哮喘患儿外周血RORC和Foxp3 mRNA表达水平的变化及其意义

【目的】研究淋巴细胞亚群Th17与Treg上游调控基因维甲酸相关孤儿核受体(RORC)、叉状头转录因子P3(Foxp3)mRNA在支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达变化,并探讨其临床意义。【方法】采用荧光实时定量PCR技术分别检测20例哮喘发作期(年龄8.5±2.3)和20例哮喘缓解期(年龄9.2±1.8)外周血单个核细胞的RORC和Foxp3mRNA表达水平,并与10例健康对照组(年龄8.0±1.6)进行比较。并将哮喘患儿RORC和Foxp3 mRNA表达水平与其同期肺功能第一秒用力呼气容积(FEV1)进行相关分析。【结果】哮喘发作组RORC mRNA水平显著高于缓解组和正常对照组(5.41±0.12 vs 3.33±0.27 vs 3.78±0.13,P<0.01);哮喘发作组Foxp3 mRNA水平显著低于缓解组和正常对照组(3.34±0.12 vs 4.43±0.07 vs 4.13±0.04,P<0.01);缓解组和正常对照组相比,RORC和Foxp3 mRNA水平均无明显差异(P>0.05)。哮喘发作组RORC mRNA/Foxp3 mRNA比值明显高于缓解组和正常对照组(1.68±0.09 vs 0.76±0.06 vs 0.92±0.04,P<0.01)。Pearson相关分析显示,哮喘患儿外周血RORC mRNA水平与FEV1成负相关,而Foxp3 mRNA水平与FEV1成正相关(r分别为-0.58和0.52,P<0.01)。【结论】RORC mRNA/Foxp3 mRNA在发作期哮喘患儿存在失衡表达,提示Th17/Treg失衡可能在哮喘的急性发作及肺功能损伤中起着重要作用。

过敏性紫癜患者外周血单核细胞中转录因子T-bet,GATA-3和RORC mRNA的表达

目的探讨T-bet,GATA-3和RORC在过敏性紫癜患者发病中的作用机制。方法采用SYBR GreenI实时荧光定量PCR法检测32例过敏性紫癜患者和15例正常人外周血单核细胞中T-bet,GATA-3和RORC mRNA的表达水平。结果过敏性紫癜患者与正常人T-bet基因ΔCt平均秩次值分别为27.70和16.10,患者组T-betmRNA表达水平低于对照组;过敏性紫癜患者与正常人GATA-3基因ΔCt平均秩次值分别为18.25和36.27,患者组GATA-3 mRNA表达水平高于对照组,过敏性紫癜患者与正常人RORC基因ΔCt值分别为2.00±0.46与3.29±1.57,患者组RORC mRNA表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论转录因子T-bet,GATA-3和RORC可能在过敏性紫癜发病机制中具有重要作用。

川崎病患者CD4^+T细胞中血清和糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)表达上调且与RORC及IL-17A正相关

目的检测血清和糖皮质激素诱导的激酶1(SGK1)在川崎病(KD)患者CD4^+T细胞中的表达,探讨SGK1与维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)及白细胞介素17A的相关性。方法收集KD患者30例,正常同年龄对照30例,同年龄感染性疾病(ID)患者25例。利用流式细胞术检测Th17细胞占CD4^+T细胞的比例;实时定量PCR检测CD4^+T细胞中SGK1和RORC mRNA的表达;ELISA检测血清IL-17A和IL-6水平。结果与健康儿童和ID患者相比,KD患者中Th17细胞比例明显升高。与ID患者和健康儿童相比,KD患者血清中IL-17A和IL-6水平明显升高,SGK1和RORC mRNA水平升高。SGK1在KD冠状动脉损害(CAL)组的表达高于冠状动脉正常(CAN)组。静脉内注射免疫球蛋白(IVIG)治疗后,SGK1的表达明显下降;其中,CAL组下降高于CAN组。KD患者中,SGK1 mRNA的表达与RORC及血清IL-17A水平呈正相关,而与血清IL-6水平不相关。结论 KD患者CD4^+T细胞中SGK1 mRNA表达升高,与RORC和IL-17A正相关。

