转录因子RORγτ和FOXP3在口腔扁平苔藓病损组织中的表达及意义

目的:口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)是一种发生于口腔黏膜的T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病。辅助性T细胞(helper T lymphocytes,Th)在OLP的发病过程中具有重要作用,本研究旨在进一步探索OLP患者局部病损组织中辅助性T细胞亚群Th17细胞和Treg细胞的作用。方法:纳入43例OLP患者和13例健康志愿者。采用实时定量PCR法检测局部病损组织中Th17和Treg细胞的特征性转录因子RORγτ和FOXP3的表达,采用GraphPad Prism 5软件对其表达差异进行统计学分析。结果:OLP局部病损组织中转录因子RORγτ和FOXP3的表达显著高于正常黏膜组织,而且均与OLP的临床分型密切相关。萎缩糜烂型OLP组病损组织中RORγτ/FOXP3比值显著高于网状型OLP组和健康对照组,而网状型OLP组的RORγτ/FOXP3比值虽然高于对照组,但差异无显著性。结论:Th17细胞和Treg细胞均参与OLP的局部免疫反应;同时,Th17/Treg失衡也参与了重症型OLP的致病过程,且表现为Th17细胞优势。

ROR1在不同组织学分级浸润性肺腺癌中的表达与临床意义

目的研究受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase-like orphan rectetpor 1,ROR1)在不同组织学分级的浸润性肺腺癌中的表达情况,分析其与肺腺癌病理组织学分级的关系;探讨其是否可作为浸润性肺腺癌诊断评估的潜在指标。方法收集浸润性肺腺癌石蜡包埋组织标本290例,行HE染色切片后进行组织学分级,通过免疫组化染色,使用半定量法判读ROR1表达水平,统计分析ROR1表达与浸润性肺腺癌分级的关系。结果ROR1高表达于低分化的浸润性肺腺癌(P<0.001);低分化组的浸润性肺腺癌中Ki-67指数明显高于高、中分化组(P<0.001);Ki-67指数在ROR1高表达组高于低表达组(P<0.01)。结论ROR1在不同分级的肺腺癌中表达水平存在明显差异,其表达水平与浸润性肺腺癌的分化程度及恶性程度密切相关,这使得它有可能成为新的肺腺癌诊断生物标志物并辅助肺腺癌的临床特征和预后的评估,为患者制定个性化治疗策略提供科学依据。

支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3^(+)调节性T细胞(Treg)数量减少且向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg)表型转换在支气管肺发育不良(BPD)小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组,每组10只,高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠,取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化,Western blot法检测肺表面活性蛋白C(SP-C)表达水平;流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3(FOXP3)^(+)Treg及维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)^(+)FOXP3^(+)Treg占CD4^(+)淋巴细胞百分比,ELISA检测肺组织中白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比,高氧组肺泡结构简单化,放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降,高氧组FOXP3^(+)Treg占比减少,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg占比增多,肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3^(+)Treg与SP-C相对表达水平呈正相关,RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3^(+)Treg数量减少并向RORγt^(+)FOXP3^(+)Treg转换,可能参与高氧所致肺损伤。

RORγt反向激动剂用于自身免疫性疾病治疗的研究进展

视黄酸受体相关孤儿受体RORγt作为Th17细胞特异性转录因子可诱导Th17细胞的分化以及炎性因子IL-17等的产生,在炎症和自身免疫性疾病等病症的发生和发展过程中发挥着重要作用。近年来RORγt反向激动剂已成为学术界乃至国际制药公司研究的热点领域。目前已报道多种骨架结构类型,包括正构位点反向激动剂和变构位点反向激动剂。本文通过介绍RORγt的结构与功能,并对处于临床和临床前研究中的一些RORγt反向激动剂进行综述,以期为RORγt反向激动剂的进一步研究与开发提供参考。

胃癌中RORα蛋白的表达及临床病理意义

目的观察维甲酸相关孤核受体α(Retinoid acid receptor related Orphan Receptorα,RORα)蛋白在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生、发展的关系,为寻找胃癌肿瘤标记物提供一定的实验依据。方法应用组织芯片技术及免疫组化SP法检测90例胃癌组织、48例癌旁胃黏膜组织与22例正常胃黏膜组织中RORα的表达,研究RORα与胃癌发生、发展的关系。结果 RORα蛋白在胃癌组织中表达下调,正常胃黏膜、癌旁胃黏膜和胃癌组织中RORα蛋白阳性率分别为83.36%(19/22),56.25%(27/48)和24.44%(22/90),3者相比差异有显著性(P<0.05)。高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌中,RORα阳性率分别为45.00%(9/20)、27.59%(8/29)、14.29%(3/21)、11.11%(1/9)和9.05%(1/11)。高分化腺癌RORα阳性率高于低分化腺癌(P<0.05)。结论 RORα蛋白下调与胃癌的发生、发展相关,且可能与胃癌的分化程度有关。

哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt的表达与气道炎症的关系

目的:探讨Th17细胞转录因子RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与哮喘气道炎症的关系。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平;免疫印记(Western blot)方法检测肺组织RORγt蛋白表达水平。结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、蛋白水平及IL-17水平均明显高于对照组和地塞米松治疗组(P<0.05),RORγt蛋白表达量与嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、BALF、外周血中IL-17含量、肺组织IL-17 mRNA表达量均呈正相关关系(r=0.789、0.795、0.902、0.669、0.806、0.883,P值均<0.01)。结论:RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达,其表达水平与气道炎症密切相关,参与了哮喘气道炎症的发生过程。

RORα高表达对人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响

目的观察RORα高表达对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。方法构建高表达RORα人胃癌MGC803细胞。Real-time PCR或RT-PCR和Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3 m RNA和蛋白表达。MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验检测RORα高表达对MGC803细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。结果 RORα高表达MGC803细胞RORαm RNA和蛋白表达显著上调。在48、72与96 h,RORα高表达细胞的增殖活性明显低于对照组和空载体组(P<0.05)。RORα高表达G_2/M期细胞明显高于对照组和空载体组(P<0.05)。高表达组细胞的迁移距离较对照组与空载体组明显减少(P<0.05)。高表达组穿膜细胞数较对照组与空载体组明显减少(P<0.05)。RORα高表达可明显下调MMP-9和上调TIMP3m RNA与蛋白。结论成功构建RORα高表达MGC803细胞,RORα高表达可抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,将细胞阻滞于G_2/M期,其机制可能与下调MMP-9和上调TIMP3有关。

NB-UVB对寻常性银屑病患者外周血Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达的影响

目的观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗寻常性银屑病的疗效以及对患者外周血单一核细胞RORγt和Foxp3 mRNA表达的影响,探讨NB-UVB治疗寻常性银屑病的作用机制。方法选取90例中、重度寻常性银屑病患者(进行期45例,稳定期45例),使用NB-UVB照射治疗8周,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QRT-PCR)方法,检测光疗前后外周血转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价临床疗效。同时选50例健康体检者作为正常对照组。结果治疗前,进行期及稳定期银屑病患者外周血RORγt mRNA表达量(9.12±1.46,8.77±1.25)显著高于正常对照组(3.01±0.71),差异有统计学意义(P<0.01);患者RORγt/Foxp3的比值(5.79±1.86,5.21±1.73)也显著高于正常对照组(0.91±0.42)(P<0.01);而Foxp3 mRNA的表达量(1.56±0.92,1.70±0.89)则显著低于正常对照组(3.26±1.05)(P<0.01)。NB-UVB照射治疗8周后外周血RORγt mRNA的表达量及RORγt/Foxp3的比值较治疗前明显下降,而Foxp3 mRNA的表达量较治疗前明显升高,与治疗前相比差异均有统计学意义(P<0.01)。NB-UVB治疗后PASI评分明显下降,与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.01)。总有效率达85.56%。患者治疗前、后PASI评分与RORγt mRNA表达量和RORγt/Foxp3比值呈正相关,而与Foxp3 mRNA的表达量呈负相关(P均<0.01)。结论寻常性银屑病的发生及病情严重程度可能与外周血RORγt mRNA的高表达及Foxp3mRNA的低水平有关;NB-UVB可明显下调外周血RORγt mRNA的表达,上调Foxp3 mRNA的表达,从而调节RORγt/Foxp3比值的失衡,这可能是NB-UVB治疗银屑病的机制之一。NB-UVB治疗各期寻常性银屑病疗效好,安全性高。

辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病大鼠外周血和肺泡灌洗液中IL-17、IL-21及RORγt的影响

