RP2 基因的连锁分析定位

为寻找视网膜色素变性相关基因ＲＰ２所在的染色体位点，采用染色体Ｘｐ２１．１－ｐ１１．２区段的８个微卫星ＤＮＡ标记，对Ｘ－连锁ＲＰ（ＸＬＲＰ）家系进行连锁分析。家系ＪＧ的ＲＰ相关位点被定位于Ｘ染色体位标ＤＸＳ１０６８与ＤＸＳ１１２６之间。该区间可能是ＲＰ２所在部位，其跨度约５—７ｃＭ。可以认为该家系之视网膜色素变性病与ＲＰ２基因相关。该家系对寻找和克隆ＲＰ２基因非常有用。

菲律宾蛤仔RP2基因的克隆及组织表达分析

采用反转录PCR(RT-PCR)与c DNA末端快速克隆(RACE)法首次从壳长为28 mm的菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum外套膜中克隆出RP2基因(Gen Bank登录号:KF826881)。结果表明:RP2基因c DNA序列长度为1158 bp,包括62 bp的5'端非编码区,41 bp的3'端非编码区,开放阅读框1053 bp,编码350个氨基酸;推导的氨基酸序列具有TBCC(57aa^175aa)和CARP(65aa^102aa)保守结构域,并为非跨膜糖蛋白;经Blast同源性比较表明,菲律宾蛤仔RP2氨基酸序列与太平洋牡蛎Crassostrea gigas的相似性较高(56%),与高等哺乳动物、鸟类、鱼类、两栖类和节肢动物各模式动物之间的相似性为43%~53%,与非洲眼线虫Loa loa的相似性较低(33%);利用实时定量PCR技术检测RP2基因在菲律宾蛤仔不同组织中的表达,结果显示,RP2基因在菲律宾蛤仔雄性性腺中表达量最高,在鳃、水管和外套膜组织中次之,在斧足和闭壳肌中表达量极少,在雌性性腺中无表达。研究表明,RP2基因在菲律宾蛤仔各组织中的表达较为广泛,但不同组织的表达量存在明显差异,本研究结果可为无脊椎动物RP2基因的结构及其功能研究提供基础数据。

RP2突变体RP2-dser6的克隆和表达

视网膜色素变性 (RetinitsPigmentosa ,RP)是遗传性视觉损害以致失明的最常见原因之一 ,RP2是最近定位克隆的一个视网膜色素变性基因。为研究突变RP2蛋白与正常RP2蛋白的空间结构的差异及其对功能的影响 ,用突变的寡聚核苷酸引物自重组质粒 pETRP2PCR扩增得到突变的RP2 dser6基因 ,克隆至 pET11C载体中 ,转化大肠杆菌BL2 1菌株。重组子经序列分析鉴定后 ,在 37℃诱导RP2 dser6突变蛋白表达 ,5mmol/LIPTG诱导 8小时表达量约为 7 8%。所得结果为进一步研究RP致病机理奠定了基础。

两个家系中X连锁视网膜色素变性的RP2基因无义突变

目的 检测引起 2个家系产生X连锁视网膜色素变性的RP2基因突变。方法 根据RP2基因外显子和内含子DNA序列合成 8对引物 ,以人基因组DNA为模板 ,PCR扩增出包含RP2基因所有外显子的 8个片段。扩增产物纯化后直接测序。通过比较病人和正常人相应的DNA序列 ,检测基因突变位点。结果 在 2个家系中首次检测到RP2基因的同一个无义突变 35 8C→T。突变位于RP2基因的第 2外显子。它使该基因编码精氨酸的遗传密码CGA变为终止密码TGA ,引起发病。结论 该突变的检出有助于RP2蛋白的功能分析和X连锁视网膜色素变性的基因诊断。

一个视网膜色素变性家系的基因诊断和产前诊断

目的寻找一个视网膜色素变性家系的致病基因突变，并对该家系进行产前基因诊断。方法运用高通量测序对该家系的先证者173个遗传性眼病相关基因的序列进行检测，用Sanger测序法对高通量测序的结果进行验证，并对家系的其他患者与携带者进行致病基因突变的检测。结果 先证者存在X染色体连锁、与视网膜色素变性相关的RP2基因第2外显子c.570_571 ins GAAGATGCTGT插入突变，家系中的女性携带者均有该致病基因的杂合突变，男性患者均携带有该致病基因的半合子突变。结论该家系视网膜色素变性的遗传方式为X-染色体连锁隐性遗传，RP2基因第2外显子的c.570_571 ins GAAGATGCTGT插入突变可能为该家系视网膜色素变性的致病突变，可以根据该突变对家系中的携带者进行产前基因诊断。