MPLA衍生物的设计、合成及作为RBD⁃hFc新冠疫苗佐剂的活性研究

目的设计合成单磷酸脂质A(monophosphoryl lipid A,MPLA)的衍生物,考察其作为新冠病毒疫苗佐剂的开发潜力及C⁃1或C⁃6′位取代基对其活性的影响。方法以商业易得的葡萄糖胺为起始原料,经糖基化、缩合、磷酰化和氢化等反应完成目标化合物的合成。以临床应用的铝佐剂为阳性对照,将所得化合物与RBD⁃hFc重组蛋白新冠疫苗合用,于第0天和第14天经肌肉注射免疫小鼠。然后,分别在初次免疫后的第14、28、42、90天采血,通过检测抗体滴度与亚型、抗体血清抑制RBD结合ACE2的能力及中和抗体水平评价了目标化合物作为佐剂的免疫活性。结果合成得到5个MPLA的衍生物,产物及中间体结构经NMR和HRMS确证;生物活性测试结果表明,化合物1具有比铝佐剂更优的佐剂活性,化合物3和4的活性与铝佐剂相当。结论MPLA衍生物具有作为新冠病毒疫苗佐剂的开发潜力;初步构效关系分析表明,将MPLA的C⁃1位羟基以甲氧基和氨基替换会降低其活性,而将其C⁃6′的羟基以氨基取代可以提高活性。

TOD+RBD站城融合绿色多元化城市空间发展研究--以郑州滨河国际新城商业水街城市设计为例

城市TOD一体化综合开发大规模推进提升TOD效应的价值实现,文章以郑州滨河国际新城商业水街项目为例探索RBD模式下的多元化主题区策略,建立以5min生活圈为主的站区经济共同体,设计多元化的主题品质生活圈,以此推进绿色城市TOD一体化深度的实效发展。

基于深度学习的SARS-CoV-2RBD-ACE2结合亲和力预测方法

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的快速变异导致不断出现新的毒株.已有研究表明SARS-CoV-2的S蛋白受体结合域(Receptor Binding Domain,RBD)与宿主ACE2的结合亲和力与病毒的侵染能力相关.随着新型冠状病毒在全球的持续暴发,出现了大量RBD多点突变的新毒株.通过生物试验方式获得突变毒株RBDACE2结合亲和力费时费力,远远落后于突变株的积累,不能满足对该病毒实时监控的需求.为了快速预测具有多点突变毒株的结合亲和力,设计了一种深度神经网络模型.该模型结合卷积神经网络、循环神经网络与注意力机制,从RBD序列上学习关键特征并预测RBD-ACE2的结合亲和力,在真实数据集上对模型进行训练和评估.实验结果表明新模型可以有效地预测关切变异株的RBD-ACE2结合亲和力,也有助于对SARSCoV-2突变株的传播能力进行监控.

猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对,将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,合成多肽并免疫小鼠,制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定,通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对,利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0~14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0~7.14%)序列相似性非常低,具有良好的保守性;Western blotting结果显示,制备的多肽抗体1∶500、1∶1000、1∶2000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白,1∶1000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白,而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位,免疫后获得的抗体具有较好的特异性。

对孝感主城区规划和建设RBD的思考

在孝感主城区规划和建设RBD,对孝感建设武汉都市圈重要节点城市具有战略意义和现实意义。综合分析主城区四大片区,奥体片区具有区位交通、自然资源优势,以及与孝感城区、武汉消费市场的关联度,最适合建设RBD。在奥体片区建设RBD,第一,要建立国际视野,立足都市圈,高水平规划设计;第二,要招大引大,优先片区整体开发,着力解决投资难点;第三,要启动规划设计,道路建设先行,滚动分期建设奥体片区RBD项目。

哈尔滨中央大街城市RBD规划探索

哈尔滨最早形成的骨干街区之一,有着120余年历史的中央大街仅仅作为商业步行街并不能完全体现出中央大街应有的历史以及文化价值。在能保留其商业价值的前提下,将中央大街重新定位为旧城历史文化改造区型RBD进行规划探索。从街道空间及商业空间两方面出发对中央大街进行空间分析,总结得出中央大街现阶段所存在的问题。针对相应的问题结合旧城历史文化改造区型RBD的要素及功能特点提出四点规划建议。

