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Mechanism of exogenous nucleic acids and their precursors improving the repair of intestinal epithelium after 7-irradiation in mice 被引量:8
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作者 Da Xiang Cui~1 Guei Ying Zeng~2 Feng Wang~1 Jun Rong Xu~1 Dong Qing Ren~2 Yan Hai Guo~1 Fu Rong Tian~2 Xiao Jun Yan~1 Yu Hou~1 Cheng Zhi Su~1 1 Institute of Genetic Diagnosis of the Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China 2 Department of Irradiation Medicine of the Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第5期709-717,共9页
AIM To clone expressed genes associated withrepair of irradiation-damaged mice intestinalgland cells treated by small intestinal RNA,andto explore the molecular mechanism ofexogenous nucleic acids improving repair ofi... AIM To clone expressed genes associated withrepair of irradiation-damaged mice intestinalgland cells treated by small intestinal RNA,andto explore the molecular mechanism ofexogenous nucleic acids improving repair ofintestinal crypt.METHODS The animal mode of test group andcontrol group was established,forty-five micebeing irradiated by γ ray were treated with smallintestinal RNA as test group,forty mice beingirradiated by γ ray were treated withphysiological saline as control group,five micewithout irradiation were used as normal control,their jejunal specimens were collectedrespectively at 6h,12h,24h,4d and 8d afterirradiation.Then by using LD-PCR based onsubtractive hybridization,these gene fragmentsdifferentially expressed between test group andcontrol group were obtained,and then werecloned into T vectors as well as beingsequenced.Obtained sequences were screenedagainst.GeneBank,if being new sequences,they were submitted to GeneBank.RESULTS Ninety clones were associated withrepair of irradiation-damaged intestinal glandcells treated by intestinal RNA.These clonesfrom test group of 6h,12h,24h,4d and 8dwere respectively 18,22,25,13,12.By screening against GeneBank,18 of which werenew sequences,the others were dramaticallysimilar to the known sequences,mainly similarto hsp,Nmi,Dutt1,alkaline phosphatase,homeobox,anti-CEA ScFv antibody,arginine/serine kinase and BMP-4,repA.Eighteen genefragments were new sequences,their acceptnumbers in GeneBank were respectivelyAF240164-AF240181.CONCLUSION Ninety clones were obtained tobe associated with repair of irradiation-damagedmice intestinal gland cells treated by smallintestinal RNA,which may be related toabnormal expression of genes and matchedproteins of hsp,Nmi,Duttl,Na,K-ATPase,alkalineph-osphatase,glkA,single strandedreplicative centromeric gene as well as 18 newsequences. 展开更多
