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ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1/CTGF通路的影响 被引量:1
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作者 任杰 安海燕 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第26期3932-3936,共5页
Y-27632为嘧啶衍生物,是一种近年来合成的特异性Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,R O C K)抑制剂,能通过调控R O C K介导的多种生物效应从而抑制肝纤维化的形成.研究发现,转化生长因子β1(t... Y-27632为嘧啶衍生物,是一种近年来合成的特异性Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,R O C K)抑制剂,能通过调控R O C K介导的多种生物效应从而抑制肝纤维化的形成.研究发现,转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)/结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)通路参与肝纤维化的形成,TGF-β1诱导其下游效应分子CTGF表达,促使细胞外基质生成增多,导致肝纤维化.Y-27632具有抑制TGF-β1和CTGF表达的作用,本文从ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1/CTGF通路的影响来阐述Y-27632的抗纤维化作用,借此更深入的了解Y-27632的作用靶点,为肝纤维化的靶向治疗提供理论依据. 展开更多
关键词 rock抑制剂 y-27632 肝纤维化 转化生长因子Β1 结缔组织生长因子
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ROCK选择性抑制剂Y-27632提高小鼠胚胎干细胞传代效率研究
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作者 张鹏 赵虎 +1 位作者 吴兴龙 李相运 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期94-98,共5页
以小鼠胚胎干细胞(ES细胞)为研究对象,探讨ROCK选择性抑制剂Y-27632在细胞传代过程中的作用,并对ES细胞相关生物学特性进行检测。结果表明:Y-27632能够引起ES细胞形态发生改变,通过Y-27632的添加能够使质地紧密的ES细胞集落变得松散、... 以小鼠胚胎干细胞(ES细胞)为研究对象,探讨ROCK选择性抑制剂Y-27632在细胞传代过程中的作用,并对ES细胞相关生物学特性进行检测。结果表明:Y-27632能够引起ES细胞形态发生改变,通过Y-27632的添加能够使质地紧密的ES细胞集落变得松散、扁平。将Y-27632应用于ES细胞传代,能够显著提高传代效率。并且,在Y-27632长期存在的条件下,ES细胞依旧维持稳定的染色体数目,较强的碱性磷酸酶活性,在体内能够分化形成畸胎瘤,在体外能够分化形成心肌细胞。说明Y-27632的使用能够显著提高小鼠ES细胞的传代效率;紧密的细胞连接不是维持ES细胞多能性的必要条件。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 rock抑制剂 y-27632
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ROCK抑制剂Y-27632对Hep-2细胞中RhoC及ROCK表达的影响 被引量:1
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作者 贺雪 刘良发 郭维维 《医学研究杂志》 2013年第5期78-81,共4页
目的探讨ROCK抑制剂Y-27632对喉癌细胞系Hep-2中RhoC及ROCK表达的影响。方法在体外培养的喉癌细胞系Hep-2的培养液中加入ROCK抑制剂Y-27632后,用免疫荧光法,RT-PCR及Western blot检测喉癌细胞Hep-2细胞系RhoC及ROCK-1,ROCK-2的mRNA及蛋... 目的探讨ROCK抑制剂Y-27632对喉癌细胞系Hep-2中RhoC及ROCK表达的影响。方法在体外培养的喉癌细胞系Hep-2的培养液中加入ROCK抑制剂Y-27632后,用免疫荧光法,RT-PCR及Western blot检测喉癌细胞Hep-2细胞系RhoC及ROCK-1,ROCK-2的mRNA及蛋白的表达水平。结果经过Y-27632处理后,Hep-2中RhoC及ROCK-1和ROCK-2在细胞的mRNA及蛋白的表达下降。结论 Y-27632可抑制ROCK-1、ROCK-2及RhoC的表达。 展开更多
关键词 RHOC rock y-27632 HEP-2细胞
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Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量:1
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作者 张磊 龚跃昆 +1 位作者 赵学凌 周厚俊 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1108-1111,1127,共5页
