肝癌患者集束电极射频消融治疗前后T淋巴细胞及红细胞免疫功能的研究

目的 研究肝癌患者接受射频消融治疗前后机体T淋巴细胞及红细胞免疫功能的变化。方法 分析 12 0例肝细胞肝癌患者射频消融治疗前和治疗后 3d ,7d和 14d外周血淋巴细胞亚群(T 3 ,T 4,T 8,T4/T 8)和红细胞C 3b受体花环 (RBC C3bR )及免疫复合物花环 (RBC ICR )形成率。结果 所有肝癌患者在射频消融治疗后 7d和 14d ,T 3细胞 ,T 4细胞 ,T 4/T 8及RBC C 3bR ,RBC ICR形成率均明显高于治疗前 (P <0 .0 5 )。结论 采用射频消融治疗肝癌 ,可以改善患者的细胞免疫状态。

清肝冲剂对免疫性肝炎模型小鼠的保护作用及免疫调节作用

观察了清肝冲剂对小鼠免疫性肝损伤及免疫功能的影响。结果表明，清肝冲剂灌胃６４ｇ／（ｋｇ．ｄ）对ＢＣＧ（卡介苗）加ＬＰＳ（脂多糖）诱导的小鼠免疫性肝炎有明显保护作用，可降低肝损伤小鼠血清丙氨酸氨基转换酶（ＡＬＴ）和门冬氨酸氨基转换酶（ＡＳＴ）活性。清肝冲剂１６ｇ／（ｋｇ．ｄ）、３２ｇ／（ｋｇ．ｄ）、６４ｇ／（ｋｇ．ｄ）能提高免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，吞噬百分率和吞噬指数均明显升高；能明显促进刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的小鼠体内淋巴细胞转化，淋巴细胞转化率显著升高；清肝冲剂增加鸡红细胞（ＣＲＢＣ）致敏小鼠溶血素抗体的生成，并能增加ＣＲＢＣ致敏小鼠脾指数。结果提示，清肝冲剂对小鼠免疫性肝损伤有保护作用，对小鼠细胞免疫和体液免疫均有免疫调节作用。

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞PD-L1表达的相关研究

目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)的PD-L1表达水平,及其对DCs刺激T细胞增殖的影响。方法:采集22例慢性HBeAg阳性CHB患者、8例急性恢复期乙型肝炎(AHB)患者和10例健康人(NC)的外周血,分离单个核细胞(PBMC)并诱导DCs的增殖和活化。相对荧光定量PCR测定DCs的PD-L1、PD-L2分子mRNA水平,流式细胞术测定DCs表面PD-L1和PD-L2的表达率。同时,测定外周血DCs刺激同种异体反应性T细胞增殖的能力,及抗PD-L1单抗对CHB组DCs刺激功能的影响。结果:体外成功诱导了外周血DCs的增殖和成熟。与NC组相比较,CHB组和AHB组患者外周血DCs内PD-L1的mRNA水平均显著增高(P均<0.05),但CHB组和AHB组间差异无统计学意义。CHB组患者外周血DCs表面PD-L1表达率较AHB组、NC组均有明显增高(P均<0.01)。而外周血DCs的PD-L2 mRNA水平及PD-L2在DCs表面的表达率在各实验组之间无明显差异(P均>0.05)。CHB组外周血DCs刺激T细胞增殖的功能较AHB组和NC组明显降低(P均<0.01),抗PD-L1抗体能显著增强CHB患者DCs刺激T细胞反应的能力。CHB患者外周血DCs表面PD-L1表达率与血清HBV病毒载量成正相关(r=0.34,P=0.007)。结论:外周血DCs表面PD-L1表达水平在慢性HBeAg阳性乙肝患者明显升高,抗PD-L1抗体可有效增强CHB患者外周血DCs刺激T细胞增殖反应的能力,表明PD-L1的高表达可能与T细胞免疫反应低下和HBV病毒高复制密切相关。