关键词 radiation ionizing INTESTINE small/injuries rna gene expression nucleic acids/therapeutic use POLYMERASE chain reaction REPAIR intestinal EPITHELIUM MICE
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环状RNA的成环策略及环状RNA疫苗的研究现状
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作者 高子寒 魏科 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1950-1956,共7页
环状RNA相比于线性mRNA具有合成简单、稳定性高、持续稳定表达等优点,在感染性微生物疫苗、肿瘤疫苗和蛋白替代疗法等领域具有巨大的应用潜力,近年来已经成为核酸药物领域研究的热点。RNA的环化技术是体外合成环状RNA的关键,成环策略对... 环状RNA相比于线性mRNA具有合成简单、稳定性高、持续稳定表达等优点,在感染性微生物疫苗、肿瘤疫苗和蛋白替代疗法等领域具有巨大的应用潜力,近年来已经成为核酸药物领域研究的热点。RNA的环化技术是体外合成环状RNA的关键,成环策略对环化效率、免疫原性和蛋白表达量等产生重要影响,制约了环状RNA的基础研究和临床应用。本文系统综述了化学法、酶法和核酶法等几种成环策略,重点分析各成环技术的反应条件、成环工艺、环化效率和免疫原性等。目前,理想的环状RNA成环策略还面临诸多挑战,但是研究证实环状RNA在新型冠状病毒肺炎疫苗、抗肿瘤疫苗等领域比线性mRNA具有更好的稳定性和更强的免疫效应,成为一种极具潜力的新型核酸药物分子,为优化和拓展环状RNA的研究和临床应用提供参考。 展开更多
关键词 环状rna 核酸药物 rna疫苗 新型冠状病毒肺炎(2019冠状病毒病)
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NucliSens miniMag与QIAamp系统检测血清丙型肝炎病毒RNA效能比较
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作者 李靓 段丽祥 孙晓红 《实用肝脏病杂志》 CAS 2024年第6期848-851,共4页
目的比较研究NucliSens miniMag与QIAamp系统检测血清丙型肝炎病毒(HCV)RNA的效能。方法2021年6月~2023年6月我院收集的103例抗-HCV阳性血清标本,分别采用NucliSens miniMag系统(方法A)和QIAamp Viral RNA Mini Kit(方法B)提取HCV RNA,... 目的比较研究NucliSens miniMag与QIAamp系统检测血清丙型肝炎病毒(HCV)RNA的效能。方法2021年6月~2023年6月我院收集的103例抗-HCV阳性血清标本,分别采用NucliSens miniMag系统(方法A)和QIAamp Viral RNA Mini Kit(方法B)提取HCV RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清HCV RNA载量。取高载量和低载量两份标本,分批重复检测,计算两种方法批内变异系数(CV)。取HCV RNA强阳性质控标本,梯度稀释后检测,评估两种方法检测的敏感度。结果在103例血清抗-HCV阳性血清标本中,经方法A和方法B提取核酸,检测血清HCV RNA阳性率分别为86.4%和82.5%,差异无统计学意义(P>0.05);方法A提取核酸检测的血清HCV RNA载量为(5.4±1.2)lg IU/mL,方法B检测结果为(5.0±1.6)lg IU/mL,差异有统计学意义(t=2.078,P=0.039);方法A提取核酸检测血清HCV RNA载量低值和高值的CV分别为2.4%和2.2%,方法B检测为4.7%和4.5%,方法A提取核酸检测HCV RNA的重复性优于方法B;方法A提取检测血清HCV RNA最低载量为2.8×10^(-6)lg IU/mL,低于方法B检测的3.5×10^(-6)lg IU/mL,表明更灵敏。结论与QIAamp Viral RNA Mini Kit相比,NucliSens miniMag系统检测血清HCV RNA的效能更高。 展开更多
关键词 慢性丙型肝炎 丙型肝炎病毒rna 核酸提取 NucliSens miniMag系统 检测
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植物RNA作为载体RNA在病毒核酸提取过程中的保护效果研究
4
作者 江嘉琦 李江峰 +3 位作者 彭运平 胡霏 何小维 王羽 《检验医学与临床》 CAS 2024年第13期1875-1879,1884,共6页
