粉背南蛇藤中新三萜化合物对RKO细胞体外抗癌作用的研究

目的：探讨粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对人结肠癌细胞系RKO细胞的体外增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对体外培养人结肠癌细胞系RKO细胞的增殖抑制作用，通过AO／EB双染色荧光显微镜、HE染色光学显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪分析齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对RKO细胞的诱导凋亡作用及对细胞周期的影响。结果：齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇对RKO细胞生长抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性，作用48h时IC50为（12．20±0．79）μg·mL^-1；AO／EB双染色、HE染色可见典型的肿瘤细胞凋亡改变；10μg·mL^-1的三萜处理RKO细胞48h即可出现明显的DNA梯带、流式细胞仪可检测到亚二倍体峰，在10-20μg·mL^-1内具有明显的量-效作用关系；并可见RKO细胞G0-G1期、G2-M期的细胞明显减少，而S期细胞无变化。结论：粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-3β，6α-二醇能抑制人结肠癌细胞系RKO细胞增殖和诱导凋亡。

结肠癌RKO细胞P物质和NK-1免疫细胞化学检测

目的探讨P物质及其受体神经激肽1(NK-1)在体外培养的结肠癌细胞系RKO中的表达及免疫细胞化学定位。方法将RKO细胞接种于提前放入盖玻片的6孔板进行细胞培养,细胞融合30%时将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色。结果在RKO细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达,P物质阳性表达多数位于细胞浆;而NK-1阳性表达多数位于细胞浆,少数位于细胞膜。结论神经内分泌机制可能参与了结肠癌的发病过程。

SAPCD2对人结肠癌RKO细胞增殖能力的影响

目的探讨SAPCD2在人结直肠癌组织中的表达情况及其对结肠癌RKO细胞增殖能力的影响。方法收集108例石蜡包埋的结直肠癌组织及匹配的正常黏膜组织标本,以及50例结直肠腺瘤组织标本,采用免疫组织化学的方法检测各组织中SAPCD2的表达情况。构建编码SAPCD2的shRNA慢病毒载体pLV-shRNA SAPCD2以及阴性对照载体pLV-shControl,分别转染人结肠癌细胞RKO,采用RT-PCR检测干扰效率。通过MTT实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,采用Celigo细胞计数实验检测细胞生长能力,采用PI-FACS实验检测细胞周期的分布情况。结果免疫组织化学染色结果显示,SAPCD2在结直肠癌组织中的表达明显增高,与正常黏膜组织及腺瘤组织中SAPCD2的表达差异具有显著性(Z=-7.377、-6.204,P<0.01);并与结直肠肿瘤浸润深度显著相关(χ~2=6.402,P<0.05)。转染pLV-shRNA SAPCD2后,RKO细胞增殖能力、克隆形成数量及细胞生长能力均明显受到抑制(t=4.856~244.000,P<0.05);PI-FACS检测细胞周期结果显示处于S期的细胞明显减少(t=22.378,P<0.05),处于G_1期的细胞明显增多(t=-26.368,P<0.05)。结论 SAPCD2在结直肠癌中的表达明显高于正常黏膜组织及腺瘤组织。SAPCD2经敲减后能通过抑制人结肠癌RKO细胞周期G_1/S期的转换,从而抑制细胞体外增殖生长及克隆能力。因此,通过降低SAPCD2基因的表达可以抑制结直肠癌细胞的增殖能力。

延龄草诱导人结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨延龄草诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制。方法:以人结肠癌RKO细胞株为模型,通过MTT实验检测延龄草不同提取部位对RKO细胞的细胞毒性;以流式细胞术及光比色法检测延龄草乙酸乙酯部位对RKO细胞线粒体膜电位及Caspase9和Caspase3活性的影响。结果:延龄草乙酸乙酯部位(EE-TM)对RKO细胞增殖抑制作用最显著(P<0.01),干预24、48及72 h后的IC50值依次为52.64、22.56及18.39μg/mL;EE-TM干预12 h后可以导致RKO细胞线粒体膜电位下降(P<0.01),干预24 h及48 h后可以导致RKO细胞内Caspase9及Caspase3的活性增强(P<0.01)。结论:延龄草具有体外抗结肠癌活性,作用机制可能是通过线粒体通路介导细胞走向凋亡。

EGCG铜离子络合物对结肠癌细胞内活性氧水平的影响(英文)

本文主要通过荧光探针结合流式细胞术，探讨了表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCC）铜离子络合物（ECC）对结肠癌细胞（RKO细胞）内活性氧水平的影响，并进一步从分子水平阐述了其影响机制。结果表明，5-10mg／L的ECC能够显著增强胞内活性氧水平，并且随着ECC水平的增加，细胞周期主要阻止于G2／M期。另外，胞内黄嘌呤氧化酶活性呈降低趋势，并且超氧化物岐化酶-1活性并没有随着其基因水平的增强而显著增强；但过氧化氢酶虽然基因水平有了较大的提升，其在胞内的生物活性却呈现出显著性剂量依赖性降低。因此，胞内活性的提升可能主要归因于胞内活性氧（过氧化氢）未能及时被活性降低的过氧化氢酶清除所致。

γ-干扰素加强TRAIL抑制人大肠癌细胞株作用的研究

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)抑制人大肠癌细胞株作用的影响。方法:以大肠癌细胞株RKO为对象,采用MTT比色法和流式细胞术研究IFN-γ对TRAIL抑制RKO的影响。结果:IFN-γ组、TRAIL组和IFN-γ72h+TRAIL组的存活分数分别为99·28%、85·45%、52·60%。IFN-γ组、TRAIL组、IFN-γ24h+TRAIL组、IFN-γ48h+TRAIL组和IFN-γ72h+TRAIL组的凋亡率分别为1·51%、2·38%、4·97%、13·30%、21·00%。IFN-γ24h+TRAIL组的凋亡率高于IFN-γ组与TRAIL组的凋亡率之和(P<0·01)。随着IFN-γ预处理时间的延长,TRAIL引起RKO的凋亡率也明显上升(P<0·01)。结论:IFN-γ能有效加强TRAIL对RKO细胞株的凋亡诱导作用。

CCK-8法与Alamar blue法对RKO细胞株增殖活力测试条件的对比分析

目的以RKO细胞株为增殖活力测试的研究对象，比较CCK-8法与Alamarblue法在检测中波长、孵育时间、细胞密度等方面的差异性。方法取体外培养对数生长期的RKO细胞株，分别比较两者在不同检测波长（380、430、480、530、580、630nm）、不同孵育时间（1、2、3、4、5、6h）、不同细胞密度（2×10^4、5×10^3、1．25×10^3CUF·mL^-1）下所测的光密度值（OD值），并比较两者在相同条件下同-标本重复检测时的平衡性。结果ALamarblue法在不同细胞密度中的最佳检测波长皆为580nm，而CCK-8法的最佳检测波长会随着细胞密度的变化而有所改变；1—6h时，CCK-8法适合的孵育时间在1h以后，Alamarblue为2h以后，且CCK-8法的灵敏度、平衡性都强于Alamarblue法。结论CCK-8法在细胞增殖活力检测中的灵敏性、平衡性、快捷性等都略强于ALamarblue法。