白点状眼底与视网膜色素变性共存家系的RDH5基因诊断

目的:在母亲诊断为白点状眼底(fundus albipunctatus,FA)而3个子女均为视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的家系中进行RDH5基因的分子遗传学检查,确定一种新型变异。方法:对家系成员进行系统的眼科检查,同时采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序法对RDH5基因的编码区进行基因组测序和突变筛查,并在100名正常对照者中对RDH5基因突变的检测结果进行验证。结果:先证者的母亲确诊为FA,而3个子女诊断为RP。母亲、哥哥和姐姐的RDH5基因检测出c.689_690CT>GG突变,而先证者及其母亲存在已报道的c.928delCinsGAAG变异。结论:本家系中母亲的FA来源于复杂的异质突变,其中c.689_690CT>GG突变是包括欧美各国在内没有报道过的新变异,而3个子女患RP的分子遗传学病因还有待进一步的研究。

近视相关RDH5基因内含子区单核苷酸多态性位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响

目的探讨近视相关视黄醇脱氢酶5(RDH5)基因内含子区单核苷酸多态性(SNP)位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响。方法从初始密码子ATG往前扩增1500 bp的5’端上游调控区域作为拟研究的启动子片段,以包含rs3138144位点的长220 bp的区段作为研究的内含子片段。与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组质粒的克隆与鉴定,构建rs3138144荧光素酶报告基因质粒野生型(pGL3-RDH5-G)和rs3138144荧光素酶报告基因质粒突变型(pGL3-RDH5-C)载体,同时设定pGL3-Basic作为对照。与内参质粒pRL-TK共转染ARPE-19细胞及HEK293细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测报告基因活性。结果在ARPE-19细胞中,野生型rs3138144位点荧光素酶相对活性为0.806±0.156,突变型为0.525±0.130,对照为0.085±0.027,野生型荧光素酶相对活性高于突变型及对照,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在HEK293细胞中,野生型rs3138144位点荧光素酶相对活性为0.075±0.013,突变型为0.040±0.006,对照为0.004±0.001,野生型高于突变型及对照,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。等位基因G及等位基因C均能与核蛋白中的某种转录因子结合,灰度值分析结果提示等位基因G结合能力更强。结论RDH5基因内含子区SNP位点rs3138144(G>C)影响RDH5基因启动子转录活性。