RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织中的表达及临床意义

目的分析G蛋白信号调节蛋白4(RGS4)在小儿肾母细胞瘤组织和癌旁组织中的表达差异,探讨RGS4与小儿肾母细胞瘤发生发展的关系。方法收集37例小儿肾母细胞瘤患者术后肾癌组织及8例癌旁组织,采用免疫组织化学法检测RGS4蛋白的表达水平;另收集患者手术切除新鲜癌组织及对应癌旁组织标本各8例,采用q RT-PCR和Western blot分别检测RGS4 m RNA和蛋白的表达水平。结果免疫组织化学染色结果显示,RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织及癌旁组织中均存在阳性表达,其在小儿肾母细胞瘤组织中的高表达率低于癌旁组织[37.83%(14/37)vs.87.5%(7/8),χ2=4.675,P<0.05];RGS4 m RNA在小儿肾母细胞瘤组织中的表达水平显著低于癌旁组织(1.064±0.549 vs.5.374±0.735,t=13.290,n=8,P<0.01);Western blot结果显示,RGS4蛋白在小儿肾母细胞瘤组织中的表达量低于癌旁组织(0.301±0.092 vs.0.779±0.041,t=13.424,n=8,P<0.01)。结论 RGS4在小儿肾母细胞瘤组织中表达下调,可能与小儿肾癌的发生发展有关。

大鼠RGS4基因的克隆及在原核中的表达

目的构建pGEX4T-1-RGS4载体,并检测融合蛋白GST-RSG4在原核中的表达水平。方法采用RT-PCR方法,将克隆SD大鼠G蛋白信号转导调节因子(regulator of G protein signaling4,RGS4)基因全长编码区的cDNA连接到原核表达载体pGEX4T-1中,IPTG诱导原核表达,通过Western blot检测融合蛋白GST-RSG4的表达水平。结果成功构建了pGEX4T-1-RGS4载体;经IPTG的诱导,RGS4可与GST以融合蛋白的形式高效表达。pGEX4T-1-RGS4在原核内表达产物相对分子质量约为50×103,与预期融合蛋白大小一致。结论构建的重组质粒能够在大肠杆菌中高效表达。

RGS4表达上调对人恶性黑素瘤细胞的M14增殖和迁移的影响

目的:明确体外RGS4基因表达上调对恶性黑素瘤M14细胞中增殖及迁移的影响。方法:体外培养M14细胞,分为对照组(转染pc DNA3.1空质粒)和实验组(转染pc DNA3.1-RGS4质粒)。RT-PCR和Western blot检测转染后RGS4 mRNA和RGS4蛋白水平的表达,CCK-8和克隆形成实验检测RGS4上调对恶性黑素瘤M14细胞增殖的影响,划痕实验检测RGS4高表达对M14细胞迁移的影响。结果:实验组细胞中RGS4 mRNA表达量是对照组的3.25×10~3倍(P<0.05),蛋白表达量是对照组的6.73倍(P<0.05)。实验组M14细胞OD值为1.33±0.07,低于对照组的1.61±0.11(P<0.05),实验组M14细胞克隆数为34±5.53,低于对照组的56±7.68(P<0.05)。实验组M14细胞迁移能力低于对照组。结论:RGS4高表达能够抑制体外恶性黑素瘤细胞的增殖和迁移,RGS4在恶性黑素瘤的发生、发展中可能发挥重要作用。

RGS4蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的 检测G 蛋白信号调节蛋白RGS4 在肝细胞肝癌组织中的表达,研究RGS4 在肝癌和癌旁肝组织中的表达差异,分析RGS4 与肝癌临床病理特征的关系.方法 收集75 例肝癌患者术后肝癌及癌旁正常肝组织,采用免疫组织化学染色、Western blot 方法检测RGS4 蛋白的表达水平,分析其与肝癌临床病理的关系.结果 免疫组织化学结果显示,RGS4 在癌旁肝组织中表达较高,在肝癌组织中下调表达,差异有统计学意义（P〈0.05）;Western blot 检测结果与免疫组化结果一致.经过分析发现RGS4 在肝癌组织中的低表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、TNM 分期及肝癌的侵袭转移无显著相关,但高分期肝癌组织中RGS4 的下调率更高.结论 RGS4 在肝癌组织中异常的低表达,可能与肝癌的发生发展相关,也可能是潜在的肝癌分子诊疗靶点.