膜联蛋白5刺激大鼠Leydig细胞增殖过程中RhoA、RockⅠ的表达

目的研究RhoA、RockⅠ促进大鼠Leydig细胞增殖的机制,探讨膜联蛋白5调控Leydig细胞增殖的新途径。方法用1 nmol/L膜联蛋白5处理原代培养大鼠Leydig细胞12、24、48 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,western blot检测RhoA和RockⅠ的蛋白质表达情况。结果 MTT法结果显示,1 nmol/L膜联蛋白5呈显著的时间依赖的促进Leydig细胞增殖作用,且24 h组细胞增殖能力与对照组差异最为显著(0.251±0.019 vs 0.207±0.009,t=4.380,P<0.01);流式细胞分析发现,1 nmol/L膜联蛋白5作用于Leydig细胞,以作用24 h时对细胞周期的影响最为显著,可使G2+M期比例比对照组升高(12.24±0.84 vs 7.79±1.15,t=5.407),G0/G1期比例下降(67.61±0.37 vs 74.49±0.73,t=-14.64),P均<0.01;western bolt结果表明,膜联蛋白5作用12、24、48 h后Leydig细胞RhoA表达结果分别为1.39±0.29、2.21±0.38、1.46±0.19,与0 h组结果 0.89±0.41比较,均有升高(t=2.028,P<0.05;t=4.736,P<0.01;t=2.550,P<0.05);膜联蛋白5作用24、48 h后Leydig细胞RockⅠ表达结果分别为1.14±0.18、1.03±0.17,与0 h组结果 0.72±0.22比较均升高(t=2.944,P<0.01;t=2.246,P<0.05)。结论 RhoA、RockⅠ可能参与膜联蛋白5促进细胞周期G0/G1进程,最终促进Leydig细胞的增殖。

RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的过度激活对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的探讨RhoC/ROCK-Ⅰ的过度激活对卵巢癌细胞生物学特性的影响。方法RT-PCR及Western blot检测RhoC及ROCK-Ⅰ在卵巢癌细胞SW626、Skov-3、A2780和Caov-3中mRNA及蛋白的表达水平;将携带ROCK-Ⅰ组成性激活突变体p160ROCK-ⅠΔ3的质粒(pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3)以脂质体介导,转染上述4株人卵巢癌细胞,划痕试验和Boyden小室检测转染前后4种卵巢癌细胞的体外迁移与侵袭能力的变化,MTT比色法测定p160ROCK-ⅠΔ3对细胞增殖能力的影响。结果RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关(r=0.95,P<0.01),转染pCAG-myc-p160ROCK-ⅠΔ3后,4株细胞的侵袭能力与对照组比较分别提高31.1%、33.0%、24.5%和39.4%;迁移能力分别提高33.9%、33.0%、25.0%和40.2%。各株细胞的增殖能力未显示出明显的变化。结论RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路的活性与卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移能力相关,ROCK-Ⅰ活性的提高可显著增强卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭和迁移能力。

三甲散对HSC-T6细胞α-SMA、TIMP-1和ROCK-Ⅰ蛋白表达的影响

[目的]检测三甲散含药血清对肝星状细胞株(HSC-T6)细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶抑制-1(TIMP-1)和蛋白激酶(ROCK-Ⅰ)的表达,从而研究三甲散对HSC-T6细胞增殖作用的影响。[方法]以三甲散含药血清干预HSC-T6细胞,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术,检测三甲散含药血清对HSC-T6细胞中α-SMA、TIMP-1和ROCK-Ⅰ的蛋白表达。[结果]三甲散和Y-27632显著地降低了HSC-T6细胞α-SMA、ROCK-Ⅰ和TIMP-1 m RNA和蛋白的表达。[结论]三甲散可降低HSC-T6细胞ROCK-Ⅰ蛋白、TIMP-1和α-SMA的表达,从而抑制HSC-T6细胞的增殖。