目的观察辛伐他汀对吸烟导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠外周血及肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-17、IL-21及转录因子视黄酸相关孤儿受体γt(RORγt)表达的影响,探讨辛伐他汀治疗COPD的价值及其作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、吸烟组及治疗组,每组10只。对照组每天自然饮食,不作任何特殊处理。吸烟组及治疗组给予烟雾干预,同时治疗组给予辛伐他汀干预。4个月后,测量大鼠体重、肺功能、计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量及分类,观察各组大鼠肺组织的病理改变,采用酶联免疫吸附(ELISA)方法对大鼠外周血及BALF中IL-17、IL-21及RORγt蛋白进行检测;应用流式细胞术对外周血及肺实质中CD4+IL-17+T细胞(Th17)进行测定。结果实验结束后,肺功能检测显示吸烟组中动态肺顺应性(Cdyn)、呼气容积(FEV0.3)/用力肺活量(FVC)较对照组明显下降,呼气相气道相应阻力(Re)、吸气相气道相应阻力(Ri)明显升高。治疗组各项指标相对于吸烟组均有所改善。ELISA检测显示,吸烟组血浆及BALF中IL-17、IL-21和RORγt蛋白表达明显升高;治疗组血浆及BALF中IL-17及RORγt蛋白的表达较吸烟组显著降低(P<0.05)。Th17细胞在吸烟组大鼠外周血及肺实质中的表达较对照组明显升高(P<0.05);治疗后,大鼠外周血及肺实质中的Th17细胞有所下降。结论 COPD大鼠的外周血及BALF中IL-17、IL-21及RORγt蛋白升高,辛伐他汀能够降低COPD大鼠血及BALF中IL-17、IL-21及RORγt蛋白的表达,可能是其抑制COPD大鼠肺组织炎症反应和肺结构破坏的机制之一。

胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义

目的检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义。方法收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析。结果胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P<0.05),且二者呈现明显正相关(P<0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P<0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P<0.01)。结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系。

不同分期慢性淋巴细胞白血病患者外周血T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达变化

目的:研究特异性转录因子T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA在不同分期慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达情况并探讨其在CLL发病机制中可能的作用及临床意义。方法:选择46例初诊未治疗CLL患者为病例组(其中Binet A期15例,Binet B期16例,Binet C期15例),20名健康人作为对照组,通过荧光实时定量PCR方法分别检测各组外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3 mRNA的表达。结果:1 CLL患者外周血中T-bet mRNA表达低于正常对照组(P<0.05),GATA-3、RORγt、Foxp3 mRNA的表达均高于正常对照组(P值均<0.05),T-bet/GATA-3与RORγt/Foxp3比值均低于正常对照组(P值均<0.05);2分期越晚,GATA-3 mRNA和Foxp3 mRNA的表达量越高,其中B期和C期的GATA-3 mRNA表达高于A期(P<0.05),C期的Foxp3 mRNA表达高于A期和B期(P<0.05);分期越晚,T-bet/G ATA-3和RORγt/Foxp3比值越低。其中A期的T-bet/GATA-3比值高于C期(P<0.05),A期与B期的RORγt/Foxp3比值均高于C期(P<0.05)。结论:本研究从转录因子层面发现在CLL患者中,随着病程的进展,Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th2和Treg偏移,Treg细胞可能在CLL的发生发展中起着重要的免疫抑制作用。

薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠RORγt、Foxp3的影响

目的探讨薯蓣皂苷对胶原诱导型关节炎小鼠的治疗作用及其机制。方法选用DBA1/J小鼠建立鸡Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠模型(CIA),将造模成功的小鼠采用随机数字表法分为CIA模型组、薯蓣皂苷组、雷公藤多苷组,另设正常对照组,药物组于初次免疫后第21天开始灌胃给药,对照组和模型组给相同体积溶媒。初次免疫第35天处死小鼠,无菌取腹股沟淋巴结制成单细胞悬液,用实时荧光定量PCR技术检测Th17、Treg细胞特异性转录因子RORγt、Foxp3的表达情况。结果模型组与对照组相比,RORγt显著升高(P<0.05);2药物组与模型组相比RORγt显著下降(P<0.05);与模型组相比,薯蓣皂苷组Foxp3显著升高(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可以调节Th17、Treg细胞特异转录因子RORγt、Foxp3的平衡。

肝细胞癌中Wnt-5a、Ror2蛋白的表达及临床意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)中Wnt-5a、Ror2蛋白表达的关系及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测Wnt-5a及Ror2在62例HCC癌与癌旁组织中的表达。结果对比于癌旁组织,Wnt-5a在85.49%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P<0.001);Ror2在80.65%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P<0.001),两者表达呈正相关性(r=0.462,P=0.04);并且均相关于高的肿瘤分期(P<0.05)、高的AFP水平(P<0.05)以及高的Ki-67指数(P<0.05)。结论 Wnt-5a和Ror2在HCC中可能发挥抑癌基因样作用,其减低或缺失表达可能与HCC的发生、发展有关。

基于对NOD小鼠颌下腺RORγt、Foxp3及其mRNA调节探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制