目的探讨Rho A/ROCK通路特异性阻断剂Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法自小鼠股骨、胫骨骨髓腔分离培养小鼠骨髓单个核细胞,流式细胞仪细胞表面标记检测及细胞成骨... 目的探讨Rho A/ROCK通路特异性阻断剂Y-27632对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法自小鼠股骨、胫骨骨髓腔分离培养小鼠骨髓单个核细胞,流式细胞仪细胞表面标记检测及细胞成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定小鼠骨髓单个核细胞。将第3代小鼠骨髓间充质干细胞随机分为2组,单纯成骨诱导液对照组、Y-27632干预组。分别于细胞培养后1d、2d、3d、4d收集细胞,噻唑蓝(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法观察BMSCs增殖能力;成骨诱导后7 d、14 d收集细胞,可见光比色法检测碱性磷酸酶(ALP)变化;成骨诱导后24h收集细胞,western blot法检测Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil-containing protein kinases1,ROCK1)的表达。结果流式细胞术细胞表面标志检测及成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定均证实我们所获细胞为BMSCs。与对照组相比,Y-27632能促进BMSCs增殖,差异具有统计学意义(P<0.05);Y-27632能降低ALP表达,差异具有统计学意义(P<0.05);Y-27632能明显阻断ROCK1的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Y-27632阻断Rho A/ROCK信号通路可以促进BMSCs增殖,抑制BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 RHO A/rock y-27632 成骨分化
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Y-27632抑制胃癌SGC-7901细胞系侵袭与转移
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作者 赵敏 周颖 +4 位作者 黄江梅 肖芳 李晓超 张辉 刘瑞吉 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第10期1369-1374,共6页
目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,... 目的探讨Y-27632对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,及其作用机制是否是通过对SRF的调控来实现的。方法将细胞分为3组:1)对照组;2)Y-27632通路阻断剂组;3)siRNA-SRF-1107干扰组。各组分别转染、加药,孵育48 h。用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭能力和迁移能力。Western blot法检测SRF、ROCK1、E-cadherin、β-catenin、F-actin、MRTF-A及Cyclin D1的表达。结果 Y-27632能显著抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭、迁移能力(P<0.05),而对其增殖没有影响。Y-27632能显著下调SGC-7901细胞的ROCK1、SRF、F-actin和MRTF-A的表达,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 Y-27632通过上调E-cadherin表达,同时阻断ROCK信号抑制SRF辅因子MRTF-A的表达,最终下调SRF转录水平,从而抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移和迁移能力。 展开更多
关键词 胃癌 血清应答因子(SRF) y-27632(rock通路阻断剂) 胃癌SGC-7901细胞系 RNA干扰
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The Rho-associated kinase inhibitors Y27632 and fasudil promote microglial migration in the spinal cord via the ERK signaling pathway 被引量:6
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作者 Pei-Cai Fu Rong-Hua Tang +3 位作者 Zhi-Yuan Yu Min-Jie Xie Wei Wang Xiang Luo 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期677-683,共7页
Rho-associated kinase(ROCK) is a key regulatory protein involved in inflammatory secretion in microglia in the central nervous system.Our previous studies showed that ROCK inhibition enhances phagocytic activity in ... Rho-associated kinase(ROCK) is a key regulatory protein involved in inflammatory secretion in microglia in the central nervous system.Our previous studies showed that ROCK inhibition enhances phagocytic activity in microglia through the extracellular signal-regulated kinase(ERK) signaling pathway,but its effect on microglial migration was unknown.Therefore,in this study,we investigated the effects of the ROCK inhibitors Y27632 and fasudil on the migratory activity