Graves甲亢和Graves突眼治疗前后TBX21、GATA3、RORC、FOXP3 mRNA表达水平的变化

目的探讨Graves甲亢和Graves眼病患者不同治疗方法治疗前后外周血单个核细胞中Th1、Th2、Th17、Treg细胞转录因子TBX21、GATA3、RORC、FOXP3 mRNA表达水平的变化及其意义。方法选择2014年9月至2016年5月就诊于西安交通大学第一附属医院内分泌门诊的新发未治的Graves甲亢患者12例,给予甲硫咪唑治疗(MMI);Graves眼病患者12例给予甲强龙冲击治疗(IVMP),采集患者治疗前后外周血,提取外周血单个核细胞RNA,通过实时荧光定量PCR检测Th1、Th2、Th17及Treg细胞转录因子(TBX21、GATA3、RORC及FOXP3)mRNA的表达情况。结果 Graves甲亢病组治疗缓解后与治疗前比较,RORC[(0.090 2±0.036 4)vs(0.292 6±0.198 6)]和FOXP3[(0.088 9±0.058 7)vs(0.148 6±0.072 6)]的表达均明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05);Graves眼病组治疗前后相比TBX21[(0.043 7±0.026 0)vs(0.043 6±0.019 6)]、GATA3[(0.040 5±0.023 3)vs(0.043 7±0.015 8)]、RORC[(0.184 4±0.094 9)vs(0.174 5±0.066 5)]及FOXP3[(0.1324±0.075 7)vs(0.187 0±0.059 5)]差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前Graves眼病组与Graves病组比较RORC[(0.184 4±0.094 9)vs(0.090 2±0.036 4)]的表达显著高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MMI和IVMP治疗会影响T细胞的分化;各T细胞亚群转录因子mRNA表达水平的变化与疾病的发展和治疗结果密切相关。

慢性牙周炎患者基础治疗前后Th17型细胞因子及RORC的表达变化观察分析

目的探究慢性牙周炎患者基础治疗前后Th17型细胞因子及RORC的表达变化观察分析。方法选取2016年3月至2017年3月本院收治的72例慢性牙周炎患者,对患者牙周基础治疗前后,应用荧光定量PCR检测患者外周血CD4+细胞中RORC的表达水平,以及对患者牙周基础治疗前后,应用ELISA检测龈沟液(GCF)中的Th17型细胞因子水平变化。对患者探诊深度(PD)、牙位菌斑指数(PLI)、临床附着水平(CAL)、牙龈指数(GI)等牙周临床指标的检测,应用的是Silness及Loe法。后接受详细的根面凭证及龈下刮治,以及全口龈上洁治及口腔卫生指导,按照患者牙周基础治疗计划。结果所有的临床牙周指标,在基础治疗后,均明显下降(P<0.05),说明患者症状显著改善;相较于治疗前,患者治疗后IL-21、IL-17水平均明显下降,且外周血CD4+T细胞RORC表达水平明显下降,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于慢性牙周炎患者,Th17型细胞因子发挥重要性的致炎作用。

慢性牙周炎病人基础治疗前后Th17型细胞因子及RORC的表达变化

目的:研究慢性牙周炎(CP)病人牙周基础治疗前后龈沟液(GCF)中的Th17型细胞因子及其外周血特异性转录因子RORC的表达变化规律。方法:选择CP病人30例,使用ELISA检测牙周基础治疗前后GCF中Th17型细胞因子(IL-17、IL-21)的水平变化,并利用荧光定量PCR检测牙周基础治疗前后外周血CD4+T细胞中特异性转录因子RORC的表达水平。结果:牙周基础治疗后龈沟液中的Th17型细胞因子IL-17、IL-21水平以及外周血CD4+T细胞中特异性转录因子RORC表达水平均较治疗前显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Th17型细胞因子在慢性牙周炎发生发展中发挥重要的致炎作用。