目的探究植物RNA作为载体RNA在病毒核酸提取过程中对目标核酸的保护效果。方法分别提取绿萝、水稻、竹子3种常见植物中的RNA作为载体RNA,同时以商业试剂Takara载体RNA为对照,提取甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞... 目的探究植物RNA作为载体RNA在病毒核酸提取过程中对目标核酸的保护效果。方法分别提取绿萝、水稻、竹子3种常见植物中的RNA作为载体RNA,同时以商业试剂Takara载体RNA为对照,提取甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSV A)核酸,并利用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)定量分析提取得到的病毒核酸浓度,以评估植物RNA在核酸提取中对病毒核酸的保护效果。结果经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取植物RNA的28S rRNA、18S rRNA条带清晰明亮,无弥散现象,所得RNA具有良好的完整性。且经验证,植物RNA对病毒核酸扩增无干扰。裂解液中分别加入0、1000、3000、5000、7000、9000 ng绿萝RNA进行Flu A RNA提取时,提取物经RT-qPCR扩增后的Ct值分别为35.06±0.14、33.01±0.42、32.45±0.33、31.95±0.34、31.74±0.28、31.92±0.24,使用Takara载体RNA提取核酸的Ct值为31.96±0.34。Ct值随着绿萝RNA添加量增加而降低,当添加量≥5000 ng时,Ct值接近使用Takara载体RNA的提取组,继续提高绿萝RNA用量,Ct值趋于稳定,且与使用TaKaRa载体RNA的Ct值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。添加5000 ng绿萝RNA与添加0 ng绿萝RNA相比,Ct值相差3.11,根据浓度差等于2ΔCt计算可知添加5000 ng绿萝RNA提取得到的Flu A核酸浓度比不添加载体RNA高了8.63倍。进一步研究发现,添加绿萝RNA、水稻RNA、竹子RNA及Takara载体RNA,提取得到的Flu A、Flu B和RSV A核酸经RT-qPCR扩增后得到的Ct值与不添加载体RNA比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。绿萝RNA作为载体RNA在提取Flu A、Flu B、RSV A混合病毒核酸时,对比无载体RNA的对照组,分别降低了2.61、2.90、1.45个Ct值,即添加了绿萝RNA后提取Flu A、FluB、RSV A所得的核酸浓度分别提高了6.11、7.46、2.73倍。且添加了水稻RNA和竹子RNA提取混合病毒核酸所得的核酸浓度也分别至少提高了2.63倍和2.60倍。结论在病毒核酸提取过程中植物RNA具有保护病毒核酸的作用,可以提高提取得到的目的病毒RNA浓度,可用作病毒核酸提取时的载体RNA,为核酸提取中的载体RNA选择提供更多来源。 展开更多
关键词 植物rna 载体rna 病毒检测 病毒rna提取 核酸保护
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金属离子对二甲亚砜依赖的RNA切割型脱氧核酶催化活性的影响
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作者 崔力 李素慧 +2 位作者 郑星 常天俊 邴涛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期35-42,共8页
在高浓度有机溶剂中工作的RNA切割型脱氧核酶(RNA-cleaving DNAzyme,RCD)及其构筑的分子器件不仅拓展了DNA作为酶的能力,还可将功能核酸推进新的应用领域.本文研究了一个需要二甲亚砜才能工作的RCD(命名为E3)对金属离子的需求,发现二价... 在高浓度有机溶剂中工作的RNA切割型脱氧核酶(RNA-cleaving DNAzyme,RCD)及其构筑的分子器件不仅拓展了DNA作为酶的能力,还可将功能核酸推进新的应用领域.本文研究了一个需要二甲亚砜才能工作的RCD(命名为E3)对金属离子的需求,发现二价金属离子对其催化活性至关重要,活性顺序为Zn^(2+),Mg^(2+)>Fe^(2+)>Pb^(2+)>Mn^(2+)>Co^(2+).以Mg^(2+)或Zn^(2+)为辅因子,表征了E3的速率-pH值关系及其与二者的结合比例.E3的催化速率-pH曲线在Mg^(2+)存在下为“钟形”,高速率的pH值范围为7.0~9.0;Zn^(2+)存在下为“尖峰”,速率最高时pH=7.0;E3与Mg^(2+)和Zn^(2+)的数量结合比例均为1∶1.另外,E3以Fe^(2+)为辅因子时易失活,Fe^(2+)被氧化成Fe^(3+)是失活的关键,加入还原剂可使其复活.进一步研究发现,Cu^(2+),Fe^(3+)和Ni^(2+)等金属离子可抑制Mg^(2+)或Zn^(2+)的作用,使E3的催化活性急剧降低.本文研究结果为理解E3的性质及催化机制提供了有用信息. 展开更多
关键词 rna切割型脱氧核酶 功能核酸 有机溶剂 金属离子
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RNA切割型脱氧核酶在生物医学领域中的研究进展
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作者 郑洪 成雨纯 陈楠 《上海师范大学学报(自然科学版中英文)》 2024年第1期129-136,共8页
RNA切割型脱氧核酶(RCD)是一类具有催化活性的单链DNA分子,具有灵活的可编程性、优异的稳定性、强底物特异性和高催化活性等优点,因而在生物医学领域展现出了良好的应用前景.基于RCD对于特定辅助因子的依赖和对于靶标RNA的特异性识别和... RNA切割型脱氧核酶(RCD)是一类具有催化活性的单链DNA分子,具有灵活的可编程性、优异的稳定性、强底物特异性和高催化活性等优点,因而在生物医学领域展现出了良好的应用前景.基于RCD对于特定辅助因子的依赖和对于靶标RNA的特异性识别和切割,其被广泛应用于一系列生物分子靶标的检测以及多种临床疾病的基因治疗.文章介绍了RCD的物理化学特性,并对其在生物医学领域的研究现状进行了总结,聚焦于RCD在生物传感和癌症治疗等方面的应用进展.此外,还对该领域面临的挑战及未来的发展方向进行了讨论. 展开更多