ROCK-I蛋白表达或活性的改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响

目的:探讨ROCK-I蛋白表达或活性改变对人卵巢癌细胞运动表型的影响。方法:将ROCK-I的反义寡核苷酸(ASODN)或其显性激活突变体p160Δ3用脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系CAOV-3细胞,用RT-PCR与W estern blot印迹法检测转染前后ROCK-I和p160Δ3 mRNA和蛋白的表达;rhodam ine-phalloid in染色显示ROCK-I ASODN和p160Δ3对细胞骨架的影响;Transwell小室和划痕实验观察ROCK-I表达降低及其活性提高后卵巢癌细胞系CAOV-3运动能力的改变。结果:转染ROCK-I ASODN后,CAOV-3细胞内ROCK-I蛋白的表达明显减少,最大抑制率可达49%;转染的p160Δ3在细胞内获得有效表达。转染ROCK-I ASODN后CAOV-3细胞伪足消失,肌动蛋白纤维减少且变得无序,而转染p160Δ3后细胞伪足增多变长,肌动蛋白纤维亦明显增多,且沿细胞长轴分布。伤口愈合实验显示,ROCK-I ASODN明显抑制了CAOV-3细胞的迁移,p160Δ3则显著增强了其迁移能力;转染10μmol/L或20μmol/L ROCK-I ASODN后细胞的随机运动能力分别为其对照组的(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%,定向运动能力分别为其对照组的(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%;转染p160Δ3后,与对照组相比细胞的随机运动能力提高(38.7±1.2)%,定向运动能力提高(40.2±2.6)%。结论:ROCK-I蛋白表达或活性改变与人卵巢癌细胞CAOV-3的运动能力密切相关,ROCK-I可能成为治疗卵巢癌肿瘤细胞转移的新靶点。

芦丁对STZ诱发大鼠糖尿病心肌病ROCKI蛋白的影响

目的探讨罗布麻提取物芦丁对链脲佐菌素(STZ)诱发的大鼠糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)ROCK I蛋白的影响。方法用STZ诱发糖尿病心肌病模型,24只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、DCM组(STZ)、阳性药组(STZ+卡托普利)及芦丁治疗组(STZ+罗布麻提取物芦丁),每组6只。治疗组大鼠给予芦丁灌胃,DCM组和正常对照组大鼠给予0.9%氯化钠注射液灌胃。治疗后行大鼠形态学观测、测定胶原蛋白及ROCK I蛋白表达。结果注射STZ后,大鼠胶原蛋白及ROCK I蛋白的表达较正常对照组增加(P<0.05),罗布麻提取物芦丁灌胃后,其表达相对于模型组降低;HE染色结果显示,给予芦丁后心肌损伤程度减轻。结论罗布麻提取物芦丁可减轻心肌损伤,其机制可能与降低ROCKI蛋白表达有关。

页岩Ⅰ型断裂韧性的分形计算方法与应用

水平井分段体积压裂是页岩气商业规模开发的重要工艺措施,如何评价页岩储层可压性是该工艺成功的关键。页岩断裂韧性是可压性评价的重要支撑参数,从I型断裂裂纹(裂缝)微观形态入手,结合断裂力学理论和分形理论,建立了页岩I型断裂韧性分形计算方法;借助晶体劈裂功法计算页岩表面能,采用密度、声波时差2种参数获取计算结果,对比分析新的分形方法计算数据、传统方法预测数据与试验测试数据,新的分形方法计算平均误差为3.63%,传统预测方法平均误差为?10.53%,验证了方法的准确性;参考实例水平井测井解释数据,计算了水平段I型断裂韧性指数的全井筒连续性剖面,结合可压性级别与较大储层改造体积概率关系,优选可压性级别为III级及II级改造。建立的页岩I型断裂韧性分形计算方法对定量评价页岩储层可压性具有重要意义。

岩石Ⅰ型断裂韧度测试方法研究进展

岩石断裂韧度测试方法研究是准确获取岩石断裂韧度值的重要前提,也是进行岩石断裂力学理论和应用探索的重要途径.本文综述了国内外岩石Ⅰ型断裂韧度测试方法,着重介绍了美国材料与测试协会(ASTM)和国际岩石力学协会(ISRM)提出的建议测试方法及其研究进展;对比了不同测试方法获得的岩石Ⅰ型断裂韧度值之间的差异,并分析了产生这种差异的原因;指出了岩石断裂韧度测试方法中有待于进一步研究的问题.