哮喘患儿外周血RORC mRNA、IL-17水平及其与气道重塑的关系研究

目的研究Th17细胞上游调控基因维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)mRNA及主要效应分子IL-17在支气管哮喘患儿外周血单个核细胞中的表达变化,并探讨其与哮喘气道重塑的关系。方法收集2010年9月至2012年8月中山大学孙逸仙纪念医院儿科就诊的中重度持续哮喘儿童45例,其中哮喘急性发作期25例,临床缓解期20例,以20名健康儿童为对照组。采用荧光实时定量PCR技术和双抗体夹心ELISA法分别检测PBMC中RORC mRNA和IL-17的表达;选取其中14例病程较长的临床缓解期患儿,采用高分辨螺旋CT进行胸部检测及支气管壁测量,并与同期IL-17水平进行相关分析。结果哮喘儿童急性发作期外周血PBMC表达RORC mRNA、IL-17水平均显著高于缓解组和正常对照组;缓解期患儿IL-17水平比对照组明显增高(P<0.05),而RORC mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。中重度哮喘患儿气道壁厚度、气道壁面积均明显增加,且与IL-17水平呈正相关(r分别为0.78、0.77,P<0.05)。结论转录因子RORC及IL-17参与儿童哮喘发病,其中IL-17水平升高与儿童哮喘气道重塑密切相关。

孤儿核受体RORC在脓毒症大鼠肺泡巨噬细胞的表达及调控机制

目的观察脓毒症肺损伤大鼠孤儿核受体RORC基因表达及血清IL-17水平,探讨Th17细胞在肺损伤中的作用及可能的调控机制。方法24只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组,吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamates,PDTC)预防组。静脉注射脂多糖(LPS,6mg/kg)复制急性肺损伤(ALI)的动物模型,在注射后12h处死。PDTC预防组在注射LPS前30min予以PDTC(120mg/kg)腹腔注射。测定肺湿/干重比(W/D),石蜡包埋切片经苏木素-伊红(HE)染色行肺组织病理评分,免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM)核因子-κBP65(nuclear factor-κBP65,NF-κBP65)表达,ELISA法检测血清IL-17水平,实时荧光定量PCR法检测AM孤儿核受体RORC基因表达。结果与对照组相比,模型组肺干/湿比、肺组织病理评分、AM的NF-κBP65表达、血清IL-17水平、AM孤儿核受体RORC基因表达增加(P<0.05);与模型组相比,PDTC预防组上述改变得以逆转。结论Th17细胞可能参与了肺损伤的病理过程。NF-κB活化可影响RORC基因表达,诱导Th17分化,使血清IL-17水平升高。

RORC2在系统性红斑狼疮患者外周血中的异常表达及其意义研究

目的通过检测维甲酸相关孤核受体(RORC2)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周静脉血单个核细胞(PBMCs)中的表达,初步探讨RORC2在SLE免疫炎症反应中发挥作用的机理。方法选取SLE患者21例及15名健康体检者为对照组,分离外周静脉血单个核细胞(PBMCs),提取总RNA作模板,采用逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)检测SLE患者及健康对照组Th17细胞转录因子RORC2和IL-17的mRNA的表达水平并进行组间比较。结果与正常人对照组相比,SLE组的RORC2mRNA表达显著提高,两组差别有统计学意义(P<0.05);SLE组的RORC2和IL-17mRNA表达水平也存在着相关性。结论 RORC2通过调控Th17细胞相关效应因子IL-17的分泌,促进T细胞免疫炎症反应。进一步提示,通过阻断Th17细胞分化的上游活动来减轻SLE的免疫炎症反应可以达到控制SLE的目的。