of primary cultured microglia isolated from the spinal cord,and we examined the underlying mechanisms.The microglia were treated with Y27632,fasudil and/or the ERK inhibitor U0126.Cellular morphology was observed by immunofluorescence.Transwell chambers were used to assess cell migration.ERK levels were measured by incell western blot assay.Y27632 and fasudil increased microglial migration,and the microglia were irregularly shaped and had many small processes.These inhibitors also upregulated the levels of phosphorylated ERK protein.The ERK inhibitor U0126 suppressed these effects of Y27632 and fasudil.These findings suggest that the ROCK inhibitors Y27632 and fasudil promote microglial migration in the spinal cord through the ERK signaling pathway. 展开更多
关键词 nerve regeneration spinal cord injury microglia rock y27632 FASUDIL MIGRATION morphology ERK U0126 in-cell western blot assay Transwell chambers neural regeneration
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法舒地尔对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后突触损伤的影响 被引量:1
7
作者 张伟 张海飞 +7 位作者 马杰 赵静 柴智 刘建春 宋丽娟 姜维佳 肖保国 马存根 《神经损伤与功能重建》 2017年第2期99-102,共4页
目的:探讨法舒地尔(Fasudil)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧糖剥夺(OGD)后突触损伤的影响。方法:培养SH-SY5Y细胞,分为空白对照组、OGD组、OGD+法舒地尔组,各3皿。相差光学显微镜下观察细胞突触损伤及修复的细胞形态;Western-Blot检测... 目的:探讨法舒地尔(Fasudil)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)氧糖剥夺(OGD)后突触损伤的影响。方法:培养SH-SY5Y细胞,分为空白对照组、OGD组、OGD+法舒地尔组,各3皿。相差光学显微镜下观察细胞突触损伤及修复的细胞形态;Western-Blot检测ROCKⅡ、磷酸化肌球蛋白磷酸酶(p-MYPT1)、突触后致密物-95(PSD-95)、突触素(Synaptophysin)等蛋白的表达情况。结果:形态学显示法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤。OGD组ROCKⅡ及p-MYPT1的表达明显高于空白对照组(P<0.05),突触素及PSD-95的表达明显低于空白对照组(P<0.01)。OGD+法舒地尔组ROCKⅡ及p-MYPT1表达水平低于OGD组(P<0.05),而与对照组差异无统计学意义(P>0.05);突触素和PSD-95表达水平高于OGD组(P<0.01);PSD-95表达水平高于空白对照组(P<0.05),突触素的表达与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05),结论:法舒地尔可有效修复OGD诱导的神经突触损伤,增加PSD-95、突触素的表达,抑制ROCKⅡ及p-MYPT1的表达。 展开更多
关键词 法舒地尔 SH-Sy5y细胞 氧糖剥夺 rock 磷酸化肌球蛋白磷酸酶 突触后致密物-95 突触素
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ROCK抑制剂对Hep-2细胞生长、侵袭和迁移的作用 被引量:5
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作者 贺雪 刘良发 《医学研究杂志》 2013年第2期45-48,共4页
目的用ROCK特异性抑制剂Y-27632处理Hep-2细胞系后,探讨ROCK信号转导通路对细胞的生长、侵袭和迁移的影响。方法商品化细胞系Hep-2经Rho激酶ROCK抑制剂Y-27632处理后,分别在光镜下观察细胞形态学变化,通过迁移实验和Transwell matrigel... 目的用ROCK特异性抑制剂Y-27632处理Hep-2细胞系后,探讨ROCK信号转导通路对细胞的生长、侵袭和迁移的影响。方法商品化细胞系Hep-2经Rho激酶ROCK抑制剂Y-27632处理后,分别在光镜下观察细胞形态学变化,通过迁移实验和Transwell matrigel侵袭实验及MTT实验,观察细胞运动、迁移增殖能力的变化。结果经Y-27632处理后,Hep-2细胞的形态明显变化,细胞的侵袭能力明显下降,运动能力下降。结论 ROCK信号转导通路参与Hep-2细胞体外运动、侵袭、迁移的调节。ROCK特异性抑制剂Y-27632可降低Hep-2细胞的侵袭能力,干扰ROCK有望作为喉癌靶向治疗的新靶点,为喉癌的靶向治疗或新基因治疗带来希望。 展开更多
关键词 癌细胞 肿瘤转移 rock y-27632
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Involvement of Rho-associated coiled-coil kinase signaling inhibition in TGF-β1/Smad2,3 signal transduction in vitro 被引量:4