关键词 rna切割型脱氧核酶(RCD) 核酸纳米复合物 生物传感 癌症治疗
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EGF受体和转化生长因子α mRNA在人大肠癌组织的表达意义 被引量:16
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作者 王青 吴金生 +2 位作者 高德明 赖大年 马庆久 《世界华人消化杂志》 CAS 1999年第7期590-592,共3页
目的研究表皮生长因子受体(EGFR)及转化生长因子α(TGFα)在人大肠癌三组不同组织中的表达,探讨其在大肠癌发生发展中的作用.方法分别取14例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁2cm及10cm之全层肠管,采用Norther... 目的研究表皮生长因子受体(EGFR)及转化生长因子α(TGFα)在人大肠癌三组不同组织中的表达,探讨其在大肠癌发生发展中的作用.方法分别取14例大肠癌患者癌瘤组织、癌旁2cm及10cm之全层肠管,采用Northernblot方法分别检测EGFR和TGFαmRNA表达.结果大肠癌三组14例不同组织中均有EGFR和TGFαmRNA不同程度表达,以癌旁组织中表达为最强,同一病例比较,癌远侧组织中表达呈减弱趋势.癌远侧组织中,3例A,B两期杂交信号明显弱于其他例C,D期信号.结论EGFR,TGFα在大肠癌发生发展中起重要作用,其mRNA表达与Dukes分期相关,可望作为大肠癌恶性程度的指标.其在癌远侧组织中表达减弱的趋势提示是否可作为肿瘤手术切缘的评估指标,尚有待进一步的研究. 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 表皮生长因子 受体 转化生长因子
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联合检测登革病毒NS1抗原和RNA核酸在登革热早期快速诊断中的应用价值 被引量:6
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作者 方伟祯 蔡振华 +2 位作者 李健 李竞 李红玉 《中国当代医药》 2016年第26期140-142,共3页
目的探讨联合检测登革病毒NS1抗原和RNA核酸在登革热早期快速诊断中的应用价值。方法 366例登革热临床疑似病例血清样品采集自2014年6~11月广东Ⅰ型登革病毒流行期间本院门诊和住院的患者,同时使用ELISA法检测登革病毒NS1抗原和PCR-荧... 目的探讨联合检测登革病毒NS1抗原和RNA核酸在登革热早期快速诊断中的应用价值。方法 366例登革热临床疑似病例血清样品采集自2014年6~11月广东Ⅰ型登革病毒流行期间本院门诊和住院的患者,同时使用ELISA法检测登革病毒NS1抗原和PCR-荧光探针法检测登革病毒RNA核酸,然后对检测结果进行比较。结果登革热NS1抗原检测阳性率为94.8%,登革热RNA核酸检测阳性率是95.9%,联合检测的阳性率为97.3%,联合检测的阳性率高于其余两者的阳性率。结论登革病毒NS1抗原和RNA核酸可用于登革热的早期快速诊断,联合检测具有更高的阳性检出率。 展开更多
关键词 登革热 NS1抗原 rna核酸 联合检测
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DNA-RNA杂交法检测新城疫病毒的研究 被引量:6
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作者 贺东生 宋长绪 +1 位作者 刘福安 徐立群 《中国动物检疫》 CAS 1997年第5期10-11,共2页
用光敏生物素标记鸡新城疫cDNA,制备核酸探针,经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后,探针同该cDNA的PCR产物、PCR产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应,与IBV、ILT、MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,田间病料... 用光敏生物素标记鸡新城疫cDNA,制备核酸探针,经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后,探针同该cDNA的PCR产物、PCR产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应,与IBV、ILT、MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,田间病料和杂交试验也表明该cDNA探针是敏感且特异的检测方法。 展开更多
关键词 新城疫病毒 DNA-rna杂交 检测
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血液混样HCV/HIV-1 RNA全自动提取方法的应用评价 被引量:2
10
作者 叶贤林 王良华 +2 位作者 周一炎 尚桂芳 杨立新 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第7期724-725,共2页