转录因子RORC2和白细胞介素17的表达与变应性鼻炎症状关系的研究

目的探讨变应性鼻炎（allergicrhinitis，AR）患者转录因子维甲酸相关孤儿受体（retinoicacid—relatedorphanreceptorvariant2，RORC2）和白细胞介素（interleukin，IL）17的表达与过敏症状的关系。方法取23例AR患者和16例健康人鼻黏膜、鼻分泌物和静脉血，采用免疫组化、实时荧光定量反转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测其中RORC2和IL-17的表达。对AR患者进行症状评分。采用SPSS13．0软件对变应性鼻炎组与健康对照组各检测指标进行统计学分析。结果AR组鼻黏膜中RORC2和IL-17免疫组化染色的阳性细胞率分别为0．17±0．05（x±s，以下同）和0．72±0．13，高于健康对照组的0．05±0．02和0．27±0．11，差异有统计学意义（t值分别为9．51和11．92，P值均〈0．05）。AR组鼻黏膜和外周血RORC2mRNA的相对表达量为0．063±0．011和0．452±0．031，高于对照组的0．029±0．009和0．239±0．027，差异有统计学意义（t值分别为6．51和3．35，P值均〈0．05）。AR组IL-17在鼻黏膜、鼻分泌物和外周血中的水平分别为（70．28±10．69）、（45.32±8．55）、（6．76±1．18）pg／ml，高于对照组的（18．434-8．34）、（6．83±1．31）、（0．74±0．05）pg／ml，差异有统计学意义（t值分别为7．92、17．66和15．43，P值均〈0．05）。AR组鼻过敏症状评分为（9．43±1．27）分，分别与鼻黏膜、外周血RORC2mRNA的表达以及鼻黏膜、外周血IL-17的表达水平呈正相关（r值分别为0．820、0．746和0．629、0．841，P值均〈0．05）。结论RORC2和IL-17参与了AR的炎性反应，可作为判断病情严重程度的指标之一。

RORC抑制剂可通过抑制IL-17减弱骨性关节炎细胞凋亡

目的探讨维甲酸相关孤儿核受体C(retinoic acid receptor related orphan C,RORC)在骨性关节中的功能及机制。方法建立确乙酸钠(monosodium iodoacetate,MIA)诱导的骨性关节炎(osteoarthritis,OA)细胞模型,采用qRT-PCR检测RORC mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,Armexin V-FITC/PI Apoptosis Detection kit、Western印迹及Caspase-3活力检测试剂盒测定OA软骨细胞调亡率及调亡相关蛋白的表达与活力,ELISA试剂盒检测IL-17与炎性因子的表达。结果在OA模型中R0RC的蛋白及mRNA表达水平升高,SR1001(RORC抑制剂)可使OA细胞模型细胞活力上调,细胞凋亡率显著降低,并抑制IL-17及炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α的释放。过表达IL-17可减弱SR1001对OA模型凋亡的抑制作用。结论R0RC抑制剂可通过减少IL-17的释放,保护软骨细胞,抑制骨性关节炎。

