弓形虫不同分离株α-Tubulin和β-Tubulin基因PCR-RFLP分析及其探针制备

目的不同分离株弓形虫α-Tubulin和β-Tubulin基因的PCR-RFLP分析及其杂交探针制备。方法PCR体外扩增α-Tubulin和β-Tubulin基因片段并进行RFLP分析;采用随机引物法用地高辛(DIG-11-dUTP)标记探针并同基因组DNA进行Southern杂交分析。结果从5株弓形虫分离株的基因组DNA中均扩增出α-Tubulin基因的818bp片段和β-Tubulin基因的959bp片段,RFLP分析弓形虫各分离株间酶切图谱未见差异。探针的特异性和敏感性较好。结论α-Tubulin和β-Tubulin基因在弓形虫中高度保守;α-Tubulin和β-Tubulin基因杂交探针可用于Southern杂交。

国人DMD基因多态标记P-20的高频多态位点及其在RFLP分析中的应用价值

P-20探针位于DMD基因突变热点区,是DMD基因诊断最常用的多态标记。作者在分析21个DMD家系时,除检测到多态片段Msp I 6.0/3.5kb外,在全部受检者中还发现另一组高频多态位点Msp I 2.2/1.8kb,二组多态联合检出杂合子频率为0.7004,使P-20对DMD的RFLP分析能力提高近一倍。根据缺失类型进一步分析了P-20区的基因图谱。

中国正常汉族人中apoA-Ⅰ基因区域限制性片段长度多态(RFLP)的研究

本文利用1kb的apoA-I cDNA探针,检测了56名正常个体的apoA-I基因区域的限制性片段长度多态,在中国汉族人群中首次报道了S_2突变位点的存在,其基因频率为0.143,高于高加索人的此基因频率(0.06)。S_2基因的检出和基因频率的获得为进一步揭示apoA-I基因区域在脂类代谢中的作用提供了一个很好的遗传标记。

用染色体原位杂交技术定位RFLP探针Fr.3-42于16p13

限制性片段长度多态性(RFLP)探针Fr.3-42(第九届人类基因定位国际会议编号D1(?)S21)为一长1.9kb的人类单拷贝EcoRI/HindⅢ片段,本实验采用染色体原位杂交方法,将该探针定位于16号染色体短臂末端(p13)。在另一研究中已证实Fr.3-42与人α-珠蛋白基因紧密连锁。

先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因的RFLP分析

本研究利用人心室肌球蛋白轻链1cDNA探针对先天性心脏病家系心室肌球蛋白轻链1基因进行了RFLP分析。从患有四种不同先天性心脏病的9个家系40名成员和13名无血缘关系患者的RFLP分析结果发现,有两个家系呈现限制酶切片段多态性,但这种限制性酶切片段多态性似与先天性心脏病的发生没有联系。

小麦-簇毛麦易位系 6VS/6AL中6VS的遗传传递及其所携Pm21基因的遗传稳定性分析

以簇毛麦(Haynaldiavillosa(L.)Schur)物种专化重复序列探针pHv62及小麦(TriticumaestivumL.)第六部分同源群短臂专化RFLP探针Psr113对扬94_138(“扬麦158”的改良品系)与易位系92R149配制的F2群体进行分析,观察到易位系中的6V短臂在杂交后代中的传递率为69.5%,接近75%的理论值。对来自同一个F1的另外147株F2群体以6个白粉菌菌株进行苗期抗病性测定,检测结果表明6VS上所携Pm21基因在向“扬麦158”小麦基因型转移时,按显性单基因遗传,并能很好地表达。

分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展

综述了限制性片段长度多态性技术(RFLP)在刚地弓形虫虫株分类方面的应用情况,从PCR、DNA探针技术和基因重组技术方面介绍了用于检测弓形虫DNA的分子生物学技术的研究进展,叙述了编码弓形虫主要蛋白基因的克隆及其表达产物在ELISA诊断中的应用。