隐孔菌多糖成分对致敏大鼠气道高反应性和炎症细胞的影响

目的 :研究隐孔菌多糖成分对大鼠气道高反应性的影响 ,初步探索其作用机制。方法 :采用卵白蛋白致敏雾化吸入攻击制备大鼠哮喘模型 ,隐孔菌多糖成分 A、B(5 mg/ kg、2 0 mg/ kg)和酮替芬 (5 mg/ kg)及溶媒对照(等量生理盐水 )灌胃 10 d。用甲酰胆碱激发气道高反应性后 ,行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗 ,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类 ,和腹腔灌洗液中脱颗粒肥大细胞及白细胞分类。结果 :隐孔菌多糖成分 A、B均能明显抑制致敏大鼠抗原攻击后气道阻力的增加及肺顺应性的下降 ;减少支气管肺泡灌洗液中白细胞总数 ,降低嗜酸细胞的数目 ,以多糖 B作用更明显 ;多糖 A和多糖 B也明显抑制腹腔肥大细胞脱颗粒及腹腔嗜酸性粒细胞的渗出。结论 :隐孔菌多糖 A、B成分抑制大鼠的气道高反应性 ,其作用可能与稳定肥大细胞膜、抑制嗜酸细胞炎症和趋化有关。

灸刺对实验性类风湿性关节炎大鼠红细胞免疫功能和血浆皮质醇影响的观察

本文对采用Ｆｒｅｕｎｄ氏完全佐剂复制的实验性类风湿性关节炎大鼠施以麦粒灸，并加用皮肤针在关节肿胀部位叩刺出血，每日１次，治疗２１天。结果：灸刺组ＲＢＣ·Ｃ３ｂＲＲ显著高于模型对照组、激素治疗组及正常组（Ｐ＜０．０１）；其血浆皮质醇也高于模型组及正常组（Ｐ＜０．０５及＜０．０１）；关节病变减轻，全身一般情况亦近似于正常组，而明显优于激素治疗组。

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。

补肾健脾方药免疫药理作用比较

采用目前常用的醋酸氢化可的松致肾虚模型和大黄致脾虚模型，比较了传统经典方剂肾气汤（丸）和四君子汤对模型动物的淋巴细胞转化率、ＮＫ细胞活性、白介素１（ＩＬ－１）和溶血抗体产生能力的作用。结果表明，肾虚和脾虚模型动物免疫功能皆有显著下降（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），肾虚尤为明显。肾气汤对肾虚和脾虚模型均有明显的治疗作用（Ｐ＜０．０５），而四君子汤仅对脾虚模型有治疗作用。推测两种模型的成因和两种方剂的作用机理有所不同，同时提示如果在脾虚健脾治疗无效时。

血清Ⅳ型胶原测定对慢性肝病中医证型的诊断作用及临床意义

采用放射免疫法测定160例慢性肝病患者血清肝纤维化标志物Ⅳ型胶原（Ⅳ-C），以探讨在血清中Ⅳ-C的质量浓度ρⅣ-C与中医证型的关系及临床意义。结果显示，各中医证型组的ρⅣ-C均较对照组明显升高，其升高程度依次为肝郁脾虚＜瘀血阻络＜肝肾阴虚＜湿热中阻＜脾肾阳虚。统计分析表明，湿热中阻和脾肾阳虚组ρⅣ-C的升高与肝郁脾虚组比较存在显著性差异（P＜0．01）。提示：（1）测定ρⅣ-C对慢性肝病中医分型有一定指导意义；（2）肝纤维化在肝郁脾虚阶段已启动，但相对静止；（3）湿热中阻和脾肾阳虚是肝纤维化的活跃期，后者的病情尤其严重。

芪加合剂对荷瘤小鼠体液免疫功能的影响

目的 研究芪加合剂对荷瘤 (Lewis肺癌 )小鼠免疫功能的影响。方法 检测脾细胞产生IgM、血清中IgG含量和鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子 (TNF) ,以及鼠外周血象的测定。结果 芪加合剂 (13 75～ 2 7 5 g·kg-1)可使荷瘤小鼠低下的IgM、血清中IgG含量恢复至接近正常水平 ,可促进荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF ;还可使荷瘤小鼠低下的红细胞数、血红蛋白量、白细胞数和血小板数等血常规指标恢复至接近正常水平。结论 芪加合剂抑制肿瘤作用可能与其提高荷瘤小鼠的免疫功能有关。

大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定

目的 :克隆大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 (L TB)及霍乱弧菌肠毒素 B亚单位 (CTB)基因 ,构建其表达载体。方法 :采用高保真 PCR分别从 E.coli4 4 815株与 V.cholerae东 74株基因组 DNA中扩增 L TB与 CTB基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列。分别构建 p ET32 a的 LTB及 CTB表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达。采用 SDS- PAGE及 GM1- EL ISA鉴定表达产物。结果 :所克隆的 LTB和 CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为 99.12 %～ 99.71%和 98.5 4 %～ 99.4 2 % ,氨基酸序列同源性分别高达 97.5 8%～99.19%和 96.77%～ 99.19%。p ET32 a- L TB- BL2 1DE3和 p ET32 a- CTB- BL2 1DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的 30 %和 10 %左右。GM1- EL ISA结果证实 LTB及 CTB融合蛋白均能与牛 GM1结合。结论 :本研究成功地构建了 LTB与 CTB表达系统 ,所表达的 L TB与 CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性。

