ROCK2在前列腺癌中的表达及意义

目的探究ROCK2蛋白在临床局限性前列腺癌患者肿瘤组织内部不同区域的表达水平及其意义。方法选取2005年1月至2010年12月行前列腺癌根治术的32例临床局限性前列腺癌患者,其中17例生化复发,15例至末次随访无生化复发。收集记录患者的前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)水平、Gleason评分、肿瘤分期及是否复发等资料。对这些前列腺根治标本进行免疫组化检测,评估肿瘤中心区、肿瘤前缘区及癌旁前列腺组织中ROCK2的表达水平,分析其与患者血PSA、肿瘤分期、分级及复发的关系。结果 ROCK2在前列腺癌组织肿瘤前缘区表达显著高于肿瘤中心区,且肿瘤前缘区ROCK2高表达与前列腺癌病理分级及生化复发相关,而肿瘤中心区ROCK2表达与前列腺癌病理分级及生化复发无相关。ROCK2表达与患者PSA水平及病理分期均无相关。结论ROCK2在前列腺癌前缘组织中高表达与肿瘤恶性程度及复发相关,该蛋白可能是前列腺癌的预后因子。

原发性肝癌细胞中Rock2调控MMP2对其侵袭迁移的作用

目的探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(Rho associated coiled coil containing protein kinase 2,Rock2)调控基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法用Western blot法检测30例肝癌组织及对应癌旁组织中Rock2和MMP2的蛋白表达,同时分析它们之间的关联;用荧光定量PCR和Western blot法观察稳定降低Rock2细胞中MMP2 mRNA及蛋白表达变化;利用PCR定点突变技术构建Rock2同义突变质粒"恢复"稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2表达后检测MMP2蛋白表达变化;采用Transwell侵袭实验和划痕实验观察空白对照组、稳定低表达Rock2组、"恢复"Rock2组HepG2细胞侵袭和迁移能力变化。结果Rock2和MMP2蛋白在肝癌组织中均比对应癌旁组织明显增高,且两者的表达呈正相关性。稳定降低肝癌细胞中Rock2的表达后发现MMP2的mRNA和蛋白表达也随之降低;另外,"恢复"稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2的表达,MMP2表达也"恢复";同时证实Rock2通过调节MMP2表达从而影响肝癌细胞的侵袭和迁移。结论在原发性肝癌细胞中降低Rock2可引起MMP2表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。

血浆Rho激酶水平与急性冠脉综合征的关系

目的研究Rho激酶(ROCK2)在急性冠脉综合征(ACS)患者血浆中的活化情况,探讨Rho/Rho激酶与急性冠脉综合征的关系。方法选取2011年1月～2012年10月于青海大学附属医院心内科住院治疗诊断为急性心肌梗死的患者36人(A组),诊断为不稳定型心绞痛的患者31人(B组);选取同院同期体检中心健康体检者32人为对照组(C组),分别抽取各研究对象静脉血2ml置于EDTA管内,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者血浆中ROCK2的水平,所有研究对象均检测C反应蛋白及尿酸(结果由青海大学附属医院生化室提供)。结果 3组研究对象中A组和B组血浆中ROCK2含量显著高于C组血浆中ROCK2水平(P<0.05)。A组血浆中ROCK2水平较B组差异无统计学意义。3组研究对象中A组及B组患者CRP及尿酸均高于C组(P<0.05),ROCK2活性与CRP呈正相关(r=0.603,P<0.01);ROCK2活性与尿酸呈正相关(r=0.299,P<0.01)。结论 Rho激酶(ROCK2)在急性冠脉综合征患者血浆中水平增高,表明其参与急性冠脉综合征发展,并具有重要意义。