目的:建立献血者全自动核酸检测方法,探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查的可行性。方法:选用STAR2000加样仪进行血样汇集(24人份),在COBASAMPLICOR进行扩增和检测分析结果,从灵敏度及抗干扰能力方面进行评价。结果:用国际标准核... 目的:建立献血者全自动核酸检测方法,探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查的可行性。方法:选用STAR2000加样仪进行血样汇集(24人份),在COBASAMPLICOR进行扩增和检测分析结果,从灵敏度及抗干扰能力方面进行评价。结果:用国际标准核酸质控品考评及常规应用,表明全自动汇集、全自动核酸提取及扩增和检测95%的检出限量HCVRNA和HIV-1RNA分别为17·4IU/ml和20·6cp/ml,20mg/ml胆红素、1g/dl血色素及中等程度的脂血对结果无影响。通过对16512个样本共688汇集池分析,HCVRNA阳性1例(ELISA亦阳性),HIV-1RNA未检出阳性。结论:血液混样MPLC全自动核酸提取方法可应用于血液HCVRNA和HIV-1RNA的筛查工作。 展开更多
关键词 HCV rna HIV-1 rna 全自动核酸提取 评价
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三种核酸提取方法检测丙肝HCV-RNA定量的比较 被引量:3
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作者 韩若冰 辛毅娟 +3 位作者 文静 张荣 张金花 杨柳 《山西医科大学学报》 CAS 2016年第3期215-217,共3页
目的比较及评价3种不同核酸提取方法检测HCV-RNA结果的差异。方法依照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件规定,收集40个新鲜血清标本,分别使用磁珠法、柱提法、手工法丙肝试剂以及Roche试剂进行平行检测,记录测定结果,计算线性... 目的比较及评价3种不同核酸提取方法检测HCV-RNA结果的差异。方法依照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件规定,收集40个新鲜血清标本,分别使用磁珠法、柱提法、手工法丙肝试剂以及Roche试剂进行平行检测,记录测定结果,计算线性方程及相关系数,并对其进行偏倚评估。结果磁珠法和柱提法试剂与Roche试剂方法间的相关性良好(r>0.975),而手工法与Roche试剂方法检测结果间差异超出预设允许误差范围。结论各方法学的试剂与Roche试剂检测结果大致相关性尚可,其中磁珠法结果较好。 展开更多
关键词 丙肝病毒 磁珠法 核酸提取
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丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT-PCR方法的比较 被引量:4
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作者 杨永平 丛勉尔 +2 位作者 夏宁邵 曹经瑗 刘崇柏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期257-262,共6页
采用HCV基因组结构区C区cDNA探针和非结构区NS3-4区cDNA探针,建立了用打点杂交(dotblothybridization)检测血清中HCVRNA的方法,同采用HCV基因组5’端非编码区的一对寡核苷酸引物通... 采用HCV基因组结构区C区cDNA探针和非结构区NS3-4区cDNA探针,建立了用打点杂交(dotblothybridization)检测血清中HCVRNA的方法,同采用HCV基因组5’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血清中HCVRNA的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中HCVRNA,但RT-PCR法敏感性优于RNA打点杂交法。对于无血清学指标的慢性NANB肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及RNA提取方法。RT-PCR法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究HCVRNA量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的HCVRNA阳性样本。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 打点杂交 检测 rna
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一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法 被引量:6
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作者 柴娟 冯仁军 +3 位作者 史后蕊 任梦云 王静毅 张银东 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期104-109,共6页
在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3... 在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA。该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法。 展开更多
关键词 香蕉叶片 总核酸 rna 总DNA 快速提取
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HCV抗体血清学检测联合HCV-RNA检测的应用价值:附2例病例分析 被引量:8