腹泻型肠易激综合征患者外周血T淋巴细胞亚群及血清微量元素含量变化研究

目的:通过测定腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者外周血T淋巴细胞亚群及血清Zn、Se、Fe、Cu含量变化,旨在探讨IBS的可能病因及发病新机制。方法:随机抽取30例D-IBS患者和30例健康志愿者的外周血标本,采用流式细胞技术,分别测定CD3、CD4、CD8T淋巴细胞亚群百分比,并计算CD4/CD8比值;采用原子吸收光谱法,测定血清Zn、Fe、Cu水平,用原子荧光分析法,测定血清Se水平。结果:D-IBS组外周血CD4T淋巴细胞水平及CD4/CD8比值较正常对照组明显降低(P<0.01);D-IBS组与正常组血清Zn、Se、Fe、Cu水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:外周血T淋巴细胞CD4水平及CD4/CD8比值降低提示D-IBS患者可能存在细胞免疫异常;D-IBS患者血清Zn、Se、Fe、Cu水平较正常对照组无统计学意义。

多种自身抗体联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值及意义

目的:通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者的抗核抗体(ANA)、抗核抗体谱(ANAs)及抗双链DNA抗体(dsDNA)的检测,评价这些自身抗体对SLE的诊疗价值,为临床提供诊断、治疗的依据。方法:选择SLE组患者90例、疾病对照组患者74例和正常对照组患者53例,采用间接免疫荧光法测定ANA,免疫印迹法测定ANAs,放射免疫法测定抗ds-DNA,对所选患者血清标本进行检测,并对结果进行回顾性分析。结果:SLE患者的抗dsDNA、AnuA、抗Sm敏感性为41.1%、32.2%、22.2%,特异性均为97.3%,阳性似然比分别为15.22、11.93、8.22,三者联合检测敏感性达到62.2%,特异性达到90.5%。结论:抗dsDNA、AnuA、抗Sm是SLE的诊断性标记抗体,特异性高,但敏感性低,联合检测可以避免因单项检测出现的漏诊,提高对SLE诊断的敏感性和诊断效率。

异种肝移植急性排斥反应中细胞凋亡的研究

目的 观察肝移植急性排斥反应中移植肝细胞凋亡 ,并初步探讨其分子机制。 方法 三袖套法建立肝移植急性排斥反应模型 ,普通组织及原位末端标记法检测移植肝中细胞凋亡 ,免疫组织化学方法检测移植肝中Fas -L ,TGF -β1的表达。 结果 在肝移植急性排斥反应中 ,移植肝出现细胞凋亡 ,并表达Fas -L ,TGF -β1,随着肝移植急性排斥反应的加重 ,其细胞凋亡增多 ,Fas L ,TGF β1表达增高。结论的 细胞凋亡作为细胞死亡的一种机制 ,存在于肝移植急性排斥反应中 ,其机制与Fas L ,TGF β1有关 。

HBV感染患者外周血T细胞PD-1基因表达水平的变化与意义

目的:分析HBV感染不同阶段患者外周血T淋巴细胞中PD-1(program death factor-1)分子的基因定量表达情况,探讨PD-1表达水平与血清学指标的相关性。方法:采集并筛选HLA-A2阳性的31例慢性乙型肝炎(CHB)患者、9例急性恢复期乙型肝炎患者(AHB)、15例乙肝相关性肝硬化患者(LC)和10例健康献血者的外周血,实时荧光定量PCR分析总T细胞内PD-1的mRNA水平,同时测定其配体PD-L1、PD-L2在外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标记物水平,荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果:以各基因在正常对照组的定量表达水平为基础值,HBeAg阳性CHB组T细胞内PD-1和PBMCs内PD-L1的mRNA表达水平明显升高,与HBeAg阴性CHB组和AHB组比较均有显著性差异,但与LC组比较无统计学意义(P>0.05)。外周血PBMCs内PD-L2的mRNA水平在各实验组中无明显差异(P均>0.05)。在所有检测的CHB患者中,外周血T细胞内PD-1表达水平在高病毒载量组(HBV DNA≥107拷贝/ml)明显高于低病毒载量组(HBV DNA<107拷贝/ml)和正常对照组,且与血清HBV病毒载量成正相关(r=0.41,P<0.01),但与血清ALT水平无明显相关性。结论:外周血T细胞中PD-1基因水平在慢性乙型肝炎患者组,尤其是在HBeAg阳性组和高病毒载量组明显上调,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒持续感染。