敲降TMEM45A基因对卵巢癌细胞增殖、黏附及侵袭的影响

目的观察跨膜蛋白45A(TMEM45A)基因对卵巢癌细胞增殖、侵袭能力的调节作用,并进一步探索其可能相关信号通路。方法通过分析TCGA数据库卵巢癌组RNA测序数据和25对卵巢癌及其配对非癌组织样本的RT-PCR数据,比较卵巢癌组织和正常组织中TMEM45A的表达。在两种卵巢癌细胞系HO-8910和A2780中进行RNA干扰,抑制TMEM45A的表达;使用CCK-8、PI染色、细胞黏附和Transwell实验检测细胞增殖、细胞周期分布、黏附和侵袭能力;分析TGF-β信号传导途径、粘着斑途径与TMEM45A的高表达的相关性;采用RT-PCR和Western检测TGF-β1、TGF-β2、Rho A、ROCK2 mRNA和蛋白水平。结果 TM EM 45A在卵巢癌中过表达(P<0.001);TM EM 45A基因的沉默抑制了细胞增殖(P<0.05),增加了处于G1期的细胞群(P<0.05);敲降TMEM45A基因可以抑制细胞黏附和侵袭(P<0.05);抑制TMEM45A显著下调TGF-β1/2、Rho A和ROCK2的表达(P<0.05)。结论 TM EM 45A可能是卵巢癌的致癌基因,敲降TM EM 45A基因可能成为卵巢癌的治疗靶点。

ROCK2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的研究Rho相关的蛋白激酶2（ROCK2）在食管鳞癌组织中的表达水平及其临床意义。方法收集1990至2001年间在中国医学科学院肿瘤医院接受手术治疗的原发食管癌病例，免疫组织化学方法检测了组织芯片中118例食管鳞癌组织及其配对的癌旁正常食管黏膜中ROCK2的表达水平。将病例按年龄、性别、肿瘤部位、吸烟与否、分化程度、T分期、淋巴结转移及TNM分期进行分组，比较不同组别中ROCK2表达水平的差异。结果ROCK2在118例食管鳞癌组织中的高表达率为45．76％（54／118）。在年龄〈61岁组，ROCK2高表达率为55．74％（34／61），高于年龄〉61岁组的35．09％（20／57），两者差异具有统计学意义（X2=5．062，P=0．024）。高分化病例组中ROCK2高表达率为58．70％（27／46），高于中、低分化病例组的37．50％（27／72），差异具有统计学意义（X2=5．080，P=0．024）。结论ROCK2在食管鳞癌组织中的表达升高与发病年龄及肿瘤的分化程度相关。

牛膝-白芍配伍对帕金森病小鼠神经炎症及RhoA/ROCK2信号通路的影响

目的:观察牛膝和白芍不同剂量对肝阳上亢证帕金森病小鼠神经炎症及多巴胺能神经元的保护作用,并探究其作用机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、牛膝-白芍低、中、高剂量组(3.25、6.5、13 g·kg-1)、司来吉兰组(0.01 g·kg-1)。采用附子汤灌胃联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射的方法制备肝阳上亢证帕金森病模型。通过小鼠转棒实验和爬杆实验评估其行为学改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定小鼠脑黑质中Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)、Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶2(ROCK2)、肌球蛋白轻链1(MLC1)、α-突触核蛋白(α-synuclein)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脑黑质中RhoA、ROCK2、MLC1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)促炎细胞因子含量;透射电镜观察小鼠神经元超微结构变化。结果:与正常组比较,模型组跌落潜伏期显著缩短及爬杆时长显著增加(P<0.01),脑黑质内RhoA、ROCK2、MLC1、α-synuclein、TNF-α、IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,牛膝-白芍低、中、高剂量组、司来吉兰组跌落潜伏期明显增加及爬杆时长明显降低(P<0.05,P<0.01),且ROCK2、MLC1、α-synuclein、TNF-α、IL-1β水平均降低(P<0.05)。电镜下与正常组比较,模型组神经元胞质内细胞器数量明显减少,线粒体肿胀且内质网形态异常,而牛膝-白芍高剂量组和司来吉兰组经元胞核结构完整,细胞轮廓清晰,内质网形态正常。结论:牛膝-白芍配伍改善肝阳上亢证PD小鼠运动能力,下调RhoA/ROCK2信号通路相关蛋白表达,抑制炎性因子表达,减轻多巴胺能神经元损伤,其机制可能与抑制脑内RhoA/ROCK2信号通路介导的神经炎症反应有关。