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作者 马淑青 宋宇 +7 位作者 毕艳妮 姚继承 邵淑丽 耿建利 王晓伟 鞠毅 黄忠义 王明义 《实用检验医师杂志》 2019年第2期122-124,共3页
丙型肝炎(丙肝)为常见传染病,丙肝病毒(HCV)抗体血清学检测是HCV感染筛查的主要方式,常用的方法为化学发光法。但感染HCV后,抗体的血清学转换可延迟至数月后。HCV-RNA检测可直接检测病毒复制量,感染HCV后1~2周即可在血清中检测到病毒,是... 丙型肝炎(丙肝)为常见传染病,丙肝病毒(HCV)抗体血清学检测是HCV感染筛查的主要方式,常用的方法为化学发光法。但感染HCV后,抗体的血清学转换可延迟至数月后。HCV-RNA检测可直接检测病毒复制量,感染HCV后1~2周即可在血清中检测到病毒,是HCV感染的实验室诊断方法之一。但HCV-RNA检测操作繁琐、成本较高,常规实验室不作为筛选使用。威海市立医院收治2例疑诊病毒性肝炎患者,经核酸检测确诊后即给予相应治疗,患者肝功能好转。说明在实验室常规开展HCV-RNA检测提高了HCV感染检出的准确性。 展开更多
关键词 丙型肝炎 丙型肝炎病毒 抗体血清学检测 核酸检测
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猪流感病毒核酸检测装甲RNA质控样品的研制 被引量:4
15
作者 乔彩霞 高志强 +5 位作者 蒲静 汪琳 刘环 张利峰 张鹤晓 刘金华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期371-375,共5页
为研制一种可以应用于猪流感病毒(SIV)核酸检测的质控品,本研究选取MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)作为RNA病毒核酸检测质控样品,将MS2噬菌体成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点及SIV M基因克隆于表达载体pET-32a中,经原核表达后,... 为研制一种可以应用于猪流感病毒(SIV)核酸检测的质控品,本研究选取MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)作为RNA病毒核酸检测质控样品,将MS2噬菌体成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点及SIV M基因克隆于表达载体pET-32a中,经原核表达后,利用Cellufine sulfate层析柱纯化,RT-PCR和实时荧光RT-PCR鉴定表明制备的装甲RNA(AR-SIVM)病毒样颗粒中包装有SIV M基因。稳定性研究显示,AR-SIVM可以耐受RNase的降解,并且在-20℃和4℃至少可以保存3个月。试验结果表明,AR-SIVM作为SIV核酸检测质控样品,能够实现对检测全过程(核酸提取、反转录和PCR)的质量控制。 展开更多
关键词 猪流感病毒 核酸检测 装甲rna 质控样品
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固相吸附核酸提取法及其在丙型肝炎病毒RNA提取中的应用 被引量:1
16
作者 张宝华 王开宇 《现代检验医学杂志》 CAS 2012年第5期146-149,共4页
丙型肝炎病毒(HCV)是引起肝硬化、肝癌等肝脏疾病的重要病原微生物。目前检测临床标本的HCVRNA含量是判断HCV感染的“金标准”。但在RNA提取过程中,广泛存在的RNA酶对HCVRNA的有效提取影响较大。固相吸附法提取临床标本中的核酸成分... 丙型肝炎病毒(HCV)是引起肝硬化、肝癌等肝脏疾病的重要病原微生物。目前检测临床标本的HCVRNA含量是判断HCV感染的“金标准”。但在RNA提取过程中,广泛存在的RNA酶对HCVRNA的有效提取影响较大。固相吸附法提取临床标本中的核酸成分操作简便,核酸产量高、质量好,采用对人体无毒害作用的材料,目前该方法已在临床HCVRNA检测中广泛应用。本文将对固相吸附核酸提取法的原理及其在HCVRNA提取中的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 固相吸附 丙型肝炎病毒 rna 核酸提取
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靶向RNA的CRISPR-Cas13系统及其研究进展 被引量:3
17
作者 陈静 赵燕波 +1 位作者 赵兰 欧阳松应 《福建师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第2期10-17,共8页
CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteins)系统是细菌和古菌抵御外源核酸物质入侵的适应性免疫系统,发挥作用时经过3个阶段:适应阶段、表达阶段和干扰阶段.其中,靶向DNA的CRISPR-Cas... CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteins)系统是细菌和古菌抵御外源核酸物质入侵的适应性免疫系统,发挥作用时经过3个阶段:适应阶段、表达阶段和干扰阶段.其中,靶向DNA的CRISPR-Cas9研究较为深入,在基因组编辑领域具有广泛应用.而靶向RNA的CRISPR-Cas技术仍处于初步研究阶段.CRISPR-Cas13系统(Cas13a-d)的发现为RNA编辑等领域提供了新思路.Cas13家族蛋白是RNA介导的具有RNase活性的效应蛋白,结构上有保守的HEPN结构域(higher eukaryotes and prokaryotes nucleotide-binding domain),能自我加工precursor crRNA和切割靶RNA.从Cas13家族蛋白的发现与基本功能、结构基础,以及在病毒核酸检测、RNA编辑、疾病治疗等方面的应用进行综述,旨在为CRISPR-Cas13系统的合理改造和应用奠定基础. 展开更多