我国4省、自治区细粒棘球绦虫DNA限制性片段长度多态性分析

运用 DNA探针pHD5、pEG18、pSM889 结合 Southern blot 杂交技术对采自我国新疆、青海、甘肃和宁夏等地的羊源细粒棘球蚴与采自青海、甘肃的牦牛源细粒棘球蚴进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果表明我国这些省、自治区采集的羊源细粒棘球蚴彼此之间未见有明显而稳定的杂交条带差异,属于同一虫株。青海和甘肃两省牦牛源细粒棘球蚴彼此之间也未见明显而稳定杂交条带差异,据杂交图谱判断似与羊源细粒棘球蚴属同一虫株。

pAW101-EcoRⅠ限制性片段在广东人群中的分布及其在法医学上的应用

用pAW1015kb的片段为探什,检测广东地区106例无血缘关系居民的EcoRI酶切限制性片段(RF)的分布情况。共发现长度各异的65条RF,每人只具有其中的1～2条。统计学分析证明,这些RF的分布符合哈一温氏平衡。无血缘关系的两个个体间具有完全相同的RF图谱的机会为0.00048(相当于l/2080)。家系调查结果表明,这些RF符合孟德尔遗传规律。本文是应用作者推导出来的计算RF大小的数学模式。此法在作亲权鉴定时,父权排除率可达0.914,相当于目前国内所用的血型测定法(包括HLA-A,-B抗原测定)所达到的总和,说明此方法在法医学个人识别和亲权鉴定中具有广阔的应用前景。

中国人及高加索人群P_(20)探针MSPI位点多态性差异

本文应用抗肌萎缩蛋白基因内P2o（DXS269）探针对中国人和高加索人MspI位点进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析，发现高加索人的杂交日上除了出现文献报告的多态性住点M1外。尚存在中国人杂交图上M2的1.9kb片段，且为高加索人的常有片段，同时存在与中国人相同的常有片段－小于1.okb（约o.3kb）的片段、此结果表明中国人和高加索人群在P2o区域经MspI酶切后的片段长度差异是MSPI识别位点的多态性。

新疆细粒棘球绦虫DNA限制性酶切片段长度多态性的初步分析

应用光敏生物素标记细粒棘球绦虫特异性DNA探针pEG18,对新疆5个不同地区绵羊、1例肝包虫病人、阿勒泰地区牛细粒棘球绦虫原头节以及羊源、牛源细粒棘球绦虫成虫DNA进行限制性酶切谱和Southern杂交分析。牛源、羊源样本经EcoRI酶切后产生的杂交图型基本上是一致的。BamHI酶切后产生的杂交结果,在新疆5个不同地区绵羊感染的细粒棘球绦虫没有发现差别,而人源和牛源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型与绵羊源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型大体上是一致的,但又存在着各自的差异。与绵羊样本相比,人源细粒棘球绦虫产生的杂交图型约在8.3kb处明显可见一条杂交带,而牛源细粒棘球绦虫约在3.5kb处有一条清晰的杂交带。这些差异的意义有待进一步研究。用光敏生物素代替同位素标记DNA探针,简便易行,稳定可靠,可取得满意的结果,在边远的地区是一种值得推广的方法。

应用pAW101 DNA探针作人流胚胎组织的亲权鉴定

用pAW1015kb的DNA片段为探针检测人流胚胎与其亲代的DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)的遗传关系。同时测定他们的某些同工酶(葡萄糖磷酸变位酶、酯酶D、乙二醛酶Ⅰ)型。在不违反孟德尔遗传规律的前提下,按M(?)ller-Essen公式计算,其父权概率都已达到或超过可以确认亲生关系的标准。这一方法的建立,使过去棘手的早期妊娠的亲权鉴定之难题获得圆满解决。此外,本文还对这一方法的优越性进行了讨论。

生物素标记DX_(13)探针及一例甲型血友病家系分析

以Bio-ll-dUTP替代dTTP经二步法缺口平移标记DNA片段制得生物素DX_(13)探针。其碱性磷酸酶ABC体系显色灵敏度为100fg(约5×10^(-18)mol);与5μg染色体DNA进行Southern印迹杂交,可得清晰的单拷贝杂交区带。以此探针对一血友病家系做RFLP分析,确定两成员为甲型血友病基因携带者。与32P探针对比,两种探针的杂交和分析结果完全一致。表明高标记的生物素探针可应用于单拷贝基因分析和基因诊断。

GITRL基因SNP-rs2236876分型方法的比较

目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,PCR-RFLP)法和直接测序法对GITRL SNPrs2236876A/G进行分型并比较。结果:PCR-RLFP法分型结果直接通过电泳图可见,适合少量的实验对象;TaqmanMGB探针法通过不同的荧光区分不同的基因型,适合大量的实验对象;直接测序法交由测序公司测定,样本数量浮动范围较大,费用较高。结论:Taqman-MGB探针法适用于GITRL基因rs2236876A/G基因分型,PCR-RFLP法适用于基因分型结果的验证,直接测序法适用于鉴定有争议的PCR-RFLP法的验证结果。

