,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, M... 目的研究当归苯酞二聚体riligustilide(DG2)对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用,并探讨其作用机制。方法通过LPS诱导建立RAW 264.7细胞炎症模型,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法考察DG2对RAW 264.7细胞存活率的影响,Griess法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞释放炎症介质一氧化氮(nitric oxide, NO)的影响,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞分泌炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]的影响,Western blotting法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2),以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)、核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription, STAT)信号通路的影响,免疫荧光法考察DG2对LPS诱导的RAW 264.7细胞STAT3核转位的影响。结果DG2浓度在64μmol/L下对RAW 264.7细胞存活率无影响,DG2能显著降低LPS诱导的RAW 264.7细胞释放NO的水平(P<0.001)[IC_(50)=(26.13±5.75)μmol/L],与阳性对照槲皮素的作用相当[IC_(50)=(26.06±2.28)μmol/L];还能够显著抑制炎症因子IL-6和TNF-α的生成(P<0.01,P<0.001)。DG2能够显著抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS和COX-2蛋白的表达(P<0.01,P<0.001),显著抑制p-STAT3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和p-p38的蛋白表达(P<0.05,P<0.01),同时抑制STAT3的核转位。结论DG2可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,其机制可能与下调STAT、NF-κB和MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 当归 苯酞二聚体 抗炎 raw 264.7细胞 作用机制
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AEE对RAW264.7细胞中iNOS表达及NO合成的影响
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作者 刘亚娴 李剑勇 +6 位作者 李世宏 杨亚军 刘希望 葛闻博 白莉霞 秦哲 李存 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期16-21,30,共7页
为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定... 为了探讨阿司匹林丁香酚酯(AEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响,试验首先采用CCK-8法检测细胞存活率,采用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,采用实时荧光定量PCR扩增、免疫荧光技术和Western-blot技术测定iNOS mRNA和蛋白的相对表达量,最后通过硝酸盐还原酶测定法测定NO含量。结果表明:AEE和ox-LDL对RAW264.7细胞没有毒性。利用80μg/mL的ox-LDL可成功诱导RAW264.7细胞泡沫化,建立泡沫细胞模型,并且AEE可明显抑制细胞内脂滴的形成。ox-LDL可极显著上调细胞中iNOS mRNA及蛋白的相对表达量(P<0.01),并且极显著增加了细胞内NO含量(P<0.01)。经AEE预处理的RAW264.7细胞中iNOS mRNA及蛋白相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞内NO含量也极显著减少(P<0.01)。说明AEE可通过抑制iNOS的表达降低NO的合成,缓解RAW264.7细胞泡沫化,进而发挥抗动脉粥样硬化的作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 raw264.7 泡沫细胞 一氧化氮 诱导型一氧化氮合酶
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荞麦多肽对RAW 264.7细胞氧化损伤的保护作用
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作者 周柳莎 周青青 +3 位作者 胡香莲 俞瑜媛 徐海星 施永清 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期80-92,共13页
为提高荞麦蛋白生物利用度,利用Sephadex G-25凝胶层析和反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离制备荞麦抗氧化多肽(BAPs),对其结构进行表征。通过H_(2)O_(2)诱导RAW 264.7巨噬细胞建立氧化应激模型,评价BAPs对细胞氧化损伤的保护作用。结果表... 为提高荞麦蛋白生物利用度,利用Sephadex G-25凝胶层析和反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离制备荞麦抗氧化多肽(BAPs),对其结构进行表征。通过H_(2)O_(2)诱导RAW 264.7巨噬细胞建立氧化应激模型,评价BAPs对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明:经分离纯化得到的BAPs纯度达96.25%,其分子质量为5.8 ku。BAPs对DPPH·、ABTS+·、·OH清除能力及BAPs的还原力以VC当量抗氧化能力(VCEAC)分别表示为(12.12±0.27),(153.82±5.04),(901.95±39.30),(109.23±1.18)μg/mg。在细胞试验中,BAPs质量浓度达200μg/mL时,相较于模型组,对所有测定抗氧化指标均产生显著性(P<0.05)影响,细胞存活率显著提高13.80%,细胞内活性氧(ROS)水平下降40.63%,丙二醛(MDA)含量下降11.92 nmol/mg prog,超氧化物歧化酶(SOD)活力和过氧化氢酶(CAT)活力分别提高23.48 U/mg prot 15.71 U/mg prot。BAPs能有效抵抗RAW 264.7细胞产生的氧化应激反应,为开发荞麦多肽为天然抗氧化剂提供理论依据。 展开更多