关键词 CRISPR-Cas13系统 type VI-A/B/D 核酸检测 rna编辑
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不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA的干扰验证分析 被引量:6
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作者 陈少彬 何子毅 +2 位作者 陈庆恺 刘泽民 王庆 《中国输血杂志》 CAS 2019年第10期992-996,共5页
目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)技术在献血者血液标本中不同浓度HBV DNA和(或)HIV-1 RNA对低浓度HCV RNA检测结果的影响。方法采用阴性血浆对HCV RNA标准物质、已定量的HBV DNA和HIV-1 RNA血浆进行稀释,配制成2种病毒或3种病毒的混合... 目的探讨多重聚合酶链式反应(PCR)技术在献血者血液标本中不同浓度HBV DNA和(或)HIV-1 RNA对低浓度HCV RNA检测结果的影响。方法采用阴性血浆对HCV RNA标准物质、已定量的HBV DNA和HIV-1 RNA血浆进行稀释,配制成2种病毒或3种病毒的混合液,HCV RNA浓度稳定在20.4 IU/mL[该PCR检测系统95%平均检测下限(LoD)的3倍],HBV DNA浓度为20 IU/mL、200 IU/mL、2000 IU/mL和(或)HIV-1 RNA浓度为50 copies/mL、500 copies/mL、5000 copies/mL的混合液,同时设置对照组(只有3×LoD的HCV RNA溶液),模拟献血者血液样本,分别在Roche Cobas s201核酸检测系统进行单检模式和混样模式(与5个阴性标本混合)至少检测20次,统计分析不同浓度病毒核酸检测Ct值差异以及单检模式与混检模式的漏检率。结果不同浓度HIV-1 RNA和(或)HBV DNA在单检模式下对HCV RNA检测的Ct值差异无统计学意义(P>0.05);HCV RNA在单检模式下的Ct值中位数36.60(36.20,37.10)明显低于混检模式的Ct值39.30(38.60,40.00)(P<0.05),10个分组中HCV RNA在单检模式的漏检率均为0%,而在混检模式的平均漏检率为12.62%,差异有统计学意义(P<0.05);此外,浓度20 IU/mL的HBV DNA进行单检的漏检率为7.55%,进行混检的漏检率为81.4%;50 copies/mL的HIV-1 RNA和20.4 IU/mL的HCV RNA在单检时漏检率为0%,而混检漏检率分别为28.57%和12.62%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度HBV DNA和HIV-1 RNA对多重PCR检测HCV RNA结果无影响,但弱阳性HCV RNA、HBV DNA和HIV-1 RNA标本在单检模式下的漏检率低于混检模式,为提高血液安全,血液核酸检测应尽可能采用单检模式。 展开更多
关键词 多重PCR 核酸检测 HCV rna HBV DNA HIV-1 rna
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应用全自动核酸检测系统MPLC-COBAS筛查献血员HIV-1 RNA 被引量:3
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作者 尚桂芳 杨立新 +2 位作者 王良华 周一炎 叶贤林 《中国艾滋病性病》 CAS 2005年第1期16-18,共3页
目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度... 目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度(95%CI)HIV1RNA病毒为45~67IU/ml,5124份标本混样检测结果为阴性,81份HIV抗体(抗HIV)酶联免疫吸附试验(ELISA)假阳性混样检测结果及6份追踪样本核酸检测结果均为阴性。结论该系统具有全自动检测、灵敏度高、特异性好的特点,可进一步扩大临床标本检测量,探索出切实有效的核酸检测系统进行献血员筛查HIV1RNA。 展开更多
关键词 全自动核酸检测 血液筛查 艾滋病病毒1型核糖核酸
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DNA和RNA的结构基因组学研究的应用前景 被引量:3
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作者 姜怀春 李宏 《重庆工商大学学报(自然科学版)》 2003年第1期23-26,共4页
人类基因组计划的实施产生了大量的基因数据,如何利用这些数据是后基因时代生物学研究的主要内容。结构基因组学就是利用这些数据和计算机模拟技术建立模型来为人类服务。介绍了DNA和RNA的结构基因组学的主要研究内容和进展,讨论了结构... 人类基因组计划的实施产生了大量的基因数据,如何利用这些数据是后基因时代生物学研究的主要内容。结构基因组学就是利用这些数据和计算机模拟技术建立模型来为人类服务。介绍了DNA和RNA的结构基因组学的主要研究内容和进展,讨论了结构基因组学的商业应用前景。 展开更多
关键词 rna DNA 结构基因组学 蛋白质 核酸 蛋白质家族 结构生物学方法 基因序列
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