TaqMan-MGB探针检测GSTP1外显子5 SNP可行性研究

目的:评估TaqMan-MGB探针基因分型方法检测已知SNP的可行性,并与传统的PCR-RFLP方法比较。方法:高通量的TaqMan-MGB探针基因分型方法已被用来检测单核苷酸多态性(SNP)。在321例样本中,同时用TaqMan-MGB探针基因分型方法和PCR-RFLP方法检测GSTP1外显子5 SNP。结果:2种方法所得结果完全一致。野生型(AA)226例(70．4％),杂合子(AG)92例(28．7％),纯合突变型3例(0．9％)。结论:TaqMan-MGB探针基因分型方法是一种能快速、高度特异性、高度自动化检测SNP的方法,可用于大规模的基因分型。

用寡核苷酸探针(CAC)_5/(GTG)_5进行人的DNA指纹分析

在人或动物的基因组中,存在着类似于小卫星DNA的简单衔接重复单位,如(GACA)_4、(GATA)_4、(TCC)_5、(CA)_8和(CAC)_5等,由于这些重复单位在人或动物基因组中出现的数目和频率不同而表现出多态性。本文用人工合成的寡核苷酸探针(CAC)_5/(GTG)_5,调查了北京地区的50名无关个体,经过统计学处理,计算出无关个体的相关机率是3.8×10^(-10);此外,还对2个家系中的11名成员和1对双胞胎进行了检测,其结果显示子代中的杂交带分别来自父亲和母亲;双胞胎的DNA指纹图完全一致。研究结果表明,(CAC)_5/(GTG)_5探针检出的谱带具有高度的个体特异性(同卵双生子除外),并且谱带在亲代与子代间的传递符合孟德尔遗传规律。

基因检测结合Bayes分析在诊断脆性X综合征中的应用

应用Ｘ染色体长臂末端Ｓｔ１４－１（ＤＸＳ５２）多态探针对一个Ｆｒａ（Ｘ）家系进行限制性片断长度多态（ＲＦＬＰｓ）分析，在分析的１２名成员中，该探针显示了良好的多态性，与Ｆｒａ（Ｘ）位点的重组率为１４．３％。通过ＲＦＬＰｓ检测结合Ｂａｙｅｓ分析，新确定２例携带者，２例风险提高，３人排除携带者，为女性成员的生育提供了再发风险依据。

应用RFLP分析检测七个家系DMD基因携带者的研究

1985年～1990年我科对来自北方6省市21个DMD家系进行了系列研究。本文为研究的第8部分[1,2],应用DMD基因内部和侧翼序列探针对7个家系成员进行了RFLP连锁分析(包括15名肯定携带者及24名可能携带者)。结果证实,肯定携带者阳性率为100%,可能携带者阳性率为50%,其中13名可做产前诊断,并检出2个缺失型家系。

12个家系DNA指纹图的分析研究

用h296DNA指纹图,经Southern印迹法,对12个家系中57名相关个体的DNA指纹图进行了检测。家系分析表明:各家系内成员DNA指纹图中各片段均按孟德尔分离律传递;亲属间片段平均共有率及片段一致机率,在一级、二级亲属与无关个体间有明显差异,并对其应用价值进行讨论。

广西云南玉米霜霉病病原菌订正

在我国文献中广西云南玉米霜霉病菌名称为Peronosclerospora maydis(Racib.)C.G.Shaw。但是我们观测病菌孢子囊为长椭球形;在13℃—28℃产孢温度范围内,随温度升高孢子囊长度增加而宽度基本不变,表明它不是P.maydis,而是P.sacchari(T.Miyake)Shirai &.K.Hara,或P.philippinensis(Weston)C.G.Shaw。以四种Peronosclerospora的DNA及广西云南病菌的DNA与探针pCL.Y83杂交的RFLP图谱进一步证实了此结果,并表明P.sacchari与P.philippinensis为同种异名。因此我国广西云南玉米霜霉菌名称应为Peronosclerospora sacchari(T.Miyake)Shirai & K.Hara,现予订正。