银屑病mRNA原位杂交技术的研究

通过对38例银屑病(Psoriasis)皮肤组织中HB-EGF的表达,比较了核酸原位杂交过程中包括组织固定、脱水、浸蜡、包埋及切片过程中,外源性RNase控制与原位杂交结果之间的关系。结果表明,外源性RNase控制组的阳性信号高于非控制组,其原位杂交结果反映了基因表达的水平。提示在石蜡切片核酸原位杂交实验中,切片制备及保存过程中防止外源性RNA酶污染,是提高结果可信度的关键。

鱼腥蓝细菌PCC 7120中可控降解系统的构建

鱼腥蓝细菌PCC 7120中已有较为成熟的诱导表达系统,但缺乏可控的蛋白降解系统。本研究基于Mesoplasma florum中的Lon蛋白酶(mf-Lon),在蓝细菌中建立可诱导的蛋白降解系统,并通过该系统对关键基因编码产物进行可控降解以研究其生理功能。结果发现降解系统并无预期作用,需进一步改进。

含内质控多重荧光RT-PCR同时检测麻疹病毒和风疹病毒的研究

由于从临床症状上难以区分麻疹病毒或风疹病毒引起的人群急性发热出疹性传染病,故而分别设计针对麻疹病毒和风疹病毒的特异性引物和荧光标记探针,建立含内质控的多重荧光RT-PCR以同时检测麻疹病毒和风疹病毒的核酸。结果表明:建立的多重荧光RT-PCR方法特异性好,试验验证没有出现假阳性和假阴性现象;该方法的灵敏度高,对麻疹病毒和风疹病毒的最低检出限分别达到0.1TCID50/mL和1TCID50/mL,可从疑似患者咽拭子等标本中直接检测到病毒核酸;同时该方法具有良好的稳定性,当分别用0.1～103TCID50/mL麻疹和风疹病毒的样本进行重复试验时,其CT值变异系数均在0.9%以下。此外,以人核糖核酸酶P(RNaseP)作为内质控,可以有效监控临床标本的采样质量及因操作失误等所致的假阴性结果出现。本方法尤其适用于疑似麻疹或风疹暴发疫情的临床快速诊断。