RG-14260与雷帕霉素联合给药对两株子宫内膜癌细胞的作用

目的观察体外EGFR信号通路抑制剂RG-14260单独及RG-14260联合mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素对两株子宫内膜癌细胞(PTEN缺失的Ishikawa细胞和PTEN表达完整的HEC-1A细胞)增殖、凋亡、细胞周期及信号通路的影响。方法 MTT法检测抑制剂对细胞增殖的影响,金氏公式评价两抑制剂的协同效果;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;Western印迹检测细胞信号蛋白的表达。结果 RG-14260与雷帕霉素可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低pAKT含量,二者联合应用呈协同效应;RG-14260与Rapamycin对HEC-1A细胞上述作用不明显。结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加。

RG-14260增强子宫内膜癌细胞化疗敏感性研究

目的:研究酪氨酸磷酸化抑制剂RG-14260(RG)单独或联合阿霉素、顺铂及紫杉醇对子宫内膜癌ishikawa细胞增殖的影响,为临床应用RG治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法:应用10μmol.L-1RG与各1/2的IC50量的阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)及紫杉醇(PTX)联合,MTT法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR法检测RG、阿霉素、顺铂及紫杉醇对细胞表皮生长因子受体EGFRmRNA表达影响;Western blot法检测10μmol.L-1RG作用6,12,24 h后细胞p21蛋白表达水平。结果:RG可显著降低细胞EGFR基因mRNA水平,上调p21蛋白表达。结论:RG通过抑制EGFR信号通路,上调p21蛋白表达,增强化疗药物对子宫内膜癌细胞的杀伤作用。

信号通路抑制剂对两株子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的观察体外表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG-14260(RG)单独及RG-14260联合mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素Rapamycin(RA)对两株子宫内膜癌细胞(PTEN缺失的Ishikawa细胞和PTEN表达完整的HEC-1A细胞)生物学行为的影响。方法采用细胞形态学观察和细胞克隆形成法检测抑制剂对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;Transwell法检测细胞体外侵袭力的改变。结果 RG、RA均可明显增加Ishikawa细胞G1期细胞比例,降低S期细胞比例(P<0.05),RG、RA合用G1期细胞比例增加更明显(P<0.05),S期细胞比例下降更明显(P<0.01);RG、RA单用或联合使用均可诱导Ishikawa细胞凋亡,降低Ishikawa细胞存活率和侵袭力;RG、RA对HEC-1A细胞不敏感,经RG、RA单独或联合作用后各组HEC-1A细胞凋亡率、细胞存活率、侵袭力与相应处理的Ishikawa组细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞生物学行为明显改变,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加。

联合靶向阻断EGFR和mTOR信号通路增强紫杉醇对子宫内膜癌细胞化疗敏感性

目的观察紫杉醇联合阻断表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG-14260和阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对子宫内膜癌细胞株Ishikawa的影响。方法紫杉醇、RG-14260、Ra-pamycin单独和联合处理Ishikawa细胞后,MTT法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布;Transwell法检测细胞体外侵袭力。结果紫杉醇、RG-14260与Rapamycin均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低细胞侵袭力,三者联合应用呈协同效应(P<0.01)。结论紫杉醇联合RG-14260及Rapamycin靶向治疗剂能协同性地抑制子宫内膜癌细胞生长、降低其侵袭力,这种作用可能是通过增加G1期细胞阻滞及凋亡来实现的。

核心蛋白聚糖在两株子宫内膜癌细胞中的表达及意义

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG-14260(RG)单独及RG联合雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路抑制剂Rapamycin(RA)体外对两株子宫内膜癌细胞(PTEN缺失的Ishikawa细胞和PTEN表达完整的HEC-1A细胞)增殖及核心蛋白聚糖(DCN)表达的影响。方法两株子宫内膜癌细胞分别经RG及RG联合RA作用24 h后,免疫组织化学法检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达;RT-PCR法和免疫印迹法分别检测细胞内DCN基因和蛋白的表达改变。结果 RG单用及联合RA均可降低Ishikawa细胞PCNA阳性细胞表达率,促进细胞DCN基因和蛋白的表达;RG单用或联合RA对HEC-1A细胞的上述作用不明显。结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞表达DCN增多,反过来又促进细胞增强对相关信号通路抑制剂作用的敏感性。

核心蛋白聚糖在Ishikawa细胞中的表达及意义

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)信号通路抑制剂RG-14260(RG)单用及RG联合mTOR信号通路抑制剂亚罗莫司(RA)体外对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及核心蛋白聚糖(DCN)表达的影响。方法子宫内膜癌Ishikawa细胞经RG及RG联合RA作用后,采用免疫组织化学法检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,反转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)及免疫印迹法分别检测细胞内DCN基因和蛋白表达的变化。结果 RG单用及联合RA均可降低Ishikawa细胞PCNA阳性细胞表达率,促进细胞DCN基因和蛋白的表达,但二者合用效果更为显著。结论单独和联合EGFR及mTOR信号通路抑制剂均可在基因和蛋白水平上上调Ishikawa细胞内DCN的表达,而升高的DCN反过来又可增强信号通路抑制剂对细胞增殖的抑制作用。

mTOR信号通路在ishikawa细胞增殖中的作用

目的:观察经抑制剂作用后人子宫内膜癌细胞株ishikawa细胞生长和mTOR信号通路的变化,了解子宫内膜癌的发病机制。方法:MTT法和细胞克隆形成法检测抑制剂对细胞增殖的影响;RT-PCR和Western blot法从mRNA和蛋白质水平分别检测mTOR mRNA和下游磷酸化靶蛋白S6K1和STAT3表达。结果:雷帕霉素(rapamycin,RA)与酪氨酸磷酸化抑制剂(RG-14260,RG)可抑制ishikawa细胞增殖、降低其存活率,二者联合呈协同效应(P<0.01);ishikawa细胞中存在mTOR mRNA和下游磷酸化靶蛋白S6K1和STAT3高表达,经RA单独或联合RG作用后,各指标均下降,且二者合用效果更明显(P<0.01)。结论:mTOR信号通路参与了子宫内膜癌的形成和发展。