类风湿性关节炎新型自身抗原视黄醇结合蛋白1类似蛋白相关分析研究

目的:类风湿性关节炎(RA)是一种全身性自身免疫性疾病,但其发病原因尚不清楚。因此,迫切需要找到诱发此病的相关抗原,但国内外鲜有关于新的自身抗原的报道,本课题组运用克隆技术发现新型自身抗原。方法:从滑膜细胞中提取mRNA,构建c DNA文库,取类风湿性关节炎患者关节滑膜液中的抗体作为探针,筛选c DNA基因库,得到阳性克隆后测序分析,寻找已知相似基因,进而分析蛋白质的构造和Northern印迹杂交(Northern blotting)。结果:发现新型自身抗原c DNA克隆,其与视黄醇结合蛋白1(RBP1)有36.5%的氨基酸序列相同,并发现AT-rich interaction domain,chromo domain,A+T-hook以及TAF homology domain这些特殊的蛋白质构造。因此将其命名为视黄醇结合蛋白1类似蛋白(RBP1 like protein,Rbik)。Rbik RNA不仅表达于滑膜,也表达于心脏、小肠、肌肉等多个器官组织中。结论:此自身抗原的发现可为类风湿性关节炎的实验诊断和治疗提供新的可能指标和靶点。

克隆探针技术发现类风湿性关节炎新型抗原

类风湿性关节炎(RA)是一种病因尚未明了的全身性自身免疫性疾病。近年来,在RA的治疗方面国际科研界有了较大的进展,但目前仍然很少有新的自身抗原被发现。本课题首次运用患者关节滑膜液中的抗体作为探针,提取RNA,进行cDNA基因库免疫筛选。结果发现新型自身抗原cDNA克隆,因其与RBP1有36.5%的氨基酸序列相同,因此命名RBP1like Protein(Rbik),此自身抗原的发现有可能为类风湿性关节炎的实验诊断和治疗提供新的可能指标和靶点。

转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对Cbfa1和Ose2元件启动子活性的影响

目的探讨Notch信号转录调控因子CBF1(RBP-Jκ)对核心结合因子Cbfa1基因启动子和骨钙素基因启动子区域Ose2元件启动子活性的影响。方法构建CBF1真核表达载体pCMV-Tag4/CBF1;将梯度浓度pCMV-Tag4/CBF1和荧光素酶报告质粒共转染两成骨前体细胞系Kusa-A1和Kusa-O,用双荧光素酶报告基因方法检测Cbfa1和Ose2元件启动子活性。结果随CBF1浓度增加,Kusa-A1和Kusa-O细胞中Cbfa1和Ose2元件启动子活性均逐渐提高。统计分析表明Kusa-A1细胞中1/40μg/μL实验组两启动子活性均与对照组差异显著;Kusa-O细胞中1/40μg/μL实验组Ose2元件启动子活性与对照组差异显著。结论转录调控因子CBF1可以促进Cbfa1和Ose2元件启动子活性,从而可能对细胞的成骨性分化有正调节作用。