关键词 荞麦多肽 分离纯化 结构表征 raw 264.7巨噬细胞 抗氧化
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基于RAW264.7细胞模型的槲皮万寿菊素与叶黄素协同改善急性肺损伤的作用机制
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作者 冯丹琦 王向红 +4 位作者 吴迪 连运河 程鑫颖 刘卫华 米思 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第17期96-104,共9页
为解析槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独处理以及联合处理对急性肺损伤的作用机制,以脂多糖诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,以一氧化氮(nitric oxide,NO)相对含量为评价指标,采用联合指数法确定槲皮万寿菊素与叶黄素以及槲皮素与叶黄素... 为解析槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独处理以及联合处理对急性肺损伤的作用机制,以脂多糖诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,以一氧化氮(nitric oxide,NO)相对含量为评价指标,采用联合指数法确定槲皮万寿菊素与叶黄素以及槲皮素与叶黄素的最佳复配比例;分析比较槲皮万寿菊素、槲皮素与叶黄素单独及联合处理对RAW264.7细胞中炎症因子(肿瘤坏死因子-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6)含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响;采用免疫印迹法测定核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路中p65、p50以及沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)的相对表达量。结果表明,槲皮万寿菊素与叶黄素高剂量3∶1(30μg/mL+10μg/mL)复配能够最大程度降低RAW264.7细胞中的NO相对含量。二者单独及联合作用均能通过降低炎症因子、丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽还原酶活性,下调NF-κB p65、p50以及NLRP3表达水平并上调SIRT1、Nrf2蛋白相对表达量发挥改善急性肺损伤的作用,且联合处理效果优于单独处理组。 展开更多
关键词 万寿菊 槲皮万寿菊素 叶黄素 槲皮素 raw264.7细胞 急性肺损伤
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蝙蝠草醇提物对脂多糖所致RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用
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作者 罗静 朱华 +3 位作者 张淼 林思 吴焕 许立拔 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期2763-2768,共6页
目的研究蝙蝠草醇提物对脂多糖(LPS)所致巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法采用MTT法检测蝙蝠草醇提物对RAW264.7细胞的毒性,检测细胞培养液中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,RT-qPC... 目的研究蝙蝠草醇提物对脂多糖(LPS)所致巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法采用MTT法检测蝙蝠草醇提物对RAW264.7细胞的毒性,检测细胞培养液中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,RT-qPCR法检测细胞COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达,Western blot法检测细胞iNOS、COX-2、p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达。结果蝙蝠草醇提物对RAW264.7细胞无明显细胞毒性。与LPS组比较,经蝙蝠草醇提物(20、60、120μg/mL)干预24 h后,细胞培养液中NO、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均降低(P<0.05,P<0.01),细胞内ROS水平、COX-2、iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达和iNOS、COX-2、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论蝙蝠草醇提物具有抗炎作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。 展开更多
关键词 蝙蝠草 醇提物 raw264.7细胞 脂多糖 炎症 NF-κB信号通路
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文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响 被引量:1
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作者 冯嫣 《粮食与油脂》 北大核心 2024年第2期141-143,154,共4页
通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子... 通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。 展开更多
关键词 文冠果叶黄酮 巨噬细胞raw264.7 细胞因子 TLR2受体
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依达拉奉对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用
