稳定转染COL1 A1-EGFP基因的ROS17/2.8细胞株的建立

目的构建稳定表达由COL1A1启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的ROS1 7/2 .8细胞株。方法用PCR方法从大鼠基因组DNA中扩增出长为 3.6Kb的COL1A1 (Ⅰ型胶原α1链基因 )启动子 ,并克隆到T载体 ;然后将COL1A1启动子分段酶切 ,获得不同长度的启动子片段 ;与报告基因EGFP相连接 ,构建成真核表达载体 ;随后转染ROS1 7/2 .8细胞系 ,再用G41 8筛选。结果得到了稳定转染COL1A1 EGFP基因的ROS1 7/2 .8细胞株。结论 这些细胞株的建立为研究微重力对COL1A1启动子活性及成骨相关基因表达的影响奠定基础。

甲状旁腺素和胰岛素样生长因子促成骨样细胞ROS 17/2.8增殖分化中的协同作用

间歇性小剂量地给予甲状旁腺素 (parathyroid hormone,PTH)可促进成骨 .胰岛素样生长因子 - I(insulin- like growth factor- I,IGF- I)由成骨细胞所产生并贮存于骨基质中 ,可促进成骨细胞的增殖分化 .为进一步了解向钙性激素和骨源性生长因子对骨生长的影响 ,利用成骨样细胞 ROS1 7/ 2 .8进行体外实验 ,观察了 PTH和 IGF- I这两种在骨生长和代谢中有重要作用的激素和因子相互作用的效果 ,并对其相互作用机制作出初步探讨 .结果显示 :联合使用 IGF- I及 PTH(间歇性给药 )时 ,(1 ) SRB(sodium rhodamine B,SRB)染色显示经 PTH(1 0 -9mol/ L,间歇给药 )和 IGF- I(1 0 -9mol/ L)联合处理的细胞 ,其数目明显增加 ,且明显高于单独处理组 ;(2 ) 3H- Td R参入增加 ,也明显高于单独处理组 ;(3)与增殖相关的原癌基因 (c- fos,c- jun,c- ki- ras)的表达增强 ,明显高于单独处理组 ;(4)骨钙素 (osteocalcin)基因 m RNA表达增强 ,明显高于单独处理组 ;(5) IGF- I(1 0 -8mol/L,1 0 -9mol/ L)可使 PTH受体基因 m RNA表达增强 .这些结果提示 PTH和 IGF- I在成骨样细胞ROS 1 7/ 2 .8增殖分化中具有协同作用 ,原癌基因的表达增强可能是其作用的一个环节 .此外 ,IGF- I可能通过增强 PTH受体表达 ,使细胞对

模拟失重对大鼠骨肉瘤成骨样细胞分化相关物质表达的作用

目的 :观察回转器模拟失重对大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS17/ 2 .8)分化相关物质表达的作用 .方法 :对培养的ROS17/ 2 .8细胞采用回转器模拟失重 72h ,同时设 1G对照组 .提取细胞总RNA ,进行反转录PCR ,检测I型胶原 (1链(collagenIα1)和碱性磷酸酶 (ALP)mRNA的表达情况 .同时采用ELISA法测定细胞内I型胶原蛋白的表达量 .结果 :模拟失重 72h后 ,ROS17/ 2 .8细胞内collagenIα1和ALP的基因表达量以及I型胶原蛋白的表达量显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 :回转器模拟失重 72h可使大鼠骨肉瘤成骨样细胞 (ROS17/ 2 .8)