仙台病毒递送新型冠状病毒RBD蛋白鼻内免疫接种增强呼吸道黏膜和系统性免疫应答的初步研究

目的 研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法 利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并用Western blotting验证;将RBD-Fc融合蛋白表达质粒转染293-T细胞大量表达并使用亲和层析进行蛋白纯化;通过SeV递送RBD-Fc蛋白进行鼻内免疫接种,同时设置RBD-Fc组、SeV组、PBS组作为对照,各组分别在2周后加强免疫1次,3周后检测血清样本和肺泡灌洗液(BALF)中特异性抗体水平。结果 RBD、Fc蛋白编码基因片段通过重叠PCR方法得到融合蛋白基因片段(RBD-Fc),成功构建pCAGGS-RBD-Fc真核表达质粒;Western blotting结果显示RBD-Fc融合蛋白的表达条带符合预期大小,大量表达后经亲和层析获得一条单一的接近Mr 60 000的条带,与预期大小一致,纯度高;与RBD-Fc组、SeV组、PBS组相比,SeV递送RBD-Fc蛋白通过鼻腔加强免疫小鼠后的血清样本和BALF中均可检测到RBD特异性IgG(血清样本:P<0.01;BALF样本:P<0.05),且BALF中RBD特异性IgA相比RBD-Fc组有一定升高。结论 SeV在递送SARS-CoV-2 RBD蛋白进行鼻内免疫接种方面能够诱导一定水平的黏膜免疫和系统性免疫,为呼吸道传染病的黏膜疫苗研究奠定了初步的实验基础。

城市游憩商业区系统SRBD的生长研究——以历史文化名城苏州为例

城市游憩商业区RBD是城市旅游研究的一个重要方面。一般认为 ,城市游憩商业区是城市中某一特定的区域 ,本文通过苏州实证性的研究指出 ,城市游憩商业区在城市发展的整体态势下呈现为动态的发展图景 ,尤其在城市飞速发展的今天 ,城市中游憩商业区的形态往往会突破单核的固定结构而表现为多核结构 ,整体上又往往呈现为链状、环状或网状形态等等 ,从而形成一个游憩商业区系统SRBD。系统中各游憩商业区因其自身形成背景、发育过程和功能定位等的不同而有着不同的发展趋势 。

城市RBD视角下旧工业区改造策略研究

随着新型城镇化建设的推广,国内各地旧工业区转型发展,然而多数旧工业区转型改造为创意产业园,存在同质化现象。本文从城市设计层面出发,阐述城市RBD相关理论及应用,探究旧工业区改造为城市RBD的可行性分析,进而提出城市RBD视角下旧工业区改造策略,为旧工业区转型发展提供新思路。

新型冠状病毒RBD蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

为原核表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(简称新型冠状病毒,severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)并制备多克隆抗体,利用基因克隆技术将RBD基因连接到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)上,电转化至大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞,利用优化后的表达条件大量表达重组蛋白,经亲和层析纯化后通过SDS-PAGE检测蛋白的表达情况。利用GST-RBD融合蛋白作为免疫抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot分析抗血清的效价和特异性。PCR鉴定和序列测定结果显示,成功构建了重组载体pGEX-RBD和pET-RBD,在大肠杆菌中实现了GST-RBD和RBD-His融合蛋白的可溶性高效表达。研究获得的多克隆抗体的滴度达到约1∶3000,并具有良好的结合特异性。原核表达的可溶性新型冠状病毒RBD重组蛋白具有良好的免疫原性,为后续制备基因工程抗体奠定了实验基础。

论中小城市游憩商业区(RBD)的开发研究——以江苏省常州市为例

城市游憩商业区(RBD)是都市旅游研究的一个重要方面。文章通过对RBD概念的分析,以及比较中小城市发展RBD与大城市发展RBD的异同点,阐明了中小城市在发展RBD时的注意点。结合常州的实际情况,指出了其发展城市RBD的必要性和可能性,并提出打造一个以"红梅公园"为中心,向四周延伸辐射的综合性、多元化、高档次的城市游憩商业区。

