重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响

目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。

PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素型别比较

目的比较PCR和反相被动乳胶凝集(RPLA)法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型的效果。方法对9株金黄色葡萄球菌分别用PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型,并以标准株作对照质控。结果两种方法的检测结果一致,9株金黄色葡萄球菌中有4株检出肠毒素A型,均未检出肠毒素B、C和D型。结论PCR法较适合基层实验室应用于检测金黄色葡萄球菌肠毒素。

重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)通过GATA3上调NIH3T3细胞ORMDL3表达

目的探索重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对小鼠NIH3T3细胞血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)表达的影响及相关调控机制。方法实时定量PCR和Western blot法分别检测rPla a2对NIH3T3细胞ORMDL3和GATA3 mRNA和蛋白水平的影响;通过干扰和过表达观察GATA结合蛋白3(GATA3)在rPla a2调节ORMDL3表达中的作用;通过双荧光素酶活性分析检测rPla a2和GATA3对ORMDL3基因启动子活性的影响。结果 rPla a2增强NIH3T3细胞ORMDL3基因启动子活性,并增加其mRNA水平和蛋白表达;同时增加GATA3 mRNA和蛋白表达。敲低GATA3抑制rPla a2对ORMDL3基因的诱导作用,过表达GATA3则可增强该诱导作用。结论 GATA3可介导rPla a2对NIH3T3细胞ORMDL3基因的转录调控。

反向间接胶乳凝集试验法检测粪便A型产气荚膜梭菌肠毒素的结果及评价

本文以１０种５２株供试菌分别与７个不同年龄组的健康人粪便混合，共配成３６４份模拟标本，采用反向间接胶乳凝集（ＲＰＬＡ）试验法与生物学试验法（小鼠致死试验、豚鼠皮肤血管透性因子试验，Ｖｅｒｏ细胞毒性试验）检测各标本中的Ａ型产气荚膜梭菌肠毒素（简称Ｃｐ－Ｅｎｔ）。除产气荚膜梭菌之外的其他菌种培养液２３８份标本（３４株），ＲＰＬＡ与生物学试验结果完全一致，均为阴性。产气荚膜梭菌１２６份标本（１８株）中有７０份标本的ＲＰＬＡ同生物学诸法完全一致地检出了Ｃｐ－Ｅｎｔ．有１株７份标本（ＣｐＮＣＴＣ８７９７）的ＲＰＬＡ为阳性，而各生物学试验却均为阴性，该菌株经ＰＣＲ检查证明确为肠毒素原性产气荚膜梭菌，表明ＲＰＬＡ比生物学试验法更灵敏。有５株（ＣｐＮＣＴｃ８２３８，ＣｐＮＣＴＣ１０６１１，ＣｐＮＣＴＣ１０６１４，ＣｐＮＣＴＣ１０６１２，ＣｐＬ－５２）３５份标本ＲＰＬＡ与各生物学试验结果均为阴性，但经ＰＣＲ检吉证明该５株菌均为肠毒素原性产气荚膜梭菌，后经超声波破碎菌体提取物对其中部分菌株进行试验的结果仍然显示了ＲＰＬＡ与生物学法的一致性。有２株（ＣｐＮＣＴＣ８６８６，ＣｐＮＣＴＣ８４４９）１４份标本的所有结果均为阴性。

60株金黄色葡萄球菌分泌表皮剥脱毒素A、B情况及与疾病的相关性研究

目的探讨脓疱疮和金葡菌烫伤样皮肤综合征(SSSS)两者病原菌分泌表皮剥脱毒素(ET)的情况及与疾病的相关性。方法分离脓疱疮和SSSS患者的病原菌并保存,应用反向乳胶凝集法测定金黄色葡萄球菌(SA)产生ET的型别。结果60株SA中,51株(85%)检测到有ET产生,其中表皮剥脱毒素A(ETA)阳性3株(5%),表皮剥脱毒素B(ETB)阳性8株(13%),ETA和ETB均阳性40株(67%)。30株来源于SSSS的SA,29株(97%)有ET产生;单纯ETB阳性者8株(27%);ETA和ETB均阳性21株(70%)。来源于脓疱疮的30株SA中,22株(73%)有ET产生;单纯ETA阳性3株(10%);ETA和ETB均阳性19株(63%)。其中来源于非大疱型脓疱疮的SA共15株,10株(67%)有ET产生。单纯ETA 1株(7%);ETA和ETB均阳性9株(60%)。来源于大疱型脓疱疮的SA共15株,12株(80%)有ET产生;单纯ETA 2株(13%);ETA和ETB均阳性10株(67%)。结论北京及其周边地区来自儿童脓疱疮和SSSS的SA以产ET菌为主,其中大部分可同时产生ETA和ETB。

乳胶凝集法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素

在比较应用不同乳胶和不同致敏方法致敏金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)IgG特点的基础上,我们尝试建立一种快速检测SE的反向间接乳胶凝集试验法(RPLA)。检测19株参考产毒金葡菌均为阳性,FRI 184参考不产毒株为阴性。并实际检测了87株临床分离金葡菌培养上清的产毒情况,其产毒率为85.1％,比双向免疫琼脂扩散法(DIGD)的检出率(65.5％)高出许多,与反向间接血凝法(RPHA)的检出率(77.0％)接近。产毒阳性菌株中,RPLA以检出产SEA、SEB、SEC和SED混合型居多(38/74),而DIGD(34/57)和RPHA(24/67)以检出产SEA型为主。结果表明,我们制备的乳胶试剂具有敏感(最低可检出纯SE 6～12ng/ml)、特异(与大肠杆菌等5种不产SE培养菌液不发生凝集及乳胶自凝)和快速(室温反应5～7h)的特点,可以满足实际需要。

反向胶乳凝集法检测血清中肌红蛋白

肌红蛋白(Mb)是骨骼肌与心肌细胞内一种含铁蛋白,分子量小(约17800),当肌细胞受损时,Mb 释放入血,并经肾排出.检测血清中Mb 是诊断急性心肌损伤的重要指标.检测方法常用RIA 法和ELISA 法,需时较长,不适于急诊应用.

以听觉口语法为例探讨学前听障儿童语言能力提升方法

目的探讨听觉口语法对学前语言发展落后听障儿童的功效。方法依据《修订学前儿童语言障碍评量表》选择10名3～5岁语言发展百分等级10以下的听障儿童，根据《听觉口语评估暨教学策略表》找出儿童语言发展落后的主因，并执行7～8个月的听觉口语介入课程，课程结束后施以同份测验，观察其语言变化情况。结果听障儿童语言测验后测原始分数显著高于前测[t（9）=-4．92，P〈0．01]；听觉口语课程介入时间在控制听觉年龄的干扰因素后，仍然对听障儿童的语言进步有独特贡献（△R2=0．41，P〈0．05）。结论听觉口语介入课程可有效地促进学前听障儿童的语言发展。