含 RGD 四肽的合成与功能

在血小板依赖的血栓形成中，纤维蛋白与血小板表面ＧＰＩＩｂ／ＩＩａ受体结合是重要步骤。在受体识别中，ＲＧＤ（ＡｒｇＧｌｙＡｓｐ，精·甘·天冬）是关键序列。含ＲＧＤ多肽的竞争抑制作用，表现为抗血栓作用。本文合成了ＲＧＤＳ，ＲＧＤＶ和ＲＧＤＦ３种四肽；测定了它们的舒血管活性和抗血栓活性；讨论了溶液中的构象对生物活性的影响。在大鼠血栓模型上，用５０μｍｏｌ·ｋｇ－１剂量，ＲＧＤＳ和ＲＧＤＶ无明显的抗血栓作用。用２５μｍｏｌ·ｋｇ－１剂量，ＲＧＤＦ的抗血栓作用有明显的统计意义。该结果与它们在溶液中的构象相关。３种四肽对主动脉条的舒血管作用体现另一种趋势，ＲＧＤＳ和ＲＧＤＶ显示明确的舒血管活性。小剂量时ＲＧＤＦ的舒血管作用与对照组相比，无统计学意义。

RGD修饰的低分子量鱼精蛋白/CpG ODN复合物的制备及抗肿瘤活性

目的利用RGD修饰的低分子量鱼精蛋白(low molecular weight protamine,LMWP)包裹CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)制备复合物,评价其对CpG ODN抗肿瘤活性的影响。方法基于静电引力将RGD-LMWP与CpG ODN以不同质量比共孵育制备复合物,并利用凝胶阻滞实验分析RGD-LMWP对CpG的缩合能力;使用zeta电位/粒度仪对RGD-LMWP/CpG复合物的粒径和zeta电位进行表征;采用体外细胞实验评价RGD-LMWP/CpG复合物对肿瘤细胞的摄取效率和细胞毒性。结果采用共孵育法成功制备了RGD-LMWP/CpG复合物。当RGD-LMWP与CpG的质量比为3∶1时,RGD-LMWP能完全压缩CpG。此时,复合物的平均粒径和zeta电位分别为119.7±1.2nm和47.9±0.5mV。体外细胞实验表明,与游离CpG比较,RGD-LMWP/CpG(3∶1)复合物能显著提高人子宫颈癌细胞株(HeLa)细胞对CpG的摄取效率,抑制HeLa细胞的增殖。结论RGD-LMWP与CpG结合形成的复合物可以有效地将CpG递送至肿瘤细胞内并诱导肿瘤细胞凋亡,是一种具有研究前景的抗肿瘤给药方案。

RGD肽偶联材料在实体瘤治疗中的应用

化疗药物的渗透性差和非选择性分布是实体癌化疗的主要障碍。近年来,很多研究通过RGD肽及其衍生物与药物分子或载体材料偶联再形成纳米药物来增加化疗药物的肿瘤靶向性及肿瘤渗透性来改善实体癌的治疗效果。本文介绍了实体癌治疗障碍,分析了RGD肽及其衍生物的作用机制,并对其与药物分子及脂质材料偶联形成的靶向材料在实体癌治疗中的应用及研究进展进行了综述。

云南霉素-RGD二甲酯偶联物的合成及其抗肿瘤细胞侵袭活性

目的制备云南霉素(yunnanmycin,YNM)与抗黏附肽RGD(Arg-Gly-Asp)的偶联物,增强RGD肽的细胞毒作用。方法化学方法合成云南霉素与RGD肽的偶联物,MTT法检测偶联物的细胞毒作用,Boyden chamber法分析偶联物的抗肿瘤细胞侵袭活性。结果合成了云南霉素与RGD肽的偶联物,其主要成份为云南霉素-RGD二甲酯。偶联物的细胞毒作用较RGD肽强,但与云南霉素相比有所下降;偶联物具有抗肿瘤细胞侵袭的能力,抗侵袭的能力与RGD肽相当。结论偶联物具有抗肿瘤细胞侵袭的活性,且细胞毒作用较RGD肽强。