RORC抑制剂对变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中HIF-1α及VEGF的影响

目的 探讨维甲酸相关孤儿核受体C （retinoic acid receptor related orphan C,RORC）抑制剂（SR1001）对变应性鼻炎（AR）模型小鼠鼻黏膜中缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor,HIF）-1α及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响.方法 将30只BALB/c小鼠按数字表法随机分为正常对照组、AR模型组和RORC抑制剂组,每组10只.采用卵清蛋白（OVA）致敏法建立小鼠AR模型,RORC抑制剂组腹腔注射SR1001 （25 mg/kg）,AR模型组用0.9％生理盐水给予相同处理.给药期间每周末次给药后,对小鼠进行行为学评分测定,随后麻醉小鼠取鼻黏膜组织,于光镜下观察组织病理学变化;免疫组织化学法观察HIF-1α及VEGF的蛋白表达情况.ELISA法测定小鼠血清中干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-17、特异性IgE（sIgE）的含量.Western blot法检测鼻黏膜组织中HIF-1α及VEGF的表达情况.组间比较采用单因素方差分析,方差齐用LSD法进行组间两两比较,不齐则用Dunnett T3法进行组间两两比较.设P＜0.05为差异有统计学意义.结果 小鼠AR模型建立成功.与AR模型组比较,RORC抑制剂组AR小鼠的行为学评分明显降低[（4.02±0.97）分比（8.50±1.76）分,t=7.050,P＜0.01];已损伤的黏膜上皮出现好转,腺体和扩张的腺管趋于正常,肥大的杯状细胞明显减少,黏膜固有层浸润的炎性细胞减少.与AR模型组比较,RORC抑制剂组小鼠的血清IL-17、sIgE的含量显著降低[（25.10±4.11） ng/ml比（42.56±5.98） ng/ml,（0.875±0.244） ng/ml比（1.982±0.365） ng/ml,t值分别为14.141、10.275,P值均＜0.01],IFN-γ含量显著升高[（61.32±8.83） pg/ml比（38.94±5.97） pg/ml,t=8.133,P＜0.01];HIF-1α及VEGF蛋白表达量显著降低[（0.92±0.08）比（1.67±0.31）,（1.12±0.21）比（2.54±0.46）,t值分别为7.408、8.880,P值均＜0.01].结论 RORC抑制剂可能通过改变AR小鼠体内炎性因子的含量、降低鼻黏膜组织中HIF-1α及VEGF表达水平的方式,达到治疗AR的效果.

加权基因共表达网络分析筛选结肠腺癌预后相关的免疫标志物

目的寻找结肠腺癌(COAD)免疫相关预后标志物,以期能够准确预测COAD患者预后。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析COAD患者免疫相关差异基因,通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)与COX回归分析得到风险模型,根据风险值的中位值将患者分为高、低风险组,比较两者预后,在基因表达数据集(GEO)数据库中验证模型。结果通过分析共得到1015个免疫相关差异基因。COX回归分析得到由维甲酸受体相关孤核受体C(RORC)、富含亮氨酸重复序列Fli-I相互作用蛋白2(LRRFIP2)、半乳糖凝集素4(LGALS4)构成的风险模型,高风险组较低风险组预后较差并在GEO中得到验证,通过单因素与多因素COX分析发现模型可作为COAD患者独立预后风险模型。结论通过免疫相关预后差异基因建立模型,可以预测COAD患者预后。

Th17及其相关因子在不同牙周炎症状态龈沟液中的检测

目的:探讨Th17及其相关因子在慢性牙周炎发病中的作用。方法:选择46例牙周科患者分为4组:慢性牙周炎活动型位点组、慢性牙周炎静止型位点组、牙龈炎组和健康对照组,应用酶联免疫法检测各组龈沟液中IL-17、RORC2、IFN-γ和IL-4的含量并进行分析。结果:IL-17和RORC2的表达趋势相似,活动型位点组明显高于其他3组,静止型位点组明显高于健康对照组;健康对照组的IFN-γ明显低于其他3组;活动型位点组IL-4明显低于其他3组;IL-17和RORC2呈正相关,IL-17和IL-4呈负相关;IL-17、RORC2、IFN-γ与临床指标BI、PD和AL呈正相关,IL-4与BI、PD和AL呈负相关。结论:Th17在慢性牙周炎活动型中占优势,随着附着丧失增加,龈沟液中含量升高;IFN-γ可能参与了牙龈炎症和非炎症的状态转化。