数字图像相关法测定岩石Ⅰ-Ⅱ复合型裂纹应力强度因子

提出了一种通过数字图像相关方法测定岩石Ⅰ-Ⅱ复合型裂纹尖端位置和应力强度因子的试验方法。试验通过数字图像相关方法测定裂纹尖端区域位移场数据,将位移场数据带入极坐标系下位移场方程,计算裂纹尖端位置和应力强度因子。试验结果表明:采用该方法可以准确的测定岩石Ⅰ-Ⅱ复合型裂纹应力强度因子、裂纹尖端位置及裂纹扩展长度,解决了以往研究方法因不能准确测定裂纹尖端位置和扩展方向,而无法准确测定岩石应力强度因子的难题。

公路隧道全断面开挖法在Ⅰ类围岩地质条件下的应用

介绍了应用全断方法开挖Ⅰ类围岩地质条件下大断面公路隧道并获得极大成功的施工方法，着重介绍了其关键工艺、施工过程、工艺程序、施工要点及注意事项，为恶劣地质条件下大断面公路隧道的开挖积累了经验。

岩石Ⅰ型裂纹定向扩展规律试验研究

为精准获得岩石Ⅰ型裂纹扩展演化全过程,采用一种简易裂纹定向扩展装置开展了不同岩性试样裂纹扩展试验研究,借助声发射及数字散斑技术对裂纹扩展全过程进行了监测,建立了裂纹定向扩展力学模型,分析了裂纹扩展过程中声发射及变形场的演化规律,提出了评价岩石Ⅰ型裂纹扩展难易程度的能量指标C_(E),探讨了Ⅰ型裂纹定向起裂扩展机制。结果表明:该简易裂纹定向扩展装置能够有效实现Ⅰ型裂纹沿预定方向稳定扩展,其起裂角均小于10°,同时通过简化力学模型计算得到白砂岩、灰砂岩的裂纹扩展峰值强度与巴西劈裂抗拉强度相比偏差分别为22.76%、7.53%;根据变形场演化规律,可将裂纹扩展分为微裂隙发育(散斑变形场分区不明显)、主控裂纹孕育(散斑变形场出现分区现象)和主控裂纹扩展3个阶段;声发射演化过程可分为平静期、缓增期、急增期和降低期4个阶段,由于灰砂岩相较于白砂岩质地更致密、更坚硬,导致其声发射平静期长,而后3个阶段持续时间短;将载荷-位移曲线峰前与峰后的面积之比定义为评价岩石Ⅰ型裂纹扩展难易程度的能量指标C_(E),计算得到灰砂岩、白砂岩的C_(E)分别为13~16、1~2,表明C_(E)可有效评价岩石Ⅰ型裂纹扩展难易程度;岩石Ⅰ型裂纹起裂扩展机制可概况为:在加载峰值前裂隙尖端受最大拉应力作用,存储的弹性能快速增加、耗散能缓慢增加,但在加载峰值后裂隙尖端存储弹性能超过其储能极限迅速释放,此时输入能大部分转化为耗散能促进主控裂纹快速扩展。后续将对裂纹定向扩展试验装置进一步优化改进,以期为裂纹扩展机制、岩石破坏前兆信息、裂纹止裂原理等研究提供一种新方法,同时为工程现场煤岩层定向爆破、压裂、止裂等相关技术优化提供理论指导。

考虑T应力的Ⅰ/Ⅱ型裂纹最大切向应变能密度断裂准则及其验证

为准确预测Ⅰ/Ⅱ复合型加载条件下岩石类脆性材料的断裂行为,首先,在传统最大切向应变能密度断裂准则的基础上,考虑裂纹尖端应力场Williams展开式中的非奇异应力项(T应力),建立了考虑T应力的Ⅰ/Ⅱ型裂纹广义最大切向应变能密度断裂准则;其次,探究T应力及泊松比对初始裂纹起始扩展角及起始扩展条件的影响;最后,基于5种岩石材料的中心直裂纹巴西圆盘复合断裂试验结果对该准则的有效性进行验证。研究结果表明:随T应力增大,裂纹起始扩展角逐渐增大,而KII/KIc逐渐减小;随泊松比增大,裂纹起始扩展角及K_(Ⅱ)/K_(Ic)同时减小;纯Ⅱ型断裂时,T应力及泊松比对K_(Ⅱ)/K_(Ic)的影响最显著;考虑T应力的最大切向应变能密度断裂准则所得结果与室内试验结果相吻合,验证了该准则的有效性。