T-7-RGD肽对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)的影响

目的:研究改造后肿瘤抑素7肽(T-7-RGD肽)对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响。方法:采用生物合成技术合成了T-7-RGD肽,高效液相和质谱分析显示纯度为98.67%;通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察T-7-RGD肽对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响。结果:由MTT实验和生长曲线实验得出,人非小细胞肺癌细胞A549和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为150.34μg/ml和420.81μg/ml,且呈剂量、时间依赖性。T-7-RGD肽对A549作用明显,改变了其生长曲线的基本走势,而对人脐静脉内皮细胞只是产生了数量上的改变,生长曲线基本走势没有改变。HE染色后人非小细胞肺癌A549实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显。结论:T-7-RGD肽可抑制人非小细胞肺癌细胞A549生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用不明显。

RGD和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体的制备及体外抗卵巢癌的初步研究

目的制备精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(RGD)和泊洛沙姆F127共修饰载多西紫杉醇脂质体(DTX-F127-RGD-LP)并研究其对卵巢癌体外抗肿瘤效应。方法采用薄膜水化法制备DTX-F127-RGD-LP,通过电镜测定其形态,并进行粒径、电位、包封率、载药量等表征的测定及体外稳定性的考察;以香豆素6为荧光探针考察SKOV3细胞对修饰的脂质体的摄取情况,通过加入不同的内吞抑制剂研究修饰的脂质体的摄取机制;采用MTT法及结晶紫染色法考察修饰的脂质体对SKOV3细胞的毒性。结果DTX-F127-RGD-LP粒径为(107.2±0.67)nm,电位为-(19.7±0.4)mV,包封率为86.4%,载药量为2.7%,体外稳定性良好。RGD和泊洛沙姆F127修饰后显著增加SKOV3细胞对脂质体的摄取量,DTX-F127-RGD-LP的内吞主要通过小窝蛋白、巨胞饮以及整合素蛋白途径摄取进入细胞。与未修饰的脂质体相比,DTX-F127-RGD-LP对SKOV3细胞毒性最大,结晶紫染色法的结果与MTT结果一致,经计算DTX-F127-RGD-LP的IC50值为0.039μg·mL^(-1)。结论DTX-F127-RGD-LP能显著增强体外卵巢癌细胞的摄取,提高体外抗卵巢癌效应。

RGD肽与肿瘤治疗研究进展

天然RGD肽与其整合素受体介导的细胞与细胞及细胞外基质的粘附是细胞迁移和识别的重要基础和途径 ,与许多生物过程密切相关。目前关于RGD肽的研究已从抗血小板凝聚作用侧重到抑制肿瘤细胞粘附、抗癌细胞转移和抗肿瘤新血管生成等方面。研究证明 ,整合素家族中αυβ3与细胞粘附和新生血管形成的关系最为密切 ,而其配体RGD肽对肿瘤血管内皮细胞的粘附和迁移有明显的抑制作用 ;RGD肽还可诱导肿瘤细胞中caspase 3和caspase 7表达的增高 ,从而促进肿瘤细胞的凋亡。遗传修饰腺病毒连接上RGD肽 ,可提高对肿瘤细胞的选择性 ,使腺病毒有可能在临床上成为基因治疗的理想载体。RGD肽与肿瘤治疗之间关系的探索为人类彻底根治肿瘤带来了希望 ,是近年来肿瘤治疗研究领域的热点。

两种RGD肽修饰的新型阿霉素脂质体的体外表征(英文)

目的作为配体,肽对于多种受体显示出良好的靶向性,例如在肿瘤表面过度表达的整合素家族受体。本文主要研究和表征分别用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽和甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)五肽修饰的载药脂质体。方法分别采用RGD和GRGDS对包载阿霉素的立体稳定脂质体(SSL-doxorubicin)进行修饰,以制备RGD-SSL-doxorubicin和GRGDS-SSL-doxorubicin。在体外表征试验中,测定了各种脂质体的包封率、粒径、Zeta电位和释放率,采用SRB试验研究了各脂质体对卵巢癌细胞的细胞毒作用,并应用流式细胞仪和共聚焦显微镜考察了肿瘤细胞对各脂质体包封的阿霉素的摄取情况。结果所有脂质体的包封率均在95%以上,采用RGD或GRGDS进行的修饰并未影响长循环脂质体的包封率。各种脂质体的平均粒径在105.7±3.5nm和130.5±3.0nm之间,Zeta电位在–3.3±0.3和–6.1±0.3mV之间,在模仿体内环境的释放介质(含胎牛血清)中,12小时内约有2/5的阿霉素从脂质体中释放。与游离阿霉素相比,修饰后的脂质体对肿瘤细胞的抑制率略有下降;在研究对阿霉素摄取的流式细胞试验和共聚焦试验中,也有类似现象出现。将各种脂质体分别加入肿瘤细胞后,阿霉素主要分布于SKOV-3的细胞核。结论本研究成功制备了两种分别用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)三肽和甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(GRGDS)五肽修饰的阿霉素脂质体。体外表征结果显示,该修饰不会显著改变立体稳定脂质体的性质。