复方海藻制剂的药效学研究

采用小鼠 S180 实体瘤及艾氏腹水瘤模型 ,研究了复方海藻制剂的抗癌及免疫活性 ,结果发现 ,复方海藻制剂对小鼠 S180 肿瘤生长具有明显抑制作用 ,抑瘤率达 37.98%～ 50 .38% ;并能延长腹水型小鼠的生存期 ,延长率达 2 1%～ 51.33% ;同时促进小鼠脾抗体生成细胞的生成 ,增加荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬功能。

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。

脑血管病患者体液免疫功能的初步研究

本文测定了９０例脑血管病患者（脑出血４２例，脑梗塞４８例）血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ和Ｃ３水平，并与４０例健康对照者之值进行比较，结果发现脑血管病患者无论是出血还是梗塞，血清ＩｇＧ及Ｃ３均较对照组显著升高（Ｐ＜０．０５）；而脑出血组与脑梗塞组之间各体液免疫指标比较均无显著性差异。提示脑血管病与体液免疫功能的异常有着密切的关系，且脑出血和脑梗塞可能有着相同的血管免疫病理基础。

黄芪建中汤对脾虚小鼠免疫功能的调节作用

为探讨脾虚证的免疫学变化及黄芪建中汤的免疫药理作用，采用小鼠大黄脾虚模型，用核素掺入法测定白细胞介素＿２（ＩＬ＿２）活性、核素标记靶细胞测定自然杀伤细胞（ＮＫ）活性、微量细胞病变法测定免疫干扰素（ＩＦＮ＿γ）水平。结果脾虚小鼠的免疫指标明显低于正常组；黄芪建中汤可使之提高至正常水平，而对正常小鼠免疫指标无明显影响。提示免疫功能降低是脾虚证重要表现之一，黄芪建中汤对此有调整作用，可提高到接近正常水平。

2型糖尿病患者血糖胰岛素及红细胞免疫功能的变化

目的 :探讨 2型糖尿病患者高水平血糖和胰岛素 (INS)对红细胞免疫功能的影响。方法 :选取我院已确诊的 74例 2型糖尿病患者 (T2 DM) ,分为高胰岛素血症 (2小时 INS≥ 82 m U/ L)组 2 9例和非高胰岛素血症(2小时 INS<82 m U/ L)组 4 5例 ,分别于空腹和口服葡萄糖后 12 0分钟时测定其血糖、INS、红细胞 C3b受体花环率 (RBC C3b RR)及红细胞免疫复合物花环率 (RBC ICR)变化 ,并设正常对照 32例。结果 :2型糖尿病患者高胰岛素血症组和非高胰岛素血症组与正常对照组相比 ,空腹的 RBC C3b RR均明显降低 (P均 <0 .0 1) ,RBC ICR均明显增高 (P均 <0 .0 1) ;高胰岛素血症组较非高胰岛素血症组 RBC C3b RR降低更为明显 (P均 <0 .0 1)。高胰岛素血症组、非高胰岛素血症组 RBC C3b RR在口服葡萄糖 12 0分钟时均较各自空腹时降低 (P均 <0 .0 1)。结论 :2型糖尿病患者红细胞 C3b受体活性降低与 INS和血糖水平升高有相关性。

RNA致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注射荷瘤小鼠以进行免疫治疗,观察小鼠生存期,并与PBS、单纯DC组进行比较,同时检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等细胞因子,并行病理检查。结果:DC疫苗的CTL活性明显高于对照组(P<0.01)。两种途径注射DC疫苗,治疗组小鼠生存时间均明显延长(P<0.01),血清IFN-γ显著升高(P<0.01),IL-10明显下降(P<0.05),病理提示肿瘤出现坏死。两种注射途径间以上指标无明显差异。结论:肿瘤RNA冲击致敏DC注射荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,能显著延长动物生存期,并能诱导特异性抗肿瘤细胞免疫反应,其机理主要是Th1细胞介导的细胞免疫反应,且免疫反应的程度与注射途径无关。