武汉市RBD形成及其对城市发展的影响

首先对RBD的定义作了辨析,然后界定了武 汉市RBD的地域范围,在此基础上分析了促 使它形成的6要素。最后从RBD对武汉市地域 空间、商业、交通、文化游憩、环境诸方面 探讨了RBD区域对武汉城市发展的影响。

广州城市游憩商业区(RBD)的形成与发展

城市游憩商业区作为城市中一种新的功能区已逐渐成为城市新的空间要素 ,为旅游者、本地及周边地区的居民承担着提供旅游、休闲、娱乐、购物等功能 ,并作为城市游憩系统中的重要组成部分。本文对初具规模的广州城市RBD———天河城地段进行实证研究 ,分析城市RBD的形成过程和发展特点 ,总结其形成机制。

基于休闲商务功能视角的RBD规划初探——以转型中的东莞市东城区为例

休闲商务区(RBD)是重要的综合性城市功能区,对城市发展有促进作用。在面临经济转型困境、具备打造RBD基础条件的情况下,东莞市东城区以打造成东莞市区休闲商务区为发展目标,在高档休闲度假业、高档休闲商业、高档房地产业和区域性总部经济基地的支撑和促进下,形成核心功能区、支撑功能区、基础功能区及辅助功能区的空间结构。

国内城市游憩商业区(RBD)研究述评

作为一种重要的综合性城市功能区,RBD越来越受到我国地理学界、旅游学界、城市规划界的关注。本文从RBD的概念及比较、类型、服务对象与功能、形成机制及对城市的影响、开发与规划、消费者行为等方面对我国国内研究的现状进行了全面的归纳总结,指出了研究的不足之处。针对大众休闲旅游时代的到来和中心城市生产性服务业发展的背景,导致RBD出现商务化特征等现象,作者提出了加强理论研究与学科整合、促进方法更新,以人为本、加强微观研究、推动规划实践,结合旅游发展动态开拓新研究领域,加强RBD商务化研究等建议。

RBD反应器生产细菌纤维素的研究

使用RBD反应器发酵生产细菌纤维素,优化试验菌株在RBD反应器中的工艺条件。当培养基中的初糖浓度为3%时糖转化率较高,为1∶5.3;RBD反应器转速为20 r/min、发酵过程中发酵液pH值控制在4.5时细菌纤维素的产量较高;发酵液限制糖浓度为1.5%,维持该浓度时细菌纤维素的产量可达到7.63g/L。

RBD对老城区功能改造的模式研究

随着体验经济时代的到来和新城市主义的兴起,城市新老城区的协调发展问题被提上了议事日程,尤其是老城区的功能改造已成为我国城市发展进程中迫切需要解决的突出问题。在RBD理论研究日益成熟和实践经验日益丰富的条件下,特色步行街作为老城区功能改造的一种流行模式已表现出明显的局限性,迫切需要进行RBD模式的创新与发展。为此,可遵循用差异激活个性的老城区功能改造理念,采用文化社区、休闲社区、娱乐社区、主题公园和主题街区五种RBD创新模式。

从CBD到RBD——传统CBD发展方向探析

在评述国内外对CBD与RBD研究的基础上,深入分析了CBD与RBD的关系,提出CBD根据其自身发展的需要,发展RBD的可能。接着以此为切入点,先指出传统CBD发展的障碍,然后论证传统CBD转型为RBD是克服其发展障碍的有效途径。

城市RBD形态模式研究——以上海、武汉为例

城市游憩商业区是城市游憩业发展的重要形式之一,同时也是城市旅游的重要吸引物.本文对RBD相关概念进行界定,并归纳出城市RBD 3种主要类型.在此基础上,通过对上海、武汉RBD发展研究,提出了城市RBD发展的主要形态模式,旨在为国内城市RBD的建设提供参考.