HPMA-RGD共轭与肿瘤靶向研究综述

整合素αvβ3在肿瘤内皮血管细胞表面特异性表达,是肿瘤靶向的一个重要位点。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)三肽序列对αvβ3有很强亲和力,RGD可以作为αvβ3的受体识别。HPMA具有良好的水溶性、生物相容性,与抗癌药物连接为水溶性高分子聚合物后,利用增强渗透和滞留效应,能改善抗癌药物的体内分布和药代动力学。然而单体RGD多肽有很多缺陷,需要进一步修饰。将HPMA-RGD共轭可用于靶向肿瘤血管再生,增加药物在肿瘤的浓度和累积量。核磁共振(MRI)是肿瘤诊断的重要手段,用放射性核素Gd等标记的RGD多肽,可用于肿瘤的无创性检查。

抗凝活性肽RGD226基因构建、表达、产物纯化及活性分析

通过PCR法 ,将来源于蛇毒蛋白质eristostatin中的一段含有RGD(Arg Gly Asp)序列的十三肽(SRVARGDWNDDYS)的基因 ,以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体(PJG4 0 1)基因为模板 ,置换其B2 8和A1位之间的连接肽基因 ,构建成了能展示RGD功能序列的人源化分子 (RGD2 2 6 )的基因 .通过该基因在大肠杆菌中的表达、产物分离纯化 ,得到高纯度RGD2 2 6 .该RGD肽对由ADP诱导的体外人血小板聚集的半抑制浓度IC50 为 2 2 3μmol L .其胰岛素免疫活性是PJG4 0 1的 15 1% ,提示其在一定程度上保留了胰岛素原的免疫原性 .其受体结合活性不到PJG4 0 1的 0 1% ,说明其胰岛素的生物活性基本丧失 .动物实验证实 ,RGD2 2

RGD-蜘蛛拖丝蛋白聚合物的生物合成与纯化

蜘蛛拖丝是自然界性能最好的蛋白质纤维之一 ,其独特的机械性能 ,良好的生物相容性和缓慢的可降解性 ,作为生物材料在组织工程领域有着潜在的应用前景。本文根据蜘蛛拖丝蛋白序列高度重复的特点 ,引入与细胞黏附有关的精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 (RGD)三肽 ,化学合成RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因单体 ,通过头尾相连倍加构建策略 ,首次得到RGD 蜘蛛拖丝蛋白基因 8聚体和 16聚体。分别将这两种多聚体与原核高效表达载体 pET 30a(+)连接 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) pLysS ,用IPTG诱导表达。SDS PAGE图谱显示表达产物分子量分别为 35KD和 6 0KD ,与理论值基本相吻合 ;蛋白质印迹分析这两种表达产物均显示特异性。文中对表达产物的纯化方法进行了初步的摸索。

RGD多肽修饰的改性PLGA仿生支架材料对骨髓间充质干细胞粘附、增殖及分化影响的研究

目的:探索RGD多肽修饰的改性PLGA支架材料上骨髓基质细胞的增殖、粘附及分化情况。方法用异型双功能交联剂Sulfo-LC-SPDP将GRGDSPC多肽共价结合到改性PLGA支架材料上,以未接多肽的改性PLGA材料做对照,取第三代MSC接种到材料上,培养1d、2d、3d、4d后比较材料上的细胞密度来反映细胞的增殖程度;取第三代MSC接种到材料上,培养4h、12h后沉淀法定量检测粘附的细胞数,培养24h后摄光镜图像比较粘附细胞的数量和形态,并用FITC连接的鬼笔环肽对细胞骨架染色,在荧光显微镜下观察细胞骨架的组织情况;取第三代MSC接种到材料上,用成骨性培养基培养7d、14d、21d,检测细胞中ALP活性来了解MSC分化情况。结果:培养1d、2d、3d、4d后细胞的增殖程度无显著性差异;培养4h、12h后实验组细胞粘附率均显著高于对照组,且24h后细胞的粘附质量、细胞骨架的组织情况也较对照组为好;培养14d后实验组细胞表达显著高的ALP活性。结论:RGD多肽修饰对细胞增殖无明显促进作用,但能提高改性PLGA支架材料对骨髓基质细胞的粘附性,对MSC向成骨细胞分化有显著促进作用。