香砂六君子汤调控RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路改善功能性消化不良大鼠胃动力的机制

目的:基于RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)/肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(MYPT1)信号通路探讨香砂六君子汤对功能性消化不良(FD)大鼠胃动力障碍的干预机制。方法:将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为正常组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法复制FD大鼠模型。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水灌胃,莫沙必利组给予1.35 mg·kg^(-1)·d^(-1)莫沙必利灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予12、6、3 g·kg^(-1)·d^(-1)香砂六君子汤汤剂灌胃,持续干预14 d。造模和给药前后观察大鼠一般生存状况,测定大鼠体质量、3 h平均进食量。给药干预结束后,测定大鼠肠推进率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察胃组织病理改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组大鼠延髓和胃组织匀浆液中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、血管活性肠肽(VIP)含量,采用冰冻切片染色技术观察各组大鼠胃窦平滑肌中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶分布,采用蛋白免疫印迹法检测胃组织中RhoA、ROCK2、磷酸化(p)-MYPT1蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠毛发枯乱、倦懒怠动、行动缓迟,一般生存状况较差,体质量、3 h平均进食量以及肠推进率均明显下降(P<0.05);胃组织病理未见明显异常;延髓和胃组织中ChAT含量减少,胃组织中VIP含量增多,胃窦平滑肌中ATP酶分布明显减少,胃组织中RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠一般生存状况明显好转,体质量、3 h平均进食量及肠推进率明显增加(P<0.05);胃组织病理未见明显差异;延髓和胃组织中ChAT含量明显增加,胃组织中VIP含量减少,胃窦平滑肌中ATP酶分布明显增加,胃组织中RhoA、ROCK2、p-MYPT1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),上述指标香砂六君子汤组干预作用呈剂量依赖性。结论:香砂六君子汤能够有效改善FD大鼠一般生存状况及胃动力,其具体机制可能与香砂六君子汤激活胃组织中RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路调控平滑肌舒缩,促进胃动力有关。

基于RhoA/ROCK通路探讨淫羊藿苷对肾病综合征大鼠的保护机制

目的:研究淫羊藿苷对肾病综合征(NS)大鼠肾素同源蛋白A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)通路的影响和保护机制。方法:实验对象为54只清洁级雄性SD大鼠,随机均分为正常组,模型组,RhoA抑制剂组(Rhosin,40 mg·kg^-1·d^-1)和淫羊藿苷低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg^-1·d^-1)。模型组大鼠尾静脉注射6.5 mg·kg^-1盐酸阿霉素给,诱导大鼠NS发生。造模后腹膜给药,正常组和模型组给予生理盐水2.5 mL·d^-1,抑制剂组和各剂量组分别给对应剂量的Rhosin和淫羊藿苷进行干预。试剂盒检测各组大鼠尿总蛋白(Alb),尿肌酐(Cre)水平,计算尿总蛋白/肌酐值(A/C);透射电镜(TEM)鉴定肾脏超微病理;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平和蛋白表达。结果:TEM结果显示,正常组基底膜完整,足突规整;模型组基底膜损坏严重,足突出现消失、融合严重;淫羊藿苷低剂量组基底膜损伤减轻,足突的数量和密度改善、融合明显;淫羊藿苷中剂量组和抑制剂组,基底膜增厚情况减轻,足突轻度融合;淫羊藿苷高剂量组基底膜结构较完整,足细胞较长、排列较紧密。与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C,肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,抑制剂组和淫羊藿苷低、中、高剂量组24 h尿蛋白量,A/C和肾组织中RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,抑制剂组和淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与抑制剂组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA蛋白水平明显降低(P<0.05);淫羊藿苷低剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷中剂量组肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平明显升高(P<0.05)。与淫羊藿苷低剂量组比较,淫羊藿苷中、高剂量组尿液中Alb,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与淫羊藿苷中剂量组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA,ROCK1 mRNA和蛋白水平,肾组织ROCK2 mRNA明显降低(P<0.05)。结论:在NS大鼠治疗过程中,淫羊藿苷可能通过影响RhoA/ROCK通路,实现肾小球内皮和足细胞保护作用。