9
作者 Zhao-Hui Feng Xiao-Hui Zhang +1 位作者 Jia-Qi Zhao Jun-Ze Ma 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2017年第12期1805-1811,共7页
AIM:To research the effect of Y-27632,a selective Rhoassociated coiled-coil kinase(ROCK) inhibitor,on TGF-β1/Smad2,3 signal transduction in ocular Tenon's capsule fi broblasts(OTFs).METHODS:Primary ocular Teno... AIM:To research the effect of Y-27632,a selective Rhoassociated coiled-coil kinase(ROCK) inhibitor,on TGF-β1/Smad2,3 signal transduction in ocular Tenon's capsule fi broblasts(OTFs).METHODS:Primary ocular Tenon's capsule fibroblasts had been cultured in vitro.The effect of Y27632 on proliferation of OTF stimulated by lysophosphatidic acid(LPA) was evaluated by MTT colorimetric assay so as to sift out the proper concentrations range of Y-27632 for the next experiment.Real time-polymerase chain reactor(RT-PCR) was to analyze the changes of Smad2 and Smad3 genes of cells affected by Y-27632,though unaffected by transforming growth factorbeta1(TGF-β1).Proteins of Smad2,Smad3,phosphorylated Smad2(Ser245/250/255),and phosphorylated Smad3(Ser423/425/203) were respectively quantifi ed by Western blot after OTFs were successively incubated by TGF-β1 and Y-27632.Meanwhile,α-smooth muscular actin(α-SMA) protein was also quantified after the small intervening gene fragments of human Smad2 and Smad3 were designed,synthesized,and then transfected to OTFs.RESULTS:Y-27632 signifi cantly inhibited OTFs proliferation stimulated by LPA.Also Y-27632 signifi cantly suppressed the expressions of Smad2 m RNA,Smad2,3 proteins expressions,Smad3 phosphorylation at the carboxylic terminals of Ser423/425/203 which had been radically promoted by TGF-β1.Si RNA-Smad2,3 suppressed α-SMA expressions,but less effectively than Y-27632.CONCLUSION:The inhibition of ROCK signaling may be a potential therapeutic candidate for the treatment of the fi ltration channel fi brosis. 展开更多
关键词 rock y-27632 transforming growth factor-betal Smad human ocular Tenon's capsule fibroblasts
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Rho激酶抑制剂Y27632对急性视网膜缺血-再灌注损伤大鼠凋亡相关基因表达的影响
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作者 殷丽 姚勇 《江苏医药》 CAS 2023年第9期869-873,F0002,共6页
目的探讨Rho激酶抑制剂Y27632对急性视网膜缺血-再灌注损伤大鼠凋亡相关基因表达的影响。方法80只SD大鼠随机分为急性缺血-再灌注组(再灌注组)、生理盐水对照组(生理盐水组)、Y27632治疗组(Y27632组)和正常对照组(正常组),每组20只。生... 目的探讨Rho激酶抑制剂Y27632对急性视网膜缺血-再灌注损伤大鼠凋亡相关基因表达的影响。方法80只SD大鼠随机分为急性缺血-再灌注组(再灌注组)、生理盐水对照组(生理盐水组)、Y27632治疗组(Y27632组)和正常对照组(正常组),每组20只。生理盐水组和Y27632组右眼玻璃体腔注射生理盐水和稀释后的Y276324μL,随后再灌注组、生理盐水组和Y27632组大鼠右眼构建急性视网膜缺血-再灌注模型,正常组不做任何处理。再灌注后24 h和7 d采用HE染色观察大鼠视网膜结构,再灌注后24 h采用Western blot法检测Caspase-3蛋白表达,实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA表达。