RGD类似物修饰的阿霉素隐形脂质体的制备及体外细胞结合试验

目的研究用精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)类似物(RGDm)修饰隐形脂质体(SL),以增加抗癌药物在肿瘤部位积蓄的同时,增加抗癌药物向肿瘤细胞内的传递。方法合成RGDm,将其通过PEG链与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)连接形成导向化合物DSPE-PEG-RGDm,在此基础上制备RGDm修饰的隐形脂质体(RGDm-SL),阿霉素(DOX)作为模型药物通过硫酸铵梯度法装载。体外实验中,用pH探针(BCECF-AM)标记黑色素瘤细胞,通过细胞黏附试验考察导向化合物与肿瘤细胞的黏附情况;通过流式细胞实验和激光共聚焦显微实验考察肿瘤细胞对SL包封的阿霉素(SL-DOX)及RGDm-SL包封的阿霉素(RGDm-SL-DOX)的结合或摄取情况。结果与DSPE-PEG相比,黑色素瘤细胞与导向化合物DSPE-PEG-RGDm的黏附显著增加,过量游离RGDm的加入能抑制其黏附;与SL-DOX相比,RGDm-SL-DOX与黑色素瘤细胞共同孵育后,细胞对阿霉素的结合及摄取均显著增加。结论RGDm修饰的隐形脂质体可作为肿瘤靶向的载体通过受体介导的方式促进抗肿瘤药物向肿瘤细胞内的传递。

131^Ⅰ标记RGD环肽在荷瘤小鼠体内分布与显像研究

目的研究^(131)I标记含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的小分子环形肽(cRGD肽)在荷瘤小鼠体内的分布与显像,探讨^(131)I-cRGD肽作为肿瘤诊治药物的可能性。方法利用氯胺T法对cRGD肽行^(131)I标记,建立荷黑色素瘤B16动物模型,分别进行体内分布实验、非标记cRGD肽竞争抑制实验及肿瘤显像研究。结果用统计软件SPSS 12.0进行分析。结果^(131)I-cRGD肽的标记率达90%,放射化学纯度达99%;荷瘤小鼠体内分布实验显示:给药后在血液、肾脏、膀胱有较高的放射性分布,小肠、肝脏、肌肉呈低水平放射性分布,24 h肿瘤/肌肉(T/M)放射性比值=6.34,肿瘤/血液(T/B)放射性比值=1.1。显像结果示:静脉注射^(131)I-cRGD肽后1 h肿瘤开始显影,随时间的延长,影像逐渐清晰,24 h时肿瘤显像最清晰。用非标记cRGD肽进行阻断实验,肿瘤的放射性摄取为(0.969±0.151)%/g,与非阻断组(1.40±0.136)%/g比较具有显著性差异。结论应用氯胺T法可以成功完成^(131)I-cRGD肽标记;尾静脉注射^(131) I-cRGD肽后,肿瘤表现为放射性浓聚,肿瘤对^(131)I-cRGD肽的摄取可被非标记的cRGD肽抑制,表明^(131)I-cRGD肽可与肿瘤新生血管αvβ3受体特异性结合,有望成为一种新型的肿瘤诊治药物。

RGD多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性研究

目的 :研究RGD(精氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸 )多肽结合型长循环脂质体的肿瘤靶向性。方法 :将长循环脂质体 ,通过共价键反应与RGD基元多肽进行结合 ,然后研究其在荷瘤小白鼠体内的肿瘤靶向性。结果 :RGD结合型长循环脂质体在Colon26荷瘤小白鼠体内具有较好的肿瘤靶向性。结论