为了探讨白芍总苷治疗干燥综合征的作用机制,本实验以BALB/c小鼠为正常对照组,将8周龄雌性NOD小鼠24只随机分为模型组、羟氯喹组、白芍总苷组、联合组,每组各6只,白芍总苷组每日灌胃白芍总苷稀释液0.4 mL,羟氯喹组每日灌胃羟氯喹稀释液0.4 mL,联合组每日灌胃白芍总苷+羟氯喹稀释液0.4 mL,模型组和正常组灌胃等体积的生理盐水0.4 mL。8周后摘取颌下腺组织,观察各组小鼠颌下腺病理变化,并用RT-PCR法检测颌下腺组织RORγt mRNA、FoxP3 mRNA的表达。结果显示:小鼠颌下腺病理损害模型组明显较正常组严重,其他组经药物干预后得到不同程度的改善,且联合组明显优于羟氯喹组和白芍总苷组。模型组NOD小鼠颌下腺RORγt mRNA的表达明显高于正常组,而Foxp3 mRNA的表达明显低于正常组,各给药组颌下腺RORγt mRNA的表达高于模型组,且联合组的表达明显低于羟氯喹组和白芍总苷组。联合组颌下腺Foxp3 mRNA的表达低于模型组、羟氯喹组和白芍总苷组,且与模型组相比有显著性差异。研究表明白芍总苷能改善干燥综合征NOD小鼠颌下腺的病理损害,可能通过RORγt/FoxP3介导的Thl7/Treg之间的免疫平衡而起到治疗SS的作用。

巨细胞病毒感染后新生鼠RORγt、IL-17的表达及意义

目的:通过比较巨细胞病毒感染新生鼠与正常新生鼠脾脏组织维甲酸相关孤儿核受体γt(RORγt)与IL-17的表达水平,为巨细胞病毒感染的发病机制提供实验依据。方法:24只新生BALB/c小鼠出生3 d时腹腔注射MCMV病毒悬液制备MCMV播散性感染模型(即病毒组),分别于造模后第3、7、14天处死8只小鼠,取脾脏组织备用;对照组(24只)腹腔注射等量的无菌生理盐水,同病毒组分为3个时点亚组。应用半定量RT-PCR及Western blot检测各组脾脏MCMV DNA、RORγt mRNA、IL-17 mRNA及RORγt蛋白的表达情况。结果:病毒组脾脏组织中可见MCMV DNA表达,而对照组没有,病毒组RORγt mRNA、IL-17 mRNA及RORγt蛋白表达随着感染时间的延长,表达逐渐增加,且同时间点表达量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-17与RORγt可诱导巨细胞病毒的炎症反应,参与MCMV的发病机制。

RORα高表达对二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗肿瘤的作用。该研究在DADS上调人胃癌MGC803细胞RORα的基础上,观察DADS与RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法:相差显微镜观察MGC803细胞形态的影响。采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[质]印迹法(Western blot)、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测对移植瘤生长的影响。结果:相差显微镜显示,DADS组与RORα高表达组细胞大小较MGC803细胞一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞少见,异型性降低。RORα高表达加DADS后,上述改变更为明显。Western blot检测结果显示,DADS组与RORα高表达组Snail蛋白表达明显下调,DADS+RORα高表达组更明显(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测显示,DADS与RORα高表达可明显下调Vimentin和上调E-cadherin m RNA与蛋白表达,DADS+RORα高表达组更为显著(P<0.05)。免疫荧光显示,DADS组与RORα高表达组细胞Snail与Vimentin表达较对照组明显减弱和E-cadherin表达显著增强,DADS+RORα高表达组更为显著,与Western blot结果一致。裸鼠实验显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),并且,移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率分别为15.07%、26.55%与49.27%(P<0.05)。免疫组织化学检测结果显示,DADS组、RORα高表达组与RORα高表达+DADS组较对照组的Ki-67、CD34与Vimentin表达均明显降低,E-cadherin表达明显增强。结论:RORα高表达可增强DADS体内外抑制人胃癌细胞EMT的作用。

