抗肺癌单抗5F—11噬菌体抗体库的构建及表达

目的：构建人抗肺癌单抗5F－11的噬菌体显示文库，方法：利用RP－PCR方法从5F－11杂交瘤细胞扩增抗体轻重可变区基因。以连接子连接成为ScFv基因后克隆至载体pCANTAB5E。以肺腺癌细胞系A2为抗原体进行了4轮筛选，得到富集的次级噬菌表达文库。结果：制备了库容为8×10^7pfu/ml的噬菌体展示文库。随机抽取未经筛选的克隆进行酶切，酶切图谱呈多样性，富集后的酶切图谱显示特异构型的噬菌体得到富集，检测30个菌体克隆上清，其中22个与A2细胞有较强反应。

随机引物聚合酶链反应用于鉴别嗜人按蚊不同地理株的初步研究

目的探讨嗜人按蚊是否存在亚种（或地理株）。方法应用随机引物聚合酶链反应技术（ＲＰ－ＰＣＲ），选用３种引物对嗜人按蚊江苏株、广西株、广东株的ＤＮＡ扩增片段进行分析并以中华按蚊江苏株作对照。结果中华按蚊和嗜人按蚊的扩增条带存在明显差别，３种引物对嗜人按蚊江苏株、广西株和广东株的扩增图谱均存在明显差异。结论 ＲＰ－ＰＣＲ显示嗜人按蚊江苏株、广西株和广东株之间存在差异，但这种差异在嗜人按蚊种或种下分类上的意义有待进一步分析。

RPS15a基因在胃癌中高表达

目的：研究核糖体蛋白S15a（ribosomal protein S15a RPS15a）基因在胃癌及癌旁组织中表达差异，为进一步了解胃癌发生、发展的分子机制提供帮助。方法应用荧光定量PCR等方法进一步验证该基因在胃癌及癌旁组织中的表达差异，并在多种肿瘤细胞中的表达量进行比较。结果该基因在胃癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织，但在多种肿瘤细胞中的表达量无显著差异。结论 RPS15a基因在胃癌中呈高表达，说明其可能与细胞恶性生物学行为相关。在多种肿瘤细胞中表达量无显著差异，推测其可能在恶性肿瘤中的高表达具有普遍性。

HPLC荧光法检测转铁蛋白修饰的阿霉素脂质体在小鼠体内的含量

目的建立转铁蛋白修饰的阿霉素脂质体在小鼠体内组织浓度的测定方法。方法选择乙腈-5mmol·L-1乙酸铵水溶液(30:70)为流动相;色谱柱:DIKMA Diamonsil C18柱(4.6mm×150mm,5μm);流速1.0mL·min-1;检测波长:激发波长为480nm,发射波长为550nm;柱温:30℃。结果本实验所用方法线性关系良好,且具有专一性强、准确性、灵敏度高的优点,符合生物样本分析的要求。结论可用本法快速、简便、准确地测定小鼠组织样品中转铁蛋白修饰的阿霉素脂质体的含量。

荧光定量PCR方法在脊髓灰质炎病毒突变分析中的应用

目的建立检测脊髓灰质炎病毒突变比例的荧光定量PCR方法,并进行验证及初步应用。方法分别建立检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法,并进行特异性、重复性和灵敏度验证。通过Ct值计算样品的突变比例（revertant proportion,RP）,并进行准确性和重复性验证。采用建立的荧光定量PCR方法检测脊髓灰质炎病毒减毒株的突变比例。结果建立的检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒突变株和非突变株的荧光定量PCR方法能够特异性扩增相应基因片段;重复性试验Ct值的变异系数（CV）为0.085%-5.564%;灵敏度为1×10^-7-1×10^-6ng,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型非突变荧光定量PCR可分别检测到含量约0.084 3、0.029 2和0.266 7 CCID50的病毒。荧光定量PCR测定RP的方法经验证发现,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型混合质粒对照的RP检测值与理论值的差异较小,分别为0.040 9±0.037 4、0.008 8±0.034 3和-0.029 6±0.026 8。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎减毒株的RP分别为0.001 0、0.002 0和0.001 7。结论荧光定量PCR分析脊髓灰质炎病毒突变比例的方法,特异性、重复性及准确性均较好,并具有较高的灵敏度,可用于实验室内部对脊髓灰质炎病毒的突变比例测定,并可能成为脊髓灰质炎病毒体内或体外神经毒力评价的替代方法。

视网膜色素变性视紫红质基因突变位点的检测分析

九十年代初Ｄｒｙｊａ等发现部分视网膜色素变性（ＲＰ）的视紫红质基因第２３、５８、３４７密码子有异常突变，对此本文进行了检测分析。方法：通过ＰＣＲ法，分别扩增６２例ＲＰ的视紫红质基因第１和第５外显子片段，并用限制性内切酶ＭｂｏⅡ、ＤｄｅⅠ、ＭｓｐⅠ分别消化。结果：该６２例ＲＰ视紫红质基因第１和第５外显子片段无明显的丢失或延长，第２３、５８、３４７密码子也无异常点突变。结论：就本研究检测的这些ＲＰ病例的分子遗传缺陷不涉及上述密码子异常。

宫颈癌HSPC 238和RPS 27a基因检测的临床意义研究

目的检测HSPC 238和RPS 27a基因在宫颈癌中的表达并探讨其与宫颈癌的关系。方法选取2016年1月至2017年4月鄂东医疗集团黄石市中医医院手术治疗的宫颈癌患者92例,另取子宫良性病变切除的宫颈组织40例作为对照。荧光定量PCR检测HSPC 238和RPS 27a基因表达。结果宫颈癌组织HSPC 238基因的2-△Ct值为(0.086±0.014),显著低于对照组(0.215±0.032)(P<0.05);宫颈癌组织RPS 27a基因的2-△Ct值为(0.223±0.037),显著高于对照组(0.124±0.013)(P<0.05)。HSPC 238基因2-△Ct值在FIGOⅢ、Ⅳ期为(0.052±0.007),显著低于Ⅰ、Ⅱ期(0.122±0.023)(P<0.05);在有淋巴结转移组为(0.068±0.009),显著低于无淋巴结转移组(0.102±0.021)(P<0.05);在中、低分化组为(0.071±0.010),显著低于高分化组(0.106±0.018)(P<0.05)。RPS 27a基因2-△Ct值在FIGOⅢ、Ⅳ期为(0.253±0.042),显著高于Ⅰ、Ⅱ期(0.192±0.027)(P<0.05);在有淋巴结转移组为(0.265±0.044),显著高于无淋巴结转移组的(0.184±0.025)(P<0.05);在中、低分化组为(0.253±0.041),显著低于高分化组的(0.182±0.024)(P<0.05)。宫颈癌患者HSPC 238基因表达与RPS 27a基因表达呈显著负相关(r=-0.517,P=0.026)。结论宫颈癌患者中HSPC 238基因低表达和RPS 27a基因高表达,HSPC 238基因表达减低和RP S27a基因表达升高与宫颈癌的临床分期、有无淋巴结转移以及肿瘤分化程度密切相关。