携RGDS超声造影剂的制备及体外靶向血栓研究

目的探讨制备携精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(Arg-G ly-Asp-Ser,RGDS)靶向脂膜超声造影剂的制备,并对靶向微泡的特性及靶向作用进行初步鉴定。方法分别采用酰胺键共价键合的方式和表面吸附法将脂膜超声造影剂与RGDS血栓靶向短肽片段进行结合;制备产物通过流式细胞仪进行携带率和稳定性的检测;对内源性凝血途径产生的血栓进行寻靶作用研究。结果流式细胞仪显示共价键合RGDS脂膜超声造影剂其微泡外壳波长发生了明显变化,显示改变率达到82%,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂改变率达到23%;激光共聚焦显微镜显示携带RGDS的脂膜超声造影剂在大量的PBS液清洗后,对离体血栓仍具有很强的靶向性和稳定性,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂在大量PBS液清洗后,失去了其靶向性。结论采用共价键合的化学修饰方法可以成功制备稳定性好的亲血栓靶向脂膜超声造影剂。

细胞粘附位点RGD三肽脂质体的制备及表征

对RGD(Arg-Gly-Asp)三肽脂质体载药剂型进行研究,确定了薄膜超声法制备脂质体的路线.电子显微镜观察表明,脂质体粒径均匀,为100nm左右,属于小单室脂质体.脂质体中RGD量为2.4～2.5mg/mL,包封率达到70%.脂质体稳定性较好,而且具备pH5.4～6.0的靶向性,可能成为具有较好肿瘤细胞靶向性的脂质体制剂.

RGD多肽类药物设计、活性测定及^(99)Tc^m-cRGD二聚体的制备

通过V-life计算机模拟软件建立cRGD(cyclic Arg-Gly-Asp,cRGD)多肽类分子库,利用V-life软件中的DOCK功能对分子库内cRGD肽结构进行筛选评分,挑选出能与整合素αν3β受体高特异性结合的cRGD结构。将该结构进行改造后制备成二聚体,用99Tcm对该结构进行标记,制备成肿瘤分子探针。并对其标记条件、稳定性、水溶性和亲和力进行评价。结果表明,DOCK功能计算出评分最佳的cRGD分子结构为Cys-Arg-Gly-Asp-(D)Ser-Cys。将该结构进行改造制备成二聚体后,室温下、ρ(SnCl2.2H2O)=1 g/L、反应时间为30 min时,标记率可达(87.42±3.21)%,经Sephadex G10层析柱纯化后,其放化纯大于95%;在室温和37℃条件下,99Tcm-cRGD于生理盐水和正常人新鲜血清中均保持良好的标记稳定性;其脂水分配系数对数值lgP(正辛醇/生理盐水)为-1.96±0.01;与U87人神经胶质瘤细胞进行受体的放射性配基结合分析(radioligand binding assay of receptors,RBA)实验,其平衡解离常数(equilibrium dissociation constant,Kd)为(0.089±0.052)×10-9L/mol。这表明,通过计算机模拟系统筛选出的cRGD肽可与整合素ανβ3特异性结合,是一种有前景的整合素ανβ3受体阳性肿瘤显像剂。

含RGD基元多肽结合型长循环脂质体抗癌转移效果的研究

目的 研究RGD结合型长循环脂质体对黑色素瘤在小鼠体内肺转移的抑制作用。方法 以RGD结合型长循环脂质体与黑色素瘤细胞混合或直接静脉间隔给药 ,按设计时间处死动物 ,然后检查肺转移癌灶数目。结果 RGD结合型长循环脂质体对小鼠黑色素瘤实验性肺转移与自发性肺转移具有显著的抑制作用 (P <0 .0 1)。结论 含RGD基元多肽结合型长循环脂质体可能对新生肿瘤具有抑制与治疗作用。

含有RGD序列多肽构效关系的研究

目的 探讨含RGD多肽的构效关系。方法 采用分子力学和量子化学方法对某些含RGD序列多肽的化学结构进行分子模拟和量化计算。结果 优化了各化合物的空间结构 ,得到了优势构象和优势构象的能量 ,研究了分子的电荷分布 ,前线轨道能量等。结论 借助于理论计算可解释含RGD(Arg -Gly -Asp)序列多肽的构效关系 ,确定了多肽与受体结合时的活性位点 ,对其活性差异给予较好的分析 ,可望为合成具有更高活性的含RGD序列多肽提供理论指导。