金川铜镍硫化物矿床Ⅰ、Ⅱ矿区矿体地质对比研究

文章从宏观和微观两个方面对金川铜镍硫化物矿床Ⅰ、Ⅱ矿区矿体地质进行了对比,认为两矿区在矿体地质特征方面存在明显差异,反映出含矿岩体有可能为来自同源,但不是同一通道的产物,从而对探讨整个金川矿田含矿超基性岩体的形成与空间展布规律及未来找矿工作具有重要指导意义。

不同水灰比和粗糙度的岩石-混凝土界面Ⅰ型断裂性能研究

岩石-混凝土界面是混凝土大坝中常见的结构层面,由于其两侧材料不同的特性,在受外部荷载情况下,其微裂纹极易沿界面发生扩展甚至形成贯穿裂缝,威胁大坝安全。研究界面断裂性能的影响因素具有重要的理论意义和工程价值。利用液压伺服试验机,通过对岩石-混凝土复合试件进行三点弯曲断裂试验,研究配合比和界面粗糙度对岩石-混凝土界面断裂性能的影响。试验结果表明:①水灰比极易影响岩石-混凝土界面的断裂性能,在50%~60%这一范围内,当水灰比增大时,界面的断裂性能会依次减小,在实际工程中需要更为合理地选用水灰比方案。②通过对岩石刻槽处理,从而增加界面的粗糙度可以达到增强界面断裂性能的目的,而在刻槽深度为12 mm这一范围内,增加刻槽深度也能够增强界面的断裂性能。

积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子及RhoA/ROCK-Ⅰ调控信号的影响

目的研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)的影响及RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路在其中的作用。方法分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用积雪草苷300μg.mL-1及RhoA的下游效应器Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对实验细胞进行干扰实验。分为对照组、积雪草苷组、Y-27632组、积雪草苷+Y-27632组。运用荧光定量PCR(SYBR Green)及免疫荧光细胞化学的方法检测各组瘢痕成纤维细胞中RhA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA与蛋白表达。结果积雪草苷300μg.mL-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05);Y-27632能阻碍积雪草苷的作用,积雪草苷(300μg.mL-1)+Y-27632组,CTGF的mRNA与蛋白表达明显高于单纯积雪草苷组(P<0.05),与对照组及Y-27632组比较无显著性差异(P>0.05);Y-27632组与对照组比较RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达没有统计学意义。结论积雪草苷300μg.mL-1能抑制RhoA、ROCKⅠ-、CTGF的mRNA与蛋白表达;而且可通过RhoA/ROCKⅠ-信号通路抑制瘢痕成纤维细胞中CTGF mRNA与蛋白表达。这可能是积雪草苷治疗瘢痕的作用机制之一。

ROCKⅠ/Ⅱ基因下调对血管平滑肌细胞迁移及增殖的影响

目的:探讨ROCK亚型ROCKⅠ和ROCKⅡ对血管平滑肌细胞(A7r5)迁移及增殖的影响。方法:利用Western blot技术检测ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白在A7r5细胞中的表达水平;利用siRNA技术使ROCKⅠ和ROCKⅡ基因表达分别下调,并检测基因下调后蛋白表达水平;利用Boyden小室法,观察ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后及ROCK特异抑制剂Y-27632对PDGF诱导的A7r5细胞迁移的影响;使用MTT法检测ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后对A7r5细胞生长曲线的影响。结果:ROCKⅠ和ROCKⅡ在A7r5细胞中的蛋白表达水平不同,ROCKⅡ较ROCKⅠ的表达水平高4倍;通过对A7r5细胞进行ROCKⅠ和ROCKⅡsiRNA转染,使二者蛋白表达水平分别下调83.4%和94.7%;基因表达下调后,ROCKⅠ明显抑制了PDGF诱导的A7r5细胞的迁移,而ROCKⅡ无明显影响,Y-27632也抑制了A7r5细胞的迁移;ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后对A7r5细胞生长曲线的影响无明显差别。结论:ROCKⅠ在血管平滑肌细胞迁移过程中起主导作用,ROCKⅠ和ROCKⅡ对血管平滑肌细胞的增殖作用无明显差异。

