ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物促进小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对小鼠RAW264.7细胞凋亡和炎症因子表达的影响及机制。方法 分别用培养基、ox-LDL、β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、ox-LDL/β2GPI复合物、ox-LDL/抗β2GPI抗体复合物和ox-LDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理细胞。用TAK-242阻断Toll样受体4(TLR4)、雷帕霉素(rapamycin)阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)探究相关通路的作用。最后,用不同浓度的TNF-α刺激细胞。用凋亡试剂盒检测细胞的凋亡,实时定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA表达,Western blot法检测TNF-α、IL-1β、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)的蛋白水平。结果 ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能够诱导细胞凋亡、Bcl2表达降低、c-caspase-3表达增加,还可促进TNF-α和IL-1β表达,通路抑制剂可部分减轻凋亡水平和炎症因子表达;一定浓度的TNF-α可促进细胞凋亡。结论 ox-LDL/β2GPI/aβ2GPI复合物通过TLR4、mTOR通路诱导RAW264.7细胞表达炎症因子,促进细胞凋亡。

白英总皂苷的抗炎作用及机制研究

利用脂多糖刺激RAW 264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞系)产生的炎性反应,检测了白英总皂苷对RAW264.7细胞的TNF-α、MD2和TLR4蛋白表达的影响,探讨了白英总皂苷在炎性反应中的作用及分子机制.结果表明:白英总皂苷对RAW264.7细胞无毒性作用,但对TNF-α蛋白表达有抑制作用,且这一过程可通过抑制MD2和TLR4蛋白的表达实现.

广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响

确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。用筛选出的β-D-葡聚糖浓度作用巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.71h,再用含有β-D-葡聚糖的细胞培养液培养。收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量;提取细胞内总RNA,采用RT-PCR测定巨噬细胞TLR4 mRNA表达量;提取巨噬细胞总蛋白,采用蛋白免疫印迹western blot测定TLR4的蛋白表达。广叶绣球菌β-D-葡聚糖能够促进巨噬细胞RAW264.7增殖,增加NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量,提高TLR4 mRNA表达和蛋白表达,差异极显著(P<0.01)。TLR4抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量明显下降,差异极显著(P<0.01)。TLR2抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量下降,但差异不显著。广叶绣球菌β-D-葡聚糖可以通过细胞表面受体TLR4激活信号转导通路,增强下游细胞因子的释放,从而调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。TLR2可能不是广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫受体。

百合固金汤、四逆汤含药血清对TLR2和TLR4比值的影响

TLR2和TLR4是识别结核分枝杆菌的主要模式识别受体,TLR4也是LPS致炎通路中的经典受体,参与介导感染性休克的发生。许多治疗感染性疾病的方药均能对TLR2和TLR4产生影响,但是目前尚未有文献报道TLR2和TLR4比值与治疗药物之间的关系。作者通过"养阴"和"回阳"的代表方百合固金汤和四逆汤含药血清对Raw264.7巨噬细胞表面TLR2和TLR4的调节及抗MTB感染效果的研究发现,两种不同类型的方药对TLR2和TLR4比值的影响不同,提示中医不同治则在针对感染性疾病治疗中的机制差异。

枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

目的:探讨枸杞多糖(LBP)促进巨噬细胞RAW264.7活化的机制。方法:采用不同浓度(50、100、200 mg·L^(-1))的LBP刺激巨噬细胞RAW264.7,以100μg·L^(-1)的脂多糖(LPS)和100 mg·L^(-1)半乳糖(Gal)作为阳性药。LBP刺激24 h后,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)检测不同给药浓度的LBP(0、50、100、200、400、800 mg·L^(-1))对巨噬细胞RAW264.7的毒性影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-12的水平;分别通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)/Toll样受体2(TLR2)/巨噬细胞半乳糖型凝集素(MGL)通路中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达水平;结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,400、800 mg·L^(-1)LBP组干预巨噬细胞RAW264.7时,细胞存活率下降(P<0.05)。ELISA结果显示,与空白组比较,50 mg·L^(-1)LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-12水平(P<0.01);与空白组比较,100、200 mg·L^(-1)LBP能够促进巨噬细胞RAW264.7分泌IL-6水平(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组比较,不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L^(-1))作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2和MGL通路中MAPK关键分子(p-p38 MAPK、p-ERK、p-NF-κB、p-JNK)的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,200 mg·L^(-1)LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7p-NF-κB蛋白表达水平(P<0.01)。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,不同质量浓度的LBP组(50、100、200 mg·L^(-1))作用于巨噬细胞RAW264.7能够增强TLR4、TLR2信号通路中MAPK关键分子p38 MAPK、ERK、NF-κB、JNK的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,50、200 mg·L^(-1)LBP组能够促进巨噬细胞RAW264.7 JNK、ERK2 mRNA的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:LBP能够通过TLR2/TLR4//MGL通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化,参与免疫应答。

旋毛虫ES抗原对小鼠巨噬细胞TLR2/4mRNA表达的影响

为探讨旋毛虫ES抗原对RAW264.7细胞TLR2/4mRNA表达的影响,分别取经0、2、5、15、30、45μg/mL ES抗原作用24h的RAW264.7细胞和用15μg/mL ES抗原作用0、3、6、12、18、24h后的RAW264.7细胞,采用半定量PCR方法检测TLR2和TLR4mRNA的表达水平变化。结果显示,随着ES抗原浓度的升高,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,15μg/mL ES抗原组与空白对照组相比差异显著(P<0.05)。在15μg/mL ES抗原作用24h内,随着作用时间的延长,TLR2/4mRNA的表达量逐渐上升,作用18h后的表达水平升高,且与空白对照组差异显著(P<0.05)。证实,ES抗原可刺激RAW264.7细胞表面受体TLR2/4表达升高,且存在一定的剂量和时间效应。