结果再灌注后24 h,再灌注组和生理盐水组视网膜厚度较Y27632组和正常组增加(P<0.05),Y27632组视网膜厚度较正常组增加(P<0.05);再灌注后7 d,再灌注组和生理盐水组视网膜厚度较Y27632组和正常组减少(P<0.05),Y27632组视网膜厚度较正常组减少(P<0.05)。再灌注组和生理盐水组Caspase-3蛋白表达高于正常组和Y27632组(0.973±0.153和0.969±0.144 vs.0.337±0.053和0.509±0.071)(P<0.05),Y27632组Caspase-3蛋白表达高于正常组(P<0.05)。Y27632组Bcl-2 mRNA表达高于再灌注组、生理盐水组和正常组(2.80±0.37 vs.2.27±0.62、2.28±0.54和1.07±0.23)(P<0.05),再灌注组和生理盐水组Bcl-2 mRNA表达高于正常组(P<0.05)。结论Y27632玻璃体腔注射可以减少急性视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜中Caspase-3蛋白表达,增加Bcl-2 mRNA表达。 展开更多
关键词 RHO激酶 y27632 视网膜 缺血-再灌注损伤 凋亡
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RhoA/Rho激酶及其抑制剂对COPD大鼠气道重塑的影响 被引量:3
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作者 黄健莹 梁健健 +1 位作者 钟维农 陈振宇 《广州医药》 2014年第4期27-30,共4页
目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织RhoA,ROCKⅡ含量的变化,探讨Y-27632对COPD大鼠RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路的调控及其对气道重塑的影响。方法将60只清洁级Wister雄性大鼠按随机数字表法分成3组,即正常对照组、COPD模型组... 目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺组织RhoA,ROCKⅡ含量的变化,探讨Y-27632对COPD大鼠RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路的调控及其对气道重塑的影响。方法将60只清洁级Wister雄性大鼠按随机数字表法分成3组,即正常对照组、COPD模型组和Y-27632干预组,每组20只,采用烟熏及气管滴入脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,用ROCK特异性抑制剂Y-27632进行干预,测定大鼠的肺功能,光镜观察肺组织结构,用医学图像分析软件测定支气管管壁厚度(Wat/Pbm)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm),反映气道重塑的程度。免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白的表达,RT-PCR法测定RhoA、ROCKⅡmRNA含量。结果①与对照组比较,模型组吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)升高,0.3秒用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)降低(P<0.01);干预组肺功能改善,与模型组比较有差异(P<0.01)。②模型组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达增高,Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。③模型组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(92.68±4.32)、(38.43±3.53)μm2/μm,对照组分别为(33.15±4.02)、(14.33±1.23)μm2/μm,模型组支气管壁、平滑肌层厚度增加(P<0.01);干预组Wat/Pbm、Wam/Pbm分别为(61.12±2.92)、(25.57±2.69)μm2/μm,均低于模型组大鼠(P<0.01)。结论 Y-27632通过抑制RhoA/ROCK信号通路,能够下调RhoA,ROCKⅡ的表达,抑制COPD大鼠Wat/Pbm和Wam/Pbm。 展开更多
关键词 RHOA rock信号通路 慢性阻塞性肺疾病 气道重塑 y-27632
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ROCK介导缓激肽开放SD大鼠血肿瘤屏障
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作者 马腾 刘啸白 薛一雪 《解剖科学进展》 CAS 2013年第1期75-78,共4页
目的利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分... 目的利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western-blot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达;应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变。结果 Y-27632显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高;Y-27632显著抑制ZO-1的表达;Y-27632抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,应力纤维形成明显减少。结论 ROCK介导缓激肽开放血肿瘤屏障。 展开更多
关键词 rock y-27632 缓激肽 血肿瘤屏障 紧密连接 ZO-1 SD大鼠
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