Thl7细胞在急性髓系白血病中表达失衡的研究

研究Thl7细胞在急性髓系白血病(AML)患者骨髓与外周血中的表达水平,进一部探讨急性髓系白血病的发病机制。并探讨Thl7细胞比例的改变与病人临床的相关性。方法①用实时荧光定量(RT-PCR)分别检测AML初诊组、化疗完全缓解及正常对照组骨髓及外周血单个核细胞中Th17转录因子(RORC)的表达水平。②用流式细胞术分别检测AML初诊组、化疗完全缓解及正常对照组外周血中Thl7细胞所占比例。结果 AML初诊组外周血中Th17细胞表达水平(0.98±0.058)明显低于完全缓解组(2.08±0.76)及正常对照组(1.79±0.306),差异有统计学意义(P<0.05)。AML初诊组(中位数0.000 036 418 3范围0.000 003 328 5~0.001 410 087 1)外周血单个核细胞(PBMCs)RORC m RNA的表达水平明显低于完全缓解组(中位数0.000 187 543 4范围0.000 025 426 0~0.001 221 892 7)及正常对照组(中位数0.002 644 026范围0.000 063 627 0~0.000 956 465 1),差异有统计学意义(P<0.001)。初诊组(中位数0.000 036 7983范围0.000 005 010 3~0.000 512 556 9)骨髓单个核(BMMCs)RORC,显著低于完全缓解组(中位数0.000 102 885 9范围0.000 014 073 4~0.001 568 208 7),差异有统计学意义(P<0.001)。初诊的AML患者接受治疗达到完全缓解后外周血RORC m RNA的表达恢复到正常水平,差异有统计学意义。结论 Thl7细胞表达失衡可能与AML的发生发展相关。

基于实车的螺纹剪切式吸能装置单电机传动系统设计

为实现螺纹剪切式吸能装置在实车上的应用,克服其原自适应吸能电控系统中电机位置与实车结构的不匹配性,以及双电机传动导致的异步现象,依据实车众泰2008的车型特点,重新调整电机位置、设计传动方案,实现了吸能装置在实车上的同步传动。结果表明,该传动系统的设计降低了吸能装置电控系统实车化的设计难度,方便了吸能装置在实车上的安装与应用。

CD40siRNA对实验性自身免疫性心肌炎大鼠Th17细胞及其细胞因子白细胞介素-17与白细胞介素-23的作用

目的探讨CD。小分子干扰RNA（CD40siRNA）对实验性自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠的心肌病理改变、心肌组织中Th17细胞及外周血中IL-17、IL-23水平的影响。方法选取40只健康雄性6—8周龄Lewis大鼠，体质量185—210g，随机分为对照组、EAM组、CD。siRNA组及小分子干扰RNA（siRNA）组，每组10只。EAM组、CD40siRNA组及siRNA组以猪心肌球蛋白与完全弗氏佐剂的混合液0．2mL大鼠足垫区皮下注射，对照组大鼠足垫区皮下注射PBS0．2mL。CD40siRNA组与siRNA组免疫后第8天分别尾静脉注射CD40siRNA表达载体、siRNA表达载体。免疫后21d处死所有大鼠，光镜下观察心肌病理变化并计算心肌组织病理积分；实时荧光定量-PCR法检测心肌组织Th17细胞分化的特异性转录因子基因RORCmRNA表达水平，ELISA法检测外周血IL-17、IL-23水平。结果1．CD40siRNA组心肌组织病理积分较EAM组明显下降（2．34±0．60比3．40±0．35，P〈0，05）；2．C040siRNA组RORCmRNA较EAM组明显下降（2．13±0．28比2．93±0．36，P〈0，05）；3．CD40siRNA组IL-17水平较EAM组明显下降（114．38±8．29比148．70±5．04，P〈0，05）；4．CD40siRNA组IL-23水平较EAM组明显下降（107．00±7．69比136．98±23．16，P〈0，05）。结论CD40siRNA可减轻EAM大鼠心肌炎症，其机制可能与抑制EAM大鼠Th17细胞分化特异性转录因子基因RORCmRNA的表达、减少IL-17及IL-23的分泌有关。