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作者 李建芬 刘嘉欣 +1 位作者 黄凤蕊 罗球珠 《中国药业》 CAS 2024年第14期57-60,共4页
目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药... 目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药组(40μg/mL EDA)。采用Griess法检测细胞中一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞中JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平。结果 与0μg/mL比较,20,40,80,160μg/mL EDA处理下细胞存活率无显著变化(P <0.05)。与模型组比较,给药组细胞中NO,PGE2,IL-1β,IL-18,TNF-α,ROS水平均显著降低(P <0.05);IL-1β与IL-18 mRNA及蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3均显著降低(P <0.05)。结论 EDA可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活而抑制RAW264.7细胞的炎性反应。 展开更多
关键词 依达拉奉 炎性反应 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞raw264.7 JAK2/STAT3信号通路 作用机制
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叉分蓼多糖结构表征及其对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用
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作者 崔艳艳 袁永旭 +4 位作者 郭明坤 何文兵 李明 裴世春 李大军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第24期128-138,共11页
目的:探究叉分蓼多糖(Polygonum divaricatum L. polysaccharides,PSPDL)体外抗炎活性及其作用机制。方法:从叉分蓼中提取多糖,采用高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射、核磁共振波谱技术对其结构进行表征... 目的:探究叉分蓼多糖(Polygonum divaricatum L. polysaccharides,PSPDL)体外抗炎活性及其作用机制。方法:从叉分蓼中提取多糖,采用高效凝胶渗透色谱、高效液相色谱、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射、核磁共振波谱技术对其结构进行表征,并通过脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型评估其体外抗炎活性及其作用机制。结果:PSPDL的重均分子质量为59.475 kDa,主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1.69∶4.95∶1.04∶21.79∶19.01∶31.68∶19.84,是含有(1→4)-α-D-Glcp的α-吡喃型多糖;能够抑制炎症因子的释放及其相关mRNA的表达,改善氧化应激,下调p38、p-p38、IκB-α、p65和p-p65蛋白的表达水平。结论:PSDPL具有抗炎活性,其作用机制可能与调节炎症相关mRNA表达,调控丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子κB信号通路相关,本研究结果可为PSPDL资源的开发与应用提供科学依据。 展开更多
关键词 叉分蓼多糖 脂多糖 raw264.7细胞 炎症 丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子κB信号通路
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绿原酸抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症及机制探索
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作者 周云鑫 刘柯 丁军颖 《医学研究杂志》 2024年第1期70-74,79,共6页
目的明确绿原酸对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症的抗炎作用,揭示其可能的分子机制。方法以CCK-8法检测不同浓度绿原酸干预后RAW264.7的细胞活性;采用LPS刺激巨噬细胞RAW264.7,预制细胞炎性状态,设置空白对... 目的明确绿原酸对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症的抗炎作用,揭示其可能的分子机制。方法以CCK-8法检测不同浓度绿原酸干预后RAW264.7的细胞活性;采用LPS刺激巨噬细胞RAW264.7,预制细胞炎性状态,设置空白对照组(K组,n=3)、模型对照组(L组,n=3)和实验组(S组,n=3)分别给药,动态观察细胞形态;分别于24h及48h获取细胞沉淀及上清,以酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞上清中炎性细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)的浓度;采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)及核转录因子-κB(nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB)的mRNA表达。结果1μg/ml的LPS成功预制RAW264.7细胞炎性状态;12.5~200.0μg/ml的绿原酸对RAW264.7无明显毒性,50μg/ml及200μg/ml的绿原酸对RAW264.7细胞有明显的增殖作用(P<0.05);与模型对照组比较,实验组上清中IL-1β蛋白含量明显降低,Arg-1的含量明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,50μg/ml的绿原酸显著降低LPS诱导的炎性细胞中NF-κB、TGF-β1、PTGS2及HMGB1的mRNA表达(P<0.05)。结论绿原酸对LPS诱导的RAW264.7炎性反应有明确抑制作用,可能与调控HMGB1介导的NF-κB相关通路分子表达有关。 展开更多
关键词 绿原酸 脂多糖 raw264.7 抗炎
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