恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

目的探讨不同培养条件(RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液)对人恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用。方法从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液培养。CCK-8检测细胞增殖,细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察,免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1荧光强度。RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力。Transwell检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果建立的MPM细胞在RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液中传至第10代仍具有较好的活力,且MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1在细胞中均表达,MPM细胞在RPMI-1640培养液中活力较为稳定。CDKN2B在MPM细胞中低表达(P<0.05),过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和上皮间质转化(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。结论建立的MPM细胞可在RPMI-1640培养液中稳定传代,CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标。

RPMI 1640培养基体外培养结肠小袋纤毛虫的研究

试验旨在建立结肠小袋纤毛虫RPMI 1640培养方法,为进一步研究其生活史及致病机制奠定基础。研究不同淀粉含量、不同血清含量、不同初始pH及不同接种量下RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫的培养效果。结果发现,用RPMI 1640培养结肠小袋纤毛虫,最适宜的淀粉含量为30 mg/安瓿,血清含量为20%,pH为7.0;种群自然增长率和种群所达到的最高种群密度随接种量的不同而明显改变。RPMI 1640培养基可用于结肠小袋纤毛虫的体外培养。

RPMI1640,DMEM及不同生长因子对大鼠颌下腺细胞生长作用的观察

目的 观察RPMI 16 4 0、DMEM及不同生长因子对大鼠颌下腺细胞增殖能力的影响 ,探讨最有利于大鼠颌下腺细胞的培养方法。方法 在RPMI 16 4 0或DMEM培养基中分别加入一定浓度的FBS(胎牛血清 )、EGF(表皮生长因子 )、HC(氢化可地松 )、INS(胰岛素 ) ,观察纤维细胞和腺细胞在不同培养基中的增殖能力。结果 在含5 %FBS、10ng/mlEGF、5 μg/mlHC、5 μg/mlINS的DMEM培养基中 ,上皮细胞生长良好 ,在只含血清的RPMI 16 4 0培养基中 ,纤维细胞生长旺盛 ,上皮样细胞生长不良 ,在不含血清的培养基中所有细胞均生长缓慢。结论 含有 5 %血清、10ng/mlEGF、5 μg/mlHC及 5

MTT肿瘤药敏试验中培养基的选择

目的考察RPMI1640双琼脂培养基(R)对肿瘤细胞培养的选择性,选择适合的MTT法培养基。方法用R和肿瘤细胞选择性培养基(completeassaymedium,CAM)分别进行乳腺、肠、胃癌的MTT药敏试验。结果所试的3个癌种、20个药品总体来说在两种培养基中抑制率无统计学差异(P>0.05),单个药敏在乳腺癌中长春新碱、长春地辛和吡柔比星的CAM培养抑制率大于R培养(P<0.05),在肠、胃癌中无统计学差异。结论R培养肿瘤细胞的选择性和CAM相当,但鉴于R抑制成纤维细胞能力相对比CAM弱,R可能更适合含纤维细胞较少的癌种。

RPMI-1640和DMEM/F12培养基对大鼠颈环上皮细胞培养的比较研究

目的:比较大鼠颈环上皮细胞在不同培养基中的生长状况。方法:分离培养大鼠颈环上皮细胞,分别采用RPMI-1640和DMEM/F12两种培养基培养,用倒置显微镜观察细胞的生长状态,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果:倒置显微镜下,两组细胞在接种24 h后细胞大量贴壁并伸展,14 d时RPMI-1640组细胞呈现明显的凋亡现象,DMEM/F12组细胞生长状态良好。两种方法培养的颈环上皮细胞增殖活性差异有显著性意义(P﹤0.05)。结论:DMEM/F12培养基较RPMI-1640更适合颈环上皮细胞的贴壁及增殖。

猪附红细胞体体外培养体系的初步探讨

为了建立稳定可靠、简单易行、成本低廉的猪附红细胞体体外培养方法,从RPMI-1640、D-MEM、M-199 3种培养液中筛选出效果最好的基础培养基。在筛选出的基础培养基中分别添加20%、30%、40%的猪血清,筛选出培养效果最好的血清浓度。结果表明:以RPMI-1640基础培养基中添加40%的猪血清,在37℃5%的CO2环境下体外培养效果最好。该培养方法的建立,可为猪附红细胞体生物学特性以及药物防治等奠定基础。

RPMI-1640培养液加入VitC、庆大霉素体外培养恶性疟原虫效果观察

体外连续培养恶性疟原虫，观察培养液中加入VitC、庆大霉素对恶性疟原虫生长的影响。结果显示VitC、庆大霉素对恶性疟原虫的发育与繁殖影响不明显。

两种鼠血清与两种培养基对PK15细胞培养的比较

为比较研究DMEM培养基和RPMI-1640培养基对PK15细胞的培养效果,选择效果好的作为基础培养基,用大鼠血清和小鼠血清分别以不同量添加进行培养,用细胞显微病变(CPE)观察法和四甲基偶氮唑盐(MTT)测定法测定其对细胞生长的影响,为血药试验选择试验动物提供依据。结果表明:DMEM培养基较RPMI-1640培养基对PK15细胞的培养效果好,加5%大鼠血清或2.5%小鼠血清配制DMEM培养基的培养,对PK15细胞的培养生长无副作用,即两种血清的无毒安全浓度分别为5%和2.5%。

3种培养基中芽囊原虫生长状况观察

目的观察芽囊原虫在不同培养基中的生长状况,筛选合适的芽囊原虫培养方法。方法将10份芽囊原虫阳性粪便分别接种至Jone’s液、vitro液、1640 3种培养基中培养,选取生长情况良好、虫密度高的一份粪便传代培养后等量接种至3种不同的培养基中,每24 h计数虫体数量一次,连续观察10 d,并观察芽囊原虫的形态学变化和生长情况。结果10份粪便分别接种至3种培养基中培养,48 h后发现1640和Jone’s液中的虫密度高于vitro液。同一份粪便接种至3种不同培养基中连续观察10 d,结果表明3种培养基中虫体生长呈规律变化,均在接种后3、6、9 d出现生长高峰;Jone’s液中芽囊原虫密度最高。vitro液中观察到的虫体形态最清晰,且富有活力;Jone’s液中能观察到虫体多种繁殖状态。结论Jone’s液适于芽囊原虫的生长繁殖,可作为首选培养基;vitro液可作为观察芽囊原虫生长情况的首选培养基。