RhoC/ROCK-Ⅰ信号通路封闭对卵巢癌细胞生物学行为影响的研究

目的:探讨RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路的封闭对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响。方法:RT-PCR及蛋白质印迹法检测RhoC及ROCK-Ⅰ在不同卵巢癌细胞系中mR-NA及蛋白的表达水平;将ROCK-Ⅰ反义寡核苷酸(ASODN)转染人卵巢癌细胞系SW626与Caov-3细胞后,检测转染前后ROCK-Ⅰ蛋白的表达,Boyden小室观察各株细胞转染前后侵袭及运动能力的变化,MTT比色法测定转染前后黏附能力的变化。结果:RhoC和ROCK-Ⅰ在4种卵巢癌细胞中呈不同程度表达,其中RhoC的表达水平与癌细胞侵袭力和迁移能力呈正相关,r=0.95,P<0.01,转染ROCK-ⅠASODN后,细胞内ROCK-Ⅰ的表达明显减少;细胞的侵袭能力受到明显的抑制,10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的(75.6±3.8)%和(54.7±2.9)%,Caov-3为(68.8±4.7)%和(50.0±4.5)%;转染两种浓度ASODN的SW626与Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的(80.0±1.3)%、(63.7±1.9)%、(72.0±1.3)%和(55.9±2.5)%;定向运动能力分别为对照组的(83.9±1.4)%、(64.1±1.3)%、(72.5±3.4)%和(54.5±1.9)%。结论:RhoC/ROCK-Ⅰ信号转导通路与人卵巢癌细胞的体外侵袭与迁移密切相关,阻断ROCK-Ⅰ的表达可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的体外侵袭能力。

双波长吸光光度法测定磷矿中氧化镁

以EGTA Ba和SO2 - 4为联合掩蔽体系 ,有效地消除因大量钙存在而产生的干扰。在pH10 .2硼砂缓冲溶液中 ,镁与偶氮氯膦Ⅰ形成稳定络合物 ,用自制的双波长分光光度仪 ,在组合波长5 70nm和 5 0 0nm下 ,用于磷矿中镁的测定 ,不需分离 ,方法简单、快速 。

西部三大水电工程地下厂房研究比较

系统地对比了锦屏一级、两河口、溪洛渡三大水电站地下厂房的主要地质特征、设计参数和围岩支护强度,采用三维有限元方法,计算分析其围岩变形特征以及破坏区分布特征,总结整理了3个工程的计算结果并与其他水电工程地下厂房进行了横向对比分析。为类似跨度30 m级洞室群稳定性评价和工程施工设计提供了参考依据。

甘蒙北山地区小红山一带变质侵入岩体的时代厘定及其地质意义

在塔里木板块北缘甘蒙北山地区小红山一带赋存一套变质侵入岩体,测定锆石U-Pb年龄值2 656±146 M a,时代厘定为新太古代晚期-早元古代早期,岩浆成因类型属Ⅰ型,物质来源于下地幔和地壳经局部熔融而成,是吕梁期前造山基底发育阶段的产物。该套变质侵入岩体的时代厘定,对于塔里木板块结晶基底的深入研究及甘蒙北山早期构造岩浆演化具有重要意义。

被断裂破坏后盖层封闭能力的评价方法

根据断裂对盖层破坏程度与盖层原始封闭能力的关系，在利用盖层被断裂破坏后与破坏前所受压力的比值求取断裂对盖层封闭能力的破坏程度基础上，建立了一套被断裂破坏后盖层封闭能力评价方法。将该方法应用于海拉尔盆地乌尔逊凹陷被断裂破坏的大一段泥岩盖层封闭能力评价的结果表明，大一段泥岩盖层Wu80断裂北部、Wu39号断裂西南部、Wu16号断裂南部和巴彦塔拉断裂中北部无封闭能力，其余均具有好的封闭能力。大一段泥岩盖层较强的封闭能力有利于南二段油气聚集与保存，这是乌尔逊凹陷南二段油气相对富集的重要原因。实践证明了该方法在定量评价被断裂破坏后的盖层封闭能力的可行性。