艾灸对克罗恩大鼠结肠RoRγt、Foxp3调节作用研究

目的:观察隔药灸对克罗恩大鼠结肠Th17特异性转录因子维甲酸相关孤核受体γt(Ro Rγt)和Treg特异性转录因子叉头蛋白P3(Foxp3)的表达调节作用,探讨灸法治疗克罗恩病的可能效应机制。方法:SPF级雄性SD大鼠40只,完全随机分为4组,每组10只:正常组、模型组、隔药灸组和西药组(美沙拉嗪),采用三硝基苯磺酸(TNBS)溶液灌肠制备大鼠克罗恩疾病模型,隔药灸组取穴:天枢(双)、气海穴,西药组:美沙拉嗪灌胃治疗。治疗干预结束后,采用HE病理染色、免疫组织化学和Real-time PCR方法观察大鼠结肠降部组织病理学变化、Foxp3 m RNA的表达情况。结果:模型大鼠结肠组织出现克罗恩病的典型病理表现:裂隙状溃疡、黏膜层炎症伴肉芽肿,Th17特异性转录因子Ro Rγt蛋白在模型大鼠结肠黏膜及黏膜下层表达高于正常组大鼠(P<0.01),隔药灸和美沙拉嗪对Ro Rγt蛋白具有下调作用(P<0.01),且美沙拉嗪的调节作用强于隔药灸(P<0.01);Treg细胞特异性转录因子Foxp3及其m RNA在模型大鼠结肠黏膜及黏膜下层表达均低于正常组大鼠(P<0.01),隔药灸和美沙拉嗪对Foxp3及其m RNA都具有上调作用(P<0.01),但两组间比较无统计学差异(P>0.01)。结论:隔药灸可能通过调节克罗恩病模型大鼠结肠黏膜Th17/Treg细胞平衡中特异性转录因子Ro Rγt、Foxp3的表达来发挥改善结肠组织溃疡,缓解肠道炎症的治疗作用。

RORα高表达抑制人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化

目的在构建RORα高表达人胃癌MGC803细胞的基础上,观察RORα高表达对MGC803细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影响。方法采用相差显微镜观察RORα高表达对MGC803细胞形态的影响。RT-PCR、Western blot、免疫荧光与免疫组化法检测EMT相关分子表达。裸鼠实验检测RORα高表达对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,RORα高表达细胞较MGC803细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,异型性降低。Western blot检测结果显示,RORα高表达可明显下调MGC803细胞Snail蛋白表达(P<0.05)。RT-PCR与Western blot检测结果显示,RORα高表达可下调vimentin和上调E-cadherin m RNA与蛋白表达。免疫荧光检测结果显示,RORα高表达组细胞Snail与vimentin阳性信号表达较对照组明显减弱,而E-cadherin阳性信号显著增强。RORα高表达组移植瘤较对照组生长减慢(P<0.05),移植瘤体重较对照组明显降低,抑瘤率为26.55%(P<0.05)。RORα高表达组较对照组癌细胞异型性降低。RORα高表达组较对照组的Ki-67、CD34与vimentin阳性表达均明显降低,而E-cadherin阳性表达明显增强。结论 RORα高表达可体内外抑制人胃癌细胞EMT。

Th17细胞、RORγt在肺纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的初步探讨Thl7细胞及其维甲酸受体相关孤儿受体(retinoid-ralated orphan receptorγt,RORγt)在肺纤维化中的作用。方法 64只雄SD大鼠随机分为对照组(N)、肺纤维化模型组(B组)、地塞米松治疗组(D)。采用气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型.苏木精-依红(HE)观察肺组织病理形态学变化并测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;PCR检测肺部RORγtmRNA的表达;流式细胞术计数肺组织CD4+IL-17+Th17细胞;ELISA测血清IL-17水平.结果 (1)B、D组肺组织病理呈现逐渐由肺泡炎至纤维化动态改变过程,B、D组肺组织内HYP含量在不同时间点均高于N组(P<0.05),28 d时数值最高;(2)与N组比较,B、D组在不同时间点肺组织中TH17细胞和RORγtmRNA、血清中IL-17表达均明显增高(P<0.05),以造模7d最为显著。结论 TH17细胞、RORγtmRNA和血清IL-17表达增高在肺纤维化形成过程中起重要作用。

利用基因敲除小鼠研究咪喹莫特诱导银屑病模型中转录因子RORγt的作用

目的观察RORγt转录因子在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型中的作用。方法雌性8周C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、野生型给药组、RORγt-/-给药组,用PASI评分观察小鼠模型皮损的变化,HE染色观察皮损组织形态学变化,实时荧光定量PCR对小鼠皮损组织中的细胞因子mRNA相对表达量进行检测。结果局部给予咪喹莫特后野生型小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑、增厚典型银屑病样皮损,RORγt-/-给药组小鼠症状明显减轻。RORγt-/-组IL-22、IL-17、IL-23细胞因子的相对表达量明显低于野生型给药组。结论 RORγt转录因子调控Th17细胞因子IL-22、IL-17